HPLC检测饮料中食品添加剂.doc

HPLC检测饮料中食品添加剂摘要：本报告建立同时检测食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠3种食品添加剂的高效液相色谱分析方法。3种食品添加剂在16min内达到基线分离。在0.020.32mg/mL范围内线性关系良好，相关线性系数R2为0.999950.99997。同时应用高效液相色谱法对橙汁、碳酸饮料中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的含量进行检测，检测快速，结果准确可靠。实验部分：1. 仪器仪器：LabTech LC600 高效液相色谱仪色谱柱：LabTech Kromasil C18 （2504.6mm i.d.5.0m）2. 药品及试剂：食品添加剂标准品（山梨酸、苯甲酸、糖精钠）：1.00mg/mL，国家标准物质中心甲醇：色谱纯乙酸铵溶液：取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000mL，经微孔滤膜过滤氨水（1+1）：氨水与水等体积混合3. 实验内容3.1. 标准溶液制备取山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准原液，浓度均为1.00mg/mL。混合标准使用液：分别准确吸取不同体积山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准原液，将其稀释为山梨酸、苯甲酸、糖精钠含量分别为0.000mg/mL、0.020mg/mL、0.040mg/mL、0.080mg/mL、0.160mg/mL、0.320mg/mL的混合标准使用液。3.2. 液体样品前处理：橙汁、碳酸饮料液体样品：称取10g样品（精确至0.001g）于25mL容量瓶中，用氨水（1+1）调节pH至近中性，用水定容至刻度，混匀，经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。各样品均3次平行实验。3.3. 色谱条件： 流动相： 纯甲醇+（20mmol/L乙酸铵水溶液）=5:95 流速： 1.0 mL/min 色谱柱： LabTech C18 柱， 4.6mm*250mm，5m 检测波长：230nm 进样量： 10L 柱温： 353.4. 测定 取混合标准使用液和样品处理液各10L注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间为依据定性，以其峰面积求出样液中被测物质含量，供计算。4. 实验结果4.1. 3种食品添加剂的分离分析根据实验条件3.3分离分析3种食品添加剂标准品，图1为山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准溶液（0.04mg/mL）分析色谱图，根据出峰时间判断药品依次为苯甲酸、山梨酸、糖精钠，理论塔板数均达到14000以上。图1： 苯甲酸、山梨酸、糖精钠（0.04mg/mL）高效液相色谱图序号名称保留时间（min）浓度(mg/mL)峰分离度R1苯甲酸9.4550.0410.902山梨酸13.7900.044.143糖精钠15.8500.040.004.2. 标准曲线的绘制将浓度分别为0.000mg/mL、0.020mg/mL、0.040mg/mL、0.080mg/mL、0.160mg/mL、0.320mg/mL的混合标准使用液，按3.3的色谱条件，各吸取10L进样分析，根据各组分的响应峰面积与相应的质量浓度进行线性回归，绘制标准曲线，相关线性系数均达到0.99995以上。各组分曲线线性关系和相关系数见下表。表1 苯甲酸、山梨酸、糖精钠线性方程及相关系数（n=6）食品添加剂线性范围（mg/mL）线性方程相关系数R2苯甲酸0.000-0.320 Y=3.032e+4+2.931e+7X0.999952山梨酸0.000-0.320Y=6.1e+4+5.894e+7X0.999952糖精钠0.000-0.320Y=3663+1.959e+7X0.999970 苯甲酸标准曲线图 山梨酸标准曲线图 糖精钠标准曲线图图2 苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准品标准曲线4.3 样品分析结果4.3.1将实验3.2处理好的橙汁液体样品根据条件3.3进行分析,样品检测平行三次1#、2#、3#，分别重复进样三次，样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠检测浓度及样品中含量的计算值见下表。表2 橙汁中苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量样品浓度计算1#浓度(mg/mL)2#浓度(mg/mL)3#浓度(mg/mL)平均浓度(mg/mL)样品含量（mg/g）苯甲酸0.00020.00040.00020.00030.00075山梨酸00.00020.00020.00010.00025糖精钠00.00010004.3.2将实验3.2处理好的碳酸饮料液体样品根据条件3.3进行分析,样品检测平行三次1#、2#、3#，分别重复进样三次，样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠检测浓度及样品中含量的计算值见下表。表3 碳酸饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量样品浓度计算1#浓度(mg/mL)2#浓度(mg/mL)3#浓度(mg/mL)平均浓度(mg/mL)样品含量（mg/g）苯甲酸0.05670.05650.05660.05660.1415山梨酸00000糖精钠00000橙汁、碳酸饮料分析色谱图如图3所示：汁分析色谱图 碳酸饮料分析色谱图图3 橙汁、碳酸饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠分离分析色谱图橙汁碳酸饮料序号名称保留时间（min）浓度(mg/mL)名称保留时间（min）浓度(mg/mL)1苯甲酸9.5880.0003苯甲酸9.3900.05662山梨酸13.9580.0001山梨酸13.79303糖精钠16.0820糖精钠15.7700实验结论：本实验采用HPLC法16min内将苯甲酸、山梨酸、糖精钠3种食品添加剂完全分离。在0.020.32mg/mL范围内线性关系良好。采用该法对橙汁、碳酸饮料中山梨