果冻中山梨酸的测定.doc

果冻中山梨酸的测定前言果冻是深受大家喜爱的食品，尤其是小朋友，但是最近媒体曝光了果冻食品原料食用明胶被不法厂商更换为廉价工业明胶后，大家对果冻也是“望而生畏”，那么究竟目前市场上的果冻质量如何？除了糖精钠的含量，防腐剂也是果冻品质的一个考察依据。苯甲酸及苯甲酸钠是目前我国使用的主要防腐剂之一。它属于酸性防腐剂，在酸性条件下防腐效果较好，特别适用于偏酸性食品（PH4.5-5.0）。我国食品添加剂使用卫生标准(GB27601996)规定：苯甲酸及苯甲酸钠在果冻中的最大使用量为0.2gkg。目前，对其进行检测主要方法有紫外可见分光光度法、气相色谱法和高效液相色谱法等。1、紫外可见分光光度法1.1 实验原理苯甲酸及苯甲酸钠在近紫外光区具有较强的吸收。通过实验证实，苯甲酸在230nm处具有最大吸收。另一方面，它在水中具有适当的溶解度，所以，可将标样和样品处理成水溶液，采用紫外分光光度计，通过标准曲线法而实现酸性食品中苯甲酸（钠）含量的测定。1.2 实验仪器和试剂1.2.1 仪器：T6普析紫外风光光度计1.2.2 试剂无水乙醚 (回收后可重复使用)、苯甲酸标液(1mg/ml)、5%NaHCO3溶液、5%NaCL溶液、 (1+2v)盐酸溶液、10%NaOH溶液1.3 样品市售果冻：喜之郎、蜡笔小新、cocon等品牌1.4 实验步骤1.4.1 样品的制备将样品捣碎，称取约10g，用10%NaOH溶液调节到碱性，定容至100ml，放置30min，离心，过滤，取10ml滤液于125ml分液漏斗中，加入(1+2v)盐酸溶液酸化，然后用乙醚萃取二次，每次ml，每次振摇min。合并乙醚层于另一干净分液漏斗中，用NaCL溶液洗涤二次，每次ml。然后蒸馏瓶回收乙醚，用20ml5%NaHCO3溶液溶解，定容至00ml备用。 1.4.2标准曲线的绘制取苯甲酸标准使用液0、1、2、4、6ml分别置于100ml容量瓶中，各加入5%NaHCO3溶液2ml，(1+2v)盐酸溶液2ml，加水至刻度，摇匀。放置15min,尽量让C02逸尽。用1cm吸收池于波长230nm处测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。2、气相色谱法2.1 实验原理采用无水乙醚提取样品中的山梨酸，反复振荡提取两次，经氯化钠酸性溶液盐析，无水硫酸钠脱水，旋转蒸发仪蒸干，丙酮定容后待测。用外标法定量，取1ul待测样，HP-FFAP石英毛细管柱内分离后进入FID检测器验证。结果表明100ug/ml浓度与峰面积有着良好的线性关系，相关系数大于0.999，山梨酸的检出限为1.0mg/kg，回收率为82.4%-92.0%，相对偏差为6.1%。此方法具有检出限低，检测快速，定量准确，操作性强，适用于山梨酸的检测工作。2.2实验仪器和试剂2.1.1 仪器岛津气相色谱仪，配置有自动进样器，附有FID检测器，选配Agilent的HP-FFAP(30m0.32mm0.25um)毛细柱。瑞士旋转蒸发仪、50ml的比色管。2.1.2 试剂丙酮（色谱纯）、无水乙醚（分析纯）、氯化钠（分析纯）、无水硫酸钠（分析纯）、浓盐酸、山梨酸、苯甲酸的标准品。2.3 试剂配制及前期处理6mol/ml的盐酸配制：用浓盐酸的浓度12mol/l，稀释至6mol/ml备用。5%氯化钠酸性溶液的配制：在5%的氯化钠溶液中，加入10ml的冰醋酸，使其呈酸性(PH=4.5)。无水硫酸钠（分析纯）:在700摄氏度下烧灼4小时，密封瓶中备用。2.4 GC条件选配毛细柱HP-FFAP（30m0.32mm0.25um），载气为高纯氮气（纯度99.9%），进样方式：分流进样（分流比=10:1）。进样器温度：200 检测器温度：250。柱温：150220（3min）,以30/min的速率升温。载气流速（氮气）：2.0ml/min。氢气流速：30ml/min。空气流速：400ml/min。2.5标准溶液、储备液的配制2.4.1山梨酸储备液的配制称取0.050g的山梨酸的标准品，于50ml的容量瓶中，用丙酮定容至50ml。浓度为1000ug/ml。2.4.2上机液的配制用移液管从山梨酸的储备液中，移取0.5ml于10ml的容量瓶中，配制山梨酸标准溶液，用丙酮定容至10ml，浓度为100ug/ml。上机液浓度100ug/ml，进样量为1.0ul,以标准液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，将上机液浓度稀释成40ug/ml、60ug/ml、80ug/ml、100ug/ml绘制标准曲线。2.5样品的测定称取(2.55.0)g的样品于50ml的比色管中，加入1ml的6mol/ml的盐酸，起酸化作用。每次加入约25ml的无水乙醚两次。振摇提取两次（注意在提取中放气）。合并两次提取液于另一支备好的50ml的