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PAX1甲基化 指导教师 汇报人 汇报时间 1 CONTENTS 二 宫颈组织中PAxl甲基化水平 三 联合应用PAxl甲基化在官颈癌筛查中的作用 四 PAX1基因甲基化定量检测在宫颈癌癌前病变诊断中的应用价值 一 PAX1介绍 五 数据处理 六 参考文献 2 PAX1介绍 PART01 3 一 PAX1介绍 PAxl隶属于配对盒基因家族 是一种重要的转录调控因子 PAxl通过调控细胞增殖 诱导细胞定向迁移等参与胚胎发育过程中重要器官的形成 新近研究表明 PAxl在宫颈癌组织中的甲基化频率非常高 且随病情的演变呈现明显的上升趋势 PAxl甲基化检测与HPV检测相比具有更高的敏感性和特异性 开展PAXl基因的甲基化检测有助于提高宫颈癌的检出率 程媛 魏丽惠 王建六 PAxl基因及其甲基化在宫颈癌作用的分子机制研究进展 J 实用妇产科杂志2016年11月第32卷第11期 4 宫颈组织中PAxl甲基化水平 PART02 5 二 宫颈组织中PAxl甲基化水平 2008年Lai等 首次发现PAxl在宫颈癌中出现甲基化异常 其通过甲基化芯片筛选出6个在宫颈癌组织中甲基化频率较高的基因 即soxl PAxl LMxlA NKx6 1 wTl和ONECuTl 与正常对照组组织中PAxl甲基化频率相比 PAxl基因在宫颈癌组织中甲基化异常频率可高达94 4 P 0 0001 LaiHC UnYW HuangTH eta1 Denti6cationofnovelDNAmethy lationmarkersincervicalc cer J IntJcaIlcer 2008 123 1 161 167 6 二 宫颈组织中PAxl甲基化水平 Lim等的研究结果显示 PAxl基因的甲基化水平随着宫颈病变程度的加深而逐渐增加 在正常宫颈组织及低度鳞状上皮内病变 LSIL 中PAXl的甲基化水平是2 高度鳞状上皮内病变 HSIL 中为41 鳞状细胞癌 scc 中是90 xu等研究显示 PAxl在宫颈癌组织中的甲基化阳性率可达87 5 且随病情的演变呈现明显的上升趋势 LaiHC UnYW HuangTH eta1 Denti6cationofnovelDNAmethy lationmarkersincervicalc cer J IntJcaIlcer 2008 123 1 161 167 7 联合应用PAxl甲基化在官颈癌筛查中的作用 PART03 8 Lai等研究分析结果 3 1 Lai等研究分析了PAxl甲基化检测与HPV检测HsIL scc的敏感性 80 vs66 和特异性 63 vs64 9 该研究进一步指出 PAxl基因甲基化可显著提高宫颈癌临床检测的灵敏度 表明PAxl基因的甲基化在官颈癌的早期发生中扮演重要角色 并且PAxl在宫颈上皮内瘤变 CIN 及以上级别的官颈病变组织中甲基化水平更高 P 0 01 3 1 Lai等研究分析结果 10 3 1 Lai等研究分析结果 PAxl基因的甲基化检测有助于提高宫颈癌的检出率 结论 LaiHC UnYW HuangTH eta1 Denti6cationofnovelDNAmethy lationmarkersincervicalc cer J IntJcaIlcer 2008 123 1 161 167 11 xu等研究分析结果 3 2 xu等在121例患者的宫颈脱落细胞中检测了PAxl的甲基化水平 PAxl在宫颈癌组织中的平均甲基化水平为26 3 显著高于cIN 13 2 和CINI 4 5 P 0 001 并且 PAxl甲基化检测宫颈癌的灵敏度和特异性分别是80 和93 优于HPVDNA检测 12 3 2 Huang等研究分析结果 Huang等在73例宫颈脱落细胞中 有14例宫颈癌中检测出PAxl甲基化水平为56 7 明显高于CIN 的6 5和cIN I 正常的平均值1 0 P 0 0001 13 3 2 研究表明PAXl甲基化检测与HPV检测相比具有更高的敏感性和特异性 结论 LaiHC UnYW HuangTH eta1 Denti6cationofnovelDNAmethy lationmarkersincervicalc cer J IntJcaIlcer 2008 123 1 161 167 Huang等研究分析结果 14 3 3 对宫颈脱落细胞进行了PAxl S0 x1和NKX6 1三个甲基化基因检测的研究发现 PAxl甲基化检测CIN 的敏感性和特异性最高 分别为86 和85 与细胞学检测联合应用 敏感性和特异性分别为89 和83 转诊阴道镜和活检率可以减少60 15 3 3 Zhang等在Hela细胞中 检测了7个宫颈癌相关基因CNA CHFR PAxl SFRP4 TSLCI DEN FHIT的甲基化水平 其中PAXl是7个被研究基因中DNA甲基化程度最高的 程媛 魏丽惠 王建六 PAxl基因及其甲基化在宫颈癌作用的分子机制研究进展 J 实用妇产科杂志2016年11月第32卷第11期 16 PAX1基因甲基化定量检测在宫颈癌癌前病变诊断中的应用价值 PART04 17 目的 探讨PAX1基因甲基化定量检测在宫颈癌癌前病变诊断中的应用价值 18 方法 选取2013年1月至2015年10月就诊于上海交通大学附属第六人民医院的121例高危亚型人乳头状瘤病毒 HPV 感染患者为研究对象 根据病理学结果将其分为正常宫颈组 28例 低级别病变组 宫颈上皮内瘤变 CIN 32例 高级别病变组 CIN 34例 及癌变组 浸润性宫颈癌 ICC 27例 19 正常宫颈组 28例 低级别病变组 宫颈上皮内瘤变 CIN 32例 高级别病变组 CIN 34例 癌变组 浸润性宫颈癌 ICC 27例 收集各组患者的宫颈组织标本及宫颈刮片 采用反转录聚合酶链反应和焦磷酸测序技术定量分析PAX1基因9个位点的甲基化水平 通过接受者操作特征曲线 ROC曲线 计算PAX1甲基化与各级别宫颈病变的关联性 结论 选取研究对象 方法 20 数据 21 数据 结论 癌变组 高级别病变组 低级别病变组 正常宫颈组PAX1基因9个位点的甲基化平均水平分别为4 66 3 55 2 10 1 90 组间比较差异均具有显著性 P 0 05 四组患者病变组织中PAX1基因甲基化发生率和HPV阳性率比较差异均具有显著性 P 0 05 22 数据 23 数据 结论 各组患者宫颈刮片和宫颈组织PAX1基因甲基化水平组间两两比较均具有显著性差异 P 0 05 且癌变组患者宫颈刮片和宫颈组织PAX1基因甲基化水平显著高于其他三组 P 0 05 24 数据 r 0 80表示宫颈刮片与癌变组织PAX1甲基化水平具有相关性 P 0 05 25 数据 通过PAX1基因甲基化水平鉴别诊断宫颈癌和CIN 结果显示其ROC曲线下面积为0 88 P 0 001 具有较高的诊断能力 26 ROC曲线指受试者工作特征曲线 receiveroperatingcharacteristiccurve 是反映敏感性和特异性连续变量的综合指标 是用构图法揭示敏感性和特异性的相互关系 它通过将连续变量设定出多个不同的临界值 从而计算出一系列敏感性和特异性 再以敏感性为纵坐标 1 特异性 为横坐标绘制成曲线 曲线下面积越大 诊断准确性越高 在ROC曲线上 最靠近坐标图左上方的点为敏感性和特异性均较高的临界值 27 结论定量检测宫颈组织中PAX1基因的甲基化水平能够有效诊断高级别宫颈癌前病变 且其表达与疾病分期有关 朱昀恒 徐军 李华萍等 PAX1基因甲基化定量检测在宫颈癌癌前病变诊断中的应用价值 J 中国医学前沿杂志 2016年第8卷第12期 28 real timecolorimetricdetectionofDNamethylationofthePAX1geneincervicalscrapingsforcervicalcancerscreeningwiththiol labeledPcrprimersandgoldnanoparticles 用带有硫标记的Pcr引物和黄金纳米颗粒的子宫颈癌筛查方法 在子宫颈癌筛查中发现了PAX1基因的DNa甲基化的实时比色检测 29 DNAmethylationcaninducecarcinogenesisbysilencingkeytumorsuppressorgenes Analysisofaberrantmethylationoftumorsuppressorgenescanbeusedasaprognosticandpredictivebiomarkerforcancer Inthisstudy weproposeacolorimetricmethodforthedetectionofDNAmethylationofthepairedboxgene1 PAX1 geneincervicalscrapingsobtainedfrom42patientswhounderwentcervicalcolposcopicbiopsy DNA甲基化可通过沉默关键抑癌基因诱导肿瘤发生 肿瘤抑制基因的异常甲基化分析可作为预测和预测癌症的生物标记物 在这项研究中 我们提出了对配对盒基因1DNA甲基化检测的比色法 PAX1 在42例宫颈刮片宫颈阴道镜下活检获得的基因 Background Jinhuang1 Yu lighliou1 Ya NanKang3 etal real timecolorimetricdetectionofDNamethylationofthePAX1geneincervicalscrapingsforcervicalcancerscreeningwiththiol labeledPcrprimersandgoldnanoparticles InternationalJournalofNanomedicine 12 October 2016 30 以金纳米粒子为基础的PAX1基因DNA甲基化的比色检测系统 Figure1schematicrepresentationofthenewauNP basedsystemforcolorimetricdetectionofPAX1geneDNamethylation 31 数据 32 数据 由qMSP 定量甲基化特异性聚合酶链反应 检测到的甲基化水平 Cp作为控制 以验证该方法的准确性 由图可知 金纳米粒子标记的方法结果与使用由qMSP检测到的甲基化水平的结果相似 结论 33 数据 结论 由qMSP检测到的甲基化水平 Cp作为控制 以验证该方法的准确性 由图可知 金纳米粒子标记的方法结果与使用由qMSP检测到的甲基化水平的结果相似 34 数据 结论 由qMSP检测到的甲基化水平 Cp作为控制 以验证该方法的准确性 由图可知 金纳米粒子标记的方法结果与使用由qMSP检测到的甲基化水平的结果相似 ATheAUCvaluesofPAX1methylationdetectedbyqMSP BthePMRcalculatedbyUV visspectroscopyofAuNPs 35 数据 由图可知 金纳米粒子标记的方法结果与使用由qMSP检测到的ROC水平的结果相似 结论 36 数据 结论 由qMSP检测到的甲基化水平 Cp作为控制 以验证该方法的准确性 由图可知 金纳米粒子标记的方法结果与使用由qMSP检测到的甲基化水平的结果相似 CThe CpvaluesofPAX1methylationdetectedbyqMSP DthePMRcalculatedbymethodofAuNP labeled 37 数据 使用AuNP labeled方法所得结果与使用qMSP所得的结果相似 且随着宫颈癌的严重程度 PAX1的甲基作用也相应增加 结论 38 39 数据 结论 由qMSP检测到的甲基化水平 Cp作为控制 以验证该方法的准确性 由图可知 金纳米粒子标记的方法结果与使用由qMSP检测到的甲基化水平的结果相似 甲基化水平 cp在不同临床和病理特征上的分布 PAX1基因的甲基化状态与患者的年龄 细胞学和人的HPV没有关系 两种方法的结果表明 PAX1基因的甲基化频率与病理特征有明显的联系 这一地区的PAX1基因甲基化状态下在一个小规模的临床样本的甲基化特异的聚合酶链反应 MSP 琼脂糖凝胶电泳结果 图三 表明 PAX1基因甲基化发生在CIN2 CIN3 和SCC 而不在正常和CIN1样品中发生 结论1 结论2 40 结论 结论 由qMSP检测到的甲基化水平 Cp作为控制 以验证该方法的准确性 由图可知 金纳米粒子标记的方法结果与使用由qMSP检测到的甲基化水平的结果相似 甲基化的频率以及PAX1甲基化率随宫颈癌的恶化而增加 且PAX1基因对CIN2 CIN3和SCC的敏感性检测率高于90 相应的AUC值高于0 700 41 结果 1 这项研究是一个在宫颈刮片的甲基化检测的新技术 效率高 收集宫颈刮片比获得从患者的癌组织更方便 2 该方法具有良好的可行性 在多方面优于常规方法 该方法操作简单 与传统的方法 如焦磷酸测序方法相比 该方法速度快 从开始到完成耗时6分钟 仅采用16个PCR循环 这是低于50周期需要qMSP这个条件将大大减少BAS错配PCR反应中的概率大大提高了精度检测 42 结果 1 这项研究是一个在宫颈刮片的甲基化检测的新技术 效率高 收集宫颈刮片比获得从患者的癌组织更方便 4 巯基标记的金纳米粒子的方法能用肉眼清楚地观察到结果 不需要任何昂贵的设备 因此 巯基标记的金纳米粒子的方法可能是一个对宫颈癌筛查简单且有效策略 3 ROC曲线用于评价特异性和敏感性 金纳米粒子标记方法的AUC值 0 833 比常规荧光法 0 807 高 对CIN2 CIN3TH和SCC的检测灵敏度也是高于常规方法 且对CIN3和SCC的敏感性达到100 朱昀恒 徐军 李华萍等 PAX1基因甲基化定量检测在宫颈癌癌前病变诊断中的应用价值 J 中国医学前沿杂志 2016年第8卷第12期 43 数据处理 PART05 44 45 宫颈癌高风险组统计表 46 47 参考文献 PART06 48 参考文献 程媛 魏丽惠 王建六 PAxl基因及其甲基化在宫颈癌作用的分子机制研究进展 J 实用妇产科杂志2016年11月第32卷第11期 LaiHC UnYW HuangTH eta1 Denti6cationofnovelDNAmethy lationmarkersincervicalc cer J IntJcaIlcer 2008 123 1 161 167 Jinhuang1 Yu lighliou1 Ya NanKang3 etal real timecolorimetricdetectionofDNamethylationofthePAX1geneinc