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CST常见问题与回答（最新版本）1、我该如何储存我的抗体？多高的温度会影响抗体的稳定性？ 答：请将抗体的原始管储存到-20C，不要分装，否则有可能引起抗体的改变和浪费。提供的抗体贮存在包含50%甘油缓冲液中，在推荐的储存温度下不会冷冻。这避免了由于反复冻融导致的抗体降解。偶联抗体可能储存在4C，请参照产品说明书上的建议储存。2、如何储存SDS 裂解的磷酸化蛋白样本？ 答：如果短期内使用( 少于3 个月)，SDS 样本细胞裂解液可以储存在-20，如果长期储存，应保存于-80。活化的蛋白样本的降解变化很大，其降解率取决于每种蛋白的性质和样本里究竟含有多少活化的蛋白。3、能用室温孵育抗体1 小时代替4过夜吗？ 答：不建议。CST 公司活化特异的抗体用于区分一或两个翻译后修饰的氨基酸残基。这些修饰包括磷酸化，乙酰化和酶切割。与识别总蛋白的抗体相比，大多数针对这些修饰位点的抗体具有较低的亲和性。因此，通过4孵育过夜延长抗原和抗体的反应时间以获得最好的信噪比是非常关键的。4、当我准备细胞裂解液样品时，需使用什么缓冲液？ 答：请检查每个产品说明书中包含的Western blot 操作步骤中推荐的缓冲液。CST 提供以下缓冲液( 见下表)，或者，如果你想自己配制，CST 网站上列出了特别的缓冲液组分。CHAPS 缓冲液专为获得细胞质的提取物而设计，适应于Caspase 的检测，但并非关键。样本处理推荐使用缓冲液全细胞裂解物，使用标准的SDS-PAGE 上样缓冲液#7722 或#7723蓝色的上样缓冲液包装#7722 或红色的上样缓冲液包装#7723免疫沉淀和/ 或激酶分析，使用#9803细胞裂解缓冲液(10X)#9803切割的半胱天冬酶和其底物的免疫印迹，使用#9852CHAPS 缓冲液(10X) #98525、CST 的抗体是否适用于全组织样本裂解物？ 答：CST 并未测试所有抗体是否适用于全组织样本裂解物，但是CST 的很多抗体已经被其他客户用于整个组织而且取得巨大成功。优宁维微信公众号：优宁维抗体专家/UNIVSUBC6、如何为磷酸化目标蛋白准备阳性细胞裂解液对照？ 答：请参考CST 网站上该产品的Western blot 图，使用图述的细胞系和药物处理，能够得到阳性对照蛋白。也可参见：/support/controls.html 查阅7、假如说明书上某个种属未被列出与CST抗体有交叉反应，是否意味着这个种属未被检测过呢？ 答：可能未被检测过。CST科学家检测所有CST抗体在多个物种的交叉反应性，如果可能的话（这个依赖于目标蛋白和实验系统的可行性）。假如我们没有获得某个种属的交叉反应的阳性结果，我们就不会列出这个种属。然而，有可能我们检测的这个细胞系包含一个低水平的特定蛋白，或者，我们使用的诱导条件对那个特定的细胞系不起作用。如果您需要针对某个种属交叉反应的更多信息，请随时联系我们的技术支持团队或者优宁维公司来获取帮助。8、使用CST抗体时，为什么我不能使用我们自己实验室的免疫印迹操作流程？ 答：CST抗体经过优化以提供最强的信号，最少的背景，使用CST推荐的免疫印迹操作流程，对于终端客户的优点是节约时间和材料。9、如何确保Western blot 结果的可重复性？ 答：至于为什么看起来较难重复Western blot 结果，这里有几种可能性。要发现这种情况的原因，可考虑以下：9-1）你是如何储存抗体的？请参考问题1，2。抗体稀释后不能重复使用。许多抗体有一个非常低的工作浓度，很可能这个浓度随着连续的Western blot 会减少。 9-2）你确定你的样本中包含活化的蛋白？细胞裂解液样品制备活化蛋白会由于细胞数量，药物诱导时间，细胞传代数量和储存条件不同而改变。CST 产品在其保质期内都有最佳表现。请访问/support/shelflife.html 产品保质期页面获得列表。请注意：不能分装抗体。10、如何使用固相抗体来做免疫沉淀？ 答：要得到最佳的结果，获得均匀的微珠悬浮液是重要的。以下步骤可确保同质： 将包含微珠悬浮液的管子放入冰桶10 分钟。 倒置管子几次以获得50% 微珠- 缓冲液悬浮液。 假如可能，温和漩涡管子。 为了迅速吸出产品，切掉吸管端头，将吸管端头插入微珠悬浮液使靠近固相抗体微珠混合物。孵育抗体和200g的细胞裂解物( 约1mg/ml)4过夜，用推荐的抗体稀释浓度。11、当有多种抗体可以选择时，哪一种在我的实验中表现最优？答：通常，CST会针对一个目标蛋白提供多个抗体。选择在您接下来的实验中表现最优的抗体，可以访问抗体对照表格或者联系CST技术支持或优宁维公司来获取帮助，进而选择最适合您实验的最优抗体。 12、CST如何确保抗体的质量？ 答：CST科学家努力检测所有产品的主要应用，例如免疫印迹，免疫沉淀，免疫荧光，免疫组织化学，流式细胞术，和染色质免疫沉淀。当一个抗体被推荐用来某个特定的应用，说明这个抗体已经通过了严格的特异性实验测试的标准。此外，我们的科学家针对每个产品创建了专门的（优化的）免疫染色的方法，为您节约时间和试剂。我们也常规检测我们的抗体在不同物种的应用，包括人类，猴子，小鼠和大鼠。产品的高质量是CST最关心的。如果您对某个没有在产品页面列出的某个特定的应用感兴趣，请联系CST技术支持，来获取更多的信息。13、对于不同的批次，CST如何对质量进行控制？ 答：CST 科学家努力达到每批产品的一致性。作为标准，我们在新的批次中检测以往批次的所有应用。每个批次每个应用推荐的浓度都经过优化，所以请遵循我们的操作步骤。您可以浏览我们的免疫印迹验证页面获取更多知识。14、我能够订购一个定制配方的抗体吗？ 答：针对客户（不含载体）的订单，许多制备在不含BSA或甘油的PBS中的抗体都有库存。这个配方可以为了偶联而更改，能够连接到荧光素，微珠，或者染料。为了满足您分析的需要或者您实验室的需要，我们也很高兴向您整批出售。关于价格和可用性的问题，您可以联系我们或者优宁维公司。15、CST能够定制我的抗体吗？ 答：CST不会开发定制抗体，但是我们很高兴接受您的目标蛋白抗体建议。请发送您的建议到，CST科学家将在短期之内联系您。16、为什么我们的抗体能够在常温下运输？ 答：与CST在环境方面的巨大努力一致，我们从2003年开始，在常温下运输抗体，尽可能的减少包装材料的浪费。每个CST抗体都需经过稳定性检测，先在常温和37C下放置一周，然后进行免疫印迹测试以确保抗体的性能没有改变。如果你收到的抗体保存在常温中，请放心它已经通过稳定性测试，抗体的性能仍然是最优的。抗体接收后，请按照产品说明书中的推荐温度储存。17、这个抗体是否做够做这些实验（免疫印迹，免疫沉淀，免疫荧光，免疫组织化学，流式细胞术，染色体免疫沉淀）？答：CST会例行在相关的实验中测试抗体。这些被推荐的应用，都通过了严格的应用特定的验证标准。我们仅会推荐通过严格验证标准的应用，如果这个实验数据是模棱两可的，我们是不会推荐这个应用的。关于某个特定的抗体的更多信息或者咨询哪种抗体将在您的实验中表现最佳，可以联系CST的技术支持团队 或优宁维共公司。18、这个抗体能否用来做荧光免疫印迹？ 答：CS并没有对抗体是否能够做荧光免疫印迹进行常规测试，尽管在这个实验中许多抗体是发挥作用的。使用CST的抗体做荧光免疫印迹时，需要使用经修改过的免疫印迹的操作流程。我们发现去除封闭步骤中的Tween 20去污剂（在TBS中只使用5%的脱脂奶粉）和在显影前干燥膜是针对标准流程做出的仅有的必要改变。详细信息能够在荧光Western免疫印迹操作步骤（一抗用BSA孵育）和荧光Western免疫印迹操作步骤（一抗用牛奶孵育）中找到。另外，Prestained Protein Marker, Broad Range (Premixed Format) #7720在近红外波段中具有自发荧光。19、我的抗体的浓