ATP生物发光法在微生物检验中的应用.doc

文字差，语病及不通顺之处较多，未达到发表要求ATP生物发光法在微生物检验中的应用 陈万里邹平县临池中心卫生院山东滨州256220【摘要】ATP生物发光检验法可以广泛的运用在微生物检验中，特别是对食品检验上运用较为广泛，其检测材料的成本不断降低，操作便捷，检验结果有效率高，从而适应性广。针对其灵敏度不佳以及受盐分或者其他物质的感染，也可以采用滤过法与前培养方式来有效处理，降低检验的干扰性。【关键词】ATP生物发光法；微生物检验；灵敏度人们的生命与健康受到众多微生物的污染影响，因此需要通过有效的方式对微生物做有效检验，而在国际上的检测方式多采用PCA方式，但是该方法需要持续48h的37摄氏度的环境下进行，操作中有较为繁琐的流程，无法得到快速检验的效果。而ATP生物发光检验法其操作更为灵敏、快捷、简单，可以有效而广泛的运用在食品等微生物污染检测中。1 ATP生物发光检验法的操作原理与具体流程在活的生物体内可以有效的发现ATP的存在，活菌中也有ATP存在。如果细菌衰亡之后，会通过细胞的内酶影响作用而导致ATP受到快速的分解。因此通过检验的ATP所含水平可以有效的检测出活菌的数量。而ATP生物发光检验方法其具体操作步骤可以分为以下几个部分：棉拭做检验对象取样，样品萃取，加入荧光素及其酶混合药物，检测生物发光总量，得出ATP浓度与活菌数量。由于细菌表面会被膜与壁所保护，因此如果不对其样品做处理则无法得到准确的ATP的浓度值。需要将ATP的提取药剂与样品做融合后充分的打开细胞壁与膜的包裹，而提取APT的提取试剂的基质为细胞表层的活性剂，而后通过荧光素等发光剂来有效的显现ATP。而本检验方法由于过去其中荧光素等试剂成本高而导致检验方式无法得到广泛普及，而近年来由于相关生存技术升级，其价格得到较大的下降，从而让该检验得到有效的推广。2 ATP生物发光检验法的问题解决对策对于ATP生物发光检验法的优缺点分析上，优点方面主要为其操作较为迅速，随时需要可以随时进行，同时可以使用在较广的范围，几乎涵盖微生物总体范围，而操作中由于自动仪器的操作让流程进行更为迅速，减少的人工误差，结果较为科学等。而该方式的缺点在于，其灵敏度虽然较高，但是也有部分情况会无法达到高要求标准，同时在检测中会受到游离的ATP与体细胞受到影响，同时盐分会对检验结果形成影响，在检验上也无法做细菌鉴定。如果检验上缺点问题不影响检验需要，采用该方式是较为合适的选择。ATP生物发光检验方法会存在灵敏度无法符合卫生学标准，将样本中的细菌含量要求在1000个/ml以上，但是会造成灵敏度不符合要求。同时在检验中，会受到非细菌性的ATP与其他干扰因素影响，其中在食物中会由于动植物的体细胞会有游离的ATP，从而导致测定的指数升高。过滤操作中可以运用滤膜将样本做过滤，固体状态的粒子或者细菌粒就可以停留在滤膜，而样本的过滤更多，滤膜上集聚的细菌会相对增多，进而有效的对细菌做提炼，提升检验灵敏度。过滤处理可以有效的降低ATP生物发光检验方式中游离体与其他物质的感染，其中之所以体细胞可以有效的被滤膜控制，是由于将针对提取体细胞的ATP试剂，从而有效的释放ATP，将滤膜做清洗后可以让非细菌的ATP以及影响物做清除。如果ATP在细胞内的含量高于游离情况下，可以采用针对性试剂将游离的ATP做分解，而后将滤膜取出后就可以测定细菌性ATP。对于活菌量较少且固体成分较多的样本中，过滤法处理已经不能满足需求，还需要做前培养，让其细菌繁殖到可测定的状态。3ATP生物发光检验法实际应用首先该方式可以有效的运用在水中微生物的检验。可以采用滤膜方式将水中的微生物做过滤的收集，再添加发光剂与缓冲剂来对荧光指数做检测。而在实际操作中发现，在滤膜孔径为0.45与0.22uL的滤膜在实际的细菌细胞截取比例上差距较小，但是采用0.45ul的滤膜在操作上更为快速，因此一般情况多采用0.45ul滤膜，其操作快捷，成本消耗小，同时较好的检验出微生物计数。在乳品的检验中，可以在生乳中添加PBS缓冲剂做样本稀释，稀释到20倍标准，选取50ul混合一定体细胞分解试剂，同时加入2滴的细菌分解剂在滤膜上，同时还要加入50ul的酶反应试剂，而后做3次的反复吹吸来对荧光指数做检测。在肉类检验中，由于生肉食物中会存在较多的体细胞ATP造成的检验结果干扰，因此需啊哟将样本中的该物质做去除，具体方式运用0.2%TritionX-100与015%的apyrase的混合来对体细胞ATP做清除，而后添加3%三氯乙酸做均匀混合，需要做1分钟的混摇，做离心处理后选取上清做检验，而整个操作流程需要15分钟。在熟肉食品中，由于非细菌ATP浓度少，因此对检验结果影响较小，可以直接减少体细胞ATP的清除流程而直接做发光检验。在物体表面的检测上多运用在餐具表面的污染物检验。一般在检验的范围中，做ATP释放液加入2滴，将棉拭做样本的均匀涂抹，而后取100cm2做样本面积。在棉拭上添加ATP释放液6滴，做ATP提取。而后将棉拭头部做提取液的检验，而后做荧光仪做发光指数测定。4结束语在ATP生物发光法检验，可以广泛的运用在食品及食物相关用品上的检验。相关操作上，具体检验情况会选择不同的具体检验操作方式，例如不同的滤网选择，不同试剂使用以及相关前培养的运用。尽可能的得到检验的快速、准确，降低干扰因素对结果的影响，同时节省检验成本，这样才能有效的广泛推广。参考文献 1唐倩倩,叶尊忠,王剑平,盖铃,应义斌,李雁斌. ATP生物发光法在微生物检验中的应用J.食品科学,2008,06:460-465.2曹利蓉,张伟,晁蕊. ATP生物发光法在铁路站车食品器具卫生学检验中的应用J.铁道劳动安全卫生与环保,2004,02:86-87.3侯玉柱,田