乙肝五项检测.doc

乙肝五项检测 乙肝五项检测 ELISAELISA 法 法 一 检测目的一 检测目的 乙型肝炎病毒标志物 HBsAgHBsAb HBeAg HBeAb HbcAb 检测 二 测定原理 二 测定原理 分别采用双抗体 抗原 夹心法和竞争法 HBsAg HBsAb 原理 采用单克隆抗 HBs HbsAg 包被反应板 加入待测标本 同 时加入多克隆抗 HBs HRP HBsAg HRP 当标本中存在 HBsAg HBsAb 时 该 HBsAg HBsAb 与包被抗 HBsAg HBsAb 结合并与抗 HBsAg HRP HbsAb HRP 结合形成抗 HBsAg HBsAb 抗 HBsAg HRP HBsAb HRP 复合物 加入 TMB 底物 产生显色反应 反之则无显色反应 HBeAg 原理 采用抗 HBe 包被反应板 加入待测标本 同时加入抗 HBe HRP 如待测样本中抗 HBeAg 时 就与包被抗 HBe 抗 HBe HRP 结合形成复合物 加入 TMB 底物产生显色反应 反之则无显色反应 HBeAb 原理 采用抗 HBe HBeAg 包被反应板 加入待测标本 同时加入 HBe HRP 与抗原形成竞争结合 如待测样本中抗 HBe 含量高 则抗 HBe HRP 与 HBeAg 结合少 加入 TMB 底物时显色淡 反之则显色深 HBcAb 原理 采用基因工程重组 HbcAg 包被反应板 加入待测标本 同时加入 HBc HRP 与抗原形成竞争结合 如待测样本中抗 HBc 含量高 则抗 HBc HRP 与 HBcAg 结合少 加入 TMB 底物时显色淡 反之则显色深 三 操作步骤 三 操作步骤 1 将试剂从冷藏室中取出 30 分钟后平衡至室温方可开启使用 2 用蒸馏水将 PBST 浓缩液 20 倍稀释 作为洗液 3 将微孔条固定于支架上 按序编号 4 按具体使用试剂盒说明书加样 孵育 洗板 显色 9 用酶标仪读数 取波长 450nm 先用空白调零 然后读取各孔 OD 值 四 结果判断 四 结果判断 样品 OD 值 阴性对照平均 OD 2 1 判断为阳性 否则为阴性 阴性对 照 OD 值低于 0 05 作 0 05 计算 高于 0 05 按实际 OD 值计算 五 注意事项 五 注意事项 1 冷藏环境中取出的试剂盒应在室温平衡 30 分钟后方可使用 2 使用试剂前摇匀 并弃去 1 2 滴后垂直滴加 3 结果判定必须在反应终止后 10 分钟内完成 4 不同批号的试剂不可混用 5 待测标本不可用 NaN 防腐 如需稀释标本 请用小牛血清稀释 6 本试剂盒应视为有传染性物质 请按传染病实验室检查规程处理 六六 生物安全防护 生物安全防护 1 在检测前 所有标本均应视为 阳性 标本即生物危险品 2 如操作中不慎洒落血液 要及时对污染台面消毒处理 3 操作前一定要做好自身防护 穿白大衣 带口罩 白帽 胶皮手套 4 HBV 对低温 干燥 紫外线 70 乙醇均有耐受性 煮沸 100 10 分钟 高压 蒸汽灭菌 121 15 分钟或干热 160 2 小时均可灭活 HBV 5 10g L 次氯酸钠 30 分钟 1 4000 福尔马林 37 72 小时 0 5 过氧乙酸 15 分钟均可破坏其传染性 七 临床意义 七 临床意义 乙肝病毒血清标志物的临床意义 即常说的乙肝五项或称两对半 序号 HBsAg 表面抗原 抗 HBs HBsAb 表面抗体 HBeAg E 抗原 抗 HBe HBeAb E 抗体 抗 HBc HBcAg 核心抗体 临床意义 出现率 9 9 种常见模式种常见模式 1 过去和现在未感染过 HBV 1 30 2 1 既往感染未能测出抗 HBs 2 恢复期 HBsAg 已消 抗 HBs 尚未出 现 3 无症状 HBsAg 携带着 5 10 3 1 既往感染过 HBV 2 急性 HBV 感染恢复期 3 少数标本仍有传染 性 HBV 感染已过 抗 HBs 出现前的窗口期 2 10 4 1 注射过乙肝苗有免疫 2 既往感染 假阳性 1 6 5 急性 HBV 感后康复 0 5 5 6 1 急性 HBV 感染 2 慢性 HBsAg 携带者 3 传染性弱 10 15 7 既往感染 仍有免疫力 HBV 感染 恢复期 5 15 8 1 急性 HBV 感染趋向恢复 2 慢性 HBsAg 携带者 3 传染性弱 即俗称的 小三阳 5 10 9 急性或慢性乙型肝炎感染 提示 HBV 复制 传染强 即俗称的 大三 阳 30 40 1616 种少见模式种少见模式 10 1 急性 HBV 感染早期 急性 HBV 感染潜伏期 2 慢性 HBV 携带者 传染性弱 11 1 慢性 HBsAg 携带者易转阴 2 急性 HBV 感染趋向恢复 12 急性 HBV 感染早期或慢性携带者 传染性强 13 1 急性 HBV 感染趋向恢复 2 慢性携带者 14 1 亚临床型 HBV 感染早期 2 不同亚型 HBV 二次感染 15 1 亚临床型 HBV 感染早期 2 不同亚型 HBV 二次感染 16 亚临床型或非典型性感染 17 亚临床型或非典型性感染 18 亚临床型或非典型性感染早期 HBsAg 免疫复合物 新的不同亚型感 染 19 1 非典型性急性感染 2 见于抗 HBc 出现之前的 感染早期 HBsAg 滴度低而呈阴性 或呈假阳性 20 非典型性急性感染 21 急性 HBV 感染中期 22 HBV 感染后已恢复 23 非典型性或亚临床型 HBV 感染 24 非典型性或亚临床型 HBV 感染 25 急性 HBV 感染趋向恢复 7 7 种罕见模式种罕见模式 26 一种亚型的 HBsAg 及异型的抗 HBs 常见 血清从 HBsAg 转化 为抗 HBs 的过程 少见 27 28 29 30 31 32 乙肝五项检测乙肝五项检测 胶体金法胶体金法 一 检测目的一 检测目的 乙型肝炎病毒标志物 HBsAgHBsAb HBeAg HBeAb HbcAb 检测 二 测定原理二 测定原理 HBsAg HBsAb HBeAg 均采用双抗体 原 夹心法原理 HBeAb HBcAb 采用竞争法原理 三 操作步骤三 操作步骤 具体方法参照试剂盒说明书 举例如下 在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明书 使用前将试剂板和血清 血浆标 本恢复至室温 20 30 从原包装铝箔袋中取出试剂盒 注意 在扣开铝箔前应先 恢复至室温 在 l 小时内应尽快地使用 1 将试剂盒置于干净平坦的台面上 用吸管吸取血清 血浆标本 逐滴垂直加 入于试剂板的五个加样子 L 中 每孔 2 3 滴 2 加样后立刻开始计时 等待红色条带的出现 在 15 分钟时读取测试结果 在 20 分钟后读取的结果无效 四 结果判定四 结果判定 由于前三个项目 HBsAg HBsAb HBeAg 使用双抗体 原 夹心法原理 后两个项日 HBeAb HbcAb 使用竞争法原理 因此前一 个项日与后两个项目判读方法是不同 的 请注意区别 l HBsAg HBsAb HbeAg 1 阳性 两条红色条带出现 一条于测试区 T 内 另一条位于质控区 C 阳性结果表明 标本中含有待测物质 2 阴性 一 质控区 c 出现一条红色条带 在测试区 T 内无红色条带出现 阴 性结果表明 标本中检测不出待测物质 3 无效 质控区 c 未出现红色条带 表明不正确的操作过程或试剂盒已经变 质损坏 在此情况下 应再次仔细阅读说明书 并用新的试剂盒重新测试 如果问 题仍然存在 应立即停止使用此批号产品 并与当地供应商联系 4 注意 在进行 HBsAg HBsAb HbeAg 测试时 测试区 T 内的红色条带可显 现出颜色深浅的现象 只要在规定的观察时间内 不论该条带颜色深浅 即使只有 非常弱的色带也应该判为阳性结果 2 HBeAb HBcAb 1 强阳性 仅质控区 c 出现一条红色条带 在测试区 T 内无红色条带出 现 阳性结果表明 标本中含有待测物质 2 弱阳性 质控区 c 出现一条红色条带 在测试区 T 内有非常弱的红色 条带出现 阳性结果表明 标本中含有待测物质 3 阴性 一 两条红色条带出现 一条于测试区 T 内 另一条位于质控区 c 阴性结果表明 标本中检测不出待测物质 4 无效 质控区 c 未出现红色条带 表明不正确的操作过程或试剂盒已经变 质损坏 在此情况下 应重新测试 如果问题仍然存在 应立即停止使用此批号产 品 并与当地供应商联系 五 注意事项五 注意事项 l 请控制判读时间 测试结果应在测定开始后 20 分钟左右读取 30 分钟后读判定 无效 2 乳胶法乙肝五项检测试剂板 血清 血浆 只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物 的存在 不能确定血样中病毒的含量 3 由于在技术上和操作上可能出现的失误 同时也由于标本中存在的干扰物质 检测结果可能有错误 对可疑结果应作相应的进一步检测 六 生物安全防护六 生物安全防护 1 在检测前 所有标本均应视为 阳性 标本即生物危险品 2 如操作中不慎洒落血液 要及时对污染台面消毒处理 3 操作前一定要做好自身防护 穿白大衣 带口罩 白帽 胶皮手套 4 HBV 对低温 干燥 紫外线 70 乙醇均有耐受性 煮沸 100 10 分钟 高压蒸 汽灭菌 121 15 分钟或 f 热 160 2 小时均可灭活 HBV 5 10g L 次氯酸钠 30 分钟 1 4000 福尔马林 37 72 小时 O 5 过氧乙酸 15 分钟均可破坏其传染性 七 临床意义七 临床意义 1 HBsAg 阳性 血清 HBsAg 阳性 表示受检者处于 HBV 的感染状态 2 HBsAb 阳性 多见于乙型肝炎处于恢复期 或既往曾感染过 HBV 现在已恢复 而且对 HBV 有一定的免疫力 同时 HBsAb 阳性是对接种乙肝疫苗后产生效果 即接 种免疫成功的指标 3 HBeAg 阳性 见于 HBV 感染的早期 表示血液中含有较多的病毒颗粒 提示肝 细胞有进行性损害和高度传染性 乙型肝炎加重之前 HBeAg 即有升高 有助于预测 肝炎病情 HBeAg 持续阳性 易转为慢性乙型肝炎 HBeAg 和 HBsAg 均为阳性的孕妇 可以将乙型肝炎传播病毒给新生儿 其感染的阳性率为 70 90 4 HBeAb 阳性 多见于 HBeAg 转阴的检验对象 意味着 HBV 部分被清除或抑制 病毒复制减少 传染性降低 部分慢性乙型肝炎 肝硬化 肝癌检验对象可检出 HBeAb 在 HBsAg 和 HBsAb 阴性时 如能检出 HBeAb 和 HhcAb 也能确诊为乙型肝炎 近期感染 5 HBcAb IgG 阳性 高滴度表示正在感染 低滴度则是既往感染过 HBV 的指标 具有流行病学的意义 6 HBcAb IgM 阳性 是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标 并提示检 验对象血液有较强传染性 同时 HBcAb IgM 阳性还见于慢性活动性乙型肝炎 乙肝表面抗原检测乙肝表面抗原检测 胶体金法胶体金法 一 检测目的一 检测目的 乙型肝炎病毒标志物 HBsAg 检测 二 测定原理二 测定原理 HBsAg 采用双抗体 原 夹心法原理 三 操作步骤三 操作步骤 具体方法参照试剂盒说明书 举例如下 在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明书 使用前将试剂板和血清 血浆标 本恢复至室温 20 30 从原包装铝箔袋中取出试剂盒 注意 在扣开铝箔前应先 恢复至室温 在 l 小时内应尽快地使用 1 将试剂盒置于干净平坦的台面上 用吸管吸取血清 血浆标本 逐滴垂直加 入于试剂板的五个加样子 L 中 每孔 2 3 滴 2 加样后立刻开始计时 等待红色条带的出现 在 15 分钟时读取测试结果 在 20 分钟后读取的结果无效 四 结果判定四 结果判定 HBsAg 1 阳性 两条红色条带出现 一条于测试区 T 内 另一条位于质 控区 C 阳性结果表明 标本中含有待测物质 2 阴性 一 质控区 c 出现一条红色条带 在测试区 T 内无红色条带出现 阴 性结果表明 标本中检测不出待测物质 3 无效 质控区 c 未出现红色条带 表明不正确的操作过程或试剂盒已经变 质损坏 在此情况下 应再次仔细阅读说明书 并用新的试剂盒重新测试 如果问 题仍然存在 应立即停止使用此批号产品 并与当地供应商联系 4 注意 在进行 HBsAg 测试时 测试区 T 内的红色条带可显现出颜色深浅的 现象 只要在规定的观察时间内 不论该条带颜色深浅 即使只有非常弱的色带也 应该判为阳性结果 五 注意事项五 注意事项 l 请控制判读时间 测试结果应在测定开始后 20 分钟左右读取 30 分钟后读判定 无效 2 胶体金法乙肝表面抗原检测试剂板 血清 血浆 只是定性的筛选乙肝病毒血清 标志物的存在 不能确定血样中病毒的含量 3 由于在技术上和操作上可能出现的失误 同时也由于标本中存在的干扰物质 检测结果可能有错误 对可疑结果应作相应的进一步检测 六 生物安全防护六 生物安全防护 1 在检测前 所有标本均应视为 阳性 标本即生物危险品 2 如操作中不慎洒落血液 要及时对污染台面消毒处理 3 操作前一定要做好自身防护 穿白大衣 带口罩 白帽 胶皮手套 4 HBV 对低温 干燥 紫外线 70 乙醇均有耐受性 煮沸 100 10 分钟 高压蒸 汽灭菌 121 15 分钟或 f 热 160 2 小时均可灭活 HBV 5 10g L 次氯酸钠 30 分钟 1 4000 福尔马林 37 72 小时 O 5 过氧乙酸 15 分钟均可破坏其传染性 七 临床意义七 临床意义 HBsAg 阳性 血清 HBsAg 阳性 表示受检者处于 HBV 的感染状态 HBsAg 也可 从许多乙肝检验对象体液和分泌物中测出 如唾液 精液 乳汁 阴道分泌物等 沙眼衣原体沙眼衣原体 IgGIgG 抗体检测 胶体金法 抗体检测 胶体金法 一 检测目的一 检测目的 用于检测试验血清中的沙眼衣原体抗体 IgG 二 检验原理 二 检验原理 用沙眼衣原体抗原固相硝酸纤维素膜 应用渗滤式间接法原理 检测血清中沙眼 衣原体抗体 IgG 三 样本要求三 样本要求 1 血清样品不能溶血 应为新鲜血清或 2 8 条件保存不超过一周 2 高脂血症血清不能使用 四 检验方法四 检验方法 1 取出试剂盒 室温平衡 20 30 分钟 1 滴入洗涤液一滴于反应板中央孔中 待液体将膜完全湿润 2 加入待测血清 150 l 若用样品吸管则加 4 滴 于反应板孔中 待液体充分 吸入 3 滴加三滴金标液于反应板孔中 待液体充分吸入 4 渗入三滴洗涤液于反应板孔中 待液体充分吸入 五 结果解释 五 结果解释 阳性 反应板孔中 C 端出现红色圆斑 T 端出现红色圆斑 为沙眼衣原体抗体 IgG 阳 阴性 反应板孔中 C 端出现红色圆斑 T 端不出现红色圆斑 为沙眼衣原体抗体 IgG 阴 失效 反应板孔中 C 端不出现红色圆斑 或 C 端 T 端均不出现红色圆斑 为试剂 盒失效 六 检验方法的局限性 六 检验方法的局限性 1 本试剂试验仅用于检测沙眼衣原体抗体 IgG 而非直接检测沙眼衣原体抗原 因 而阳性结果并不能确诊是沙眼衣原体感染 对患者状况的诊断应结合患者临床体 征与症状和试验结果的综合分析 2 抗体含量低的血清样品 不能被检测出来是可能的 部份沙眼衣原体感染的 患者 不产生抗体或产生少量的抗体 此时 可能显示阴性结果 3 本试剂不能确定沙眼衣原体抗体 IgG 的确切含量 七 注意事项七 注意事项 1 必须使用新鲜血清或 2 8 放置 3 天内的血清测定 少数标本 高脂血 高胆 红素 溶血 背景轻微偏深 一般不影响结果判断 2 加有抗凝剂 促凝剂的标本渗滤速度缓慢 底色太红 影响结果判读 建议 不使用 3 加液体的各步操作之间不得有时间间隔 同一步骤中所加液体应迅速一次加 入后等其渗入 4 超过规定时间出现的结果无效 5 质控点的强弱并不代表试剂质量的优劣 6 不同产品 同产品不同批次之间的金标液 洗涤液严禁混用 7 解脲支原体抗体 人型支原体抗体 淋球菌抗体 类风湿因子对试剂盒检测 结果基本无影响 八 临床意义八 临床意义 沙眼衣原体感染病人血清中可检出特异性抗体 lgM 出现较早 持续约 1 个 月 其阳性提示近期感染沙眼衣原体 可作为早期诊断的指标 lgG 出现较晚 持续时间较长 可用于回顾性诊断和流行病学调查 阳性 见于沙眼 成人包涵 体结膜炎 男性尿道炎 女性宫颈炎和输卵管炎 性病淋巴肉芽肿等 梅毒血清学筛查梅毒血清学筛查 一 乳胶层析法一 乳胶层析法 1 检测目的 梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种慢性性传播性疾病 当病原体侵入人体后 可刺 激人体的免疫系统产生抗梅毒螺旋体的特异性抗体 采用胶体金免疫检测技术 能 够快速检测到人血清 血浆 中的梅毒螺旋体抗体 为临床提供诊断和预防 适用于 性病 高危人群 无偿献血员现场的初筛 2 检验原理 本品采用胶体金免疫检潮技术和层析原理 定性检测血清 或血浆 样本中的梅毒 螺旋体抗体 3 样本要求 1 静脉的血清 血浆样本必须在无菌条件下 并避免样品溶血 2 血清和血浆样品 EDTA 抗凝 收集后 7 天内检测 样品须放在 2 8 保 存 如果大于 7 天则须冷冻保存 4 检验方法 在进行测试前必须先完整阅读使用说明书 使用前将试剂盒和待测样本恢复至室 温 8 25 1 从原包装中取出试剂 在 1 小时内应尽快的使用 2 将试剂置于干净平坦的台面上 在加样孔 S 内使用微量加样器加入 100 u l 样本 3 20 2 分钟观察并记录试验结果 5 结果判断 1 阳性 试剂盒在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带 如果检测区的紫 红色条带降约可见 建议对该样本重复试验 并使用其他方法确认 2 阴性 试剂盒只在对照区位置出现一条紫红色条带 3 失效 不出现紫红色条带或仅在检测区出现一条紫红色条带 表明不正确的 操作过程或试剂盒已变质损坏或者是样本中抗体的含量过高 在此情况下 应再 次仔细阅读说明书 并将待测样本稀释后甩新的试剂盒重新测试 如果问题仍然 存在 应立即停止使用此批号产品 并与当地供应商联系 注意 测试区注意 测试区 T T 内的紫红色条带可呈现颜色深浅的现象 但是 在规定的观察时内的紫红色条带可呈现颜色深浅的现象 但是 在规定的观察时 间内 不论该色带颜色深浅 即使只有非常弱的色带也应判定为阳性结果 间内 不论该色带颜色深浅 即使只有非常弱的色带也应判定为阳性结果 6 6 注意事项 1 本试剂盒仅用于体外诊断试验 仅用于人血清 浆 其它体液和样品可能 得不到准确的结果 2 样本的加样建议使用微量加样器准确加入 3 试验环境应保持一定湿度 60 以下 避风 避免在过高温度下进行试验 4 试剂从包装中取出后 应尽快进行试验 避免放置于空气中过长时间 导致 受潮 5 试剂盒可在室温下保存 谨防受潮 低温下保存的试剂应平衡至室温方可使 用 6 对于那些含有感染源和怀疑含有感染源的物质应有合适的生物安全保证程序 下列为有关注意事项 1 带手套处理样本和试剂 2 不要用嘴吸样 3 不可在处理这些物品时吸烟 进食 喝饮料 美容和处理隐形眼镜 4 用消毒剂对溅出的样本或试剂进行消毒 5 按当地的有关条例来消毒和处理所有样本 试剂和潜在的污染物 6 试剂盒各成份在正当处理和保存的情况下直至效期都保持稳定 不能使用过 效期的试剂盒 7 检测线颜色的深浅的程度与样品中抗体的滴度没有一定的必然联系 22 分钟 后判读 结果无效 8 任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度的抗体存在 所以阴性结果 任何时候不能排除台有梅毒螺旋体暴露和感染的可能 本品检测阳性样本 需用 其它方法作进一步的确认 三 临床意义 三 临床意义 梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种性传播疾病 STD 病原体为苍白密螺旋体 TP 俗称梅毒螺旋体 1 由于梅毒只感染人类 因而人是梅毒的唯一传染源 梅 毒螺旋体对人体的黏膜及皮肤具有亲和力 故可通过黏膜或有破损的皮肤进入人 体 经淋巴系统及血液循环 播散至全身 几乎可以累及全身各器官和组织 人 体感染梅毒后 4 6 月就能在体内检测到特异性抗体 近年来 梅毒在我国的发 病率呈逐年增加的趋势 1 选择敏感性及特异性高的诊断方法 对该病的防治具 有重要意义 促甲状腺素检测 电化学发光法 促甲状腺素检测 电化学发光法 一 检测用途一 检测用途 用免疫学方法定量测定人血清或血浆中的促甲状腺激素 thyrotropin TSH 含 量 二 检测原理二 检测原理 采用双抗体夹心法原理 反应分三个步骤进行 第1步 50 l 标本 生物素化的抗TSH单克隆抗体和钌 Ru 标记的抗TSH单克 隆抗体混匀 形成夹心复合物 第2步 加入链霉亲和素包被的微粒 让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲 和素间的反应结合到微粒上 第3步 反应混和液吸到测量池中 微粒通过磁铁吸附到电极上 未结合的物质 被清洗液洗去 电极加电压后产生化学发光 通过光电倍增管进行测定 检测结果由机器自动从标准曲线上查出 此曲线由仪器通过2点定标校正 由从试 剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得 三 样品的收集和保存三 样品的收集和保存 血清 按标准常规方法采集 血浆 肝素锂 钠 铵 E