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XXX医院检验科微生物实验室革兰染色标准操作规程编号：MYCH/ 版本：第1版 第0次修改页数：第 3 页 共 3 页革兰染色标准操作规程1.目的规范革兰染色标准操作规程。2.原理细菌样本先经紫色草酸盐结晶复合物染色，之后用Lugol-PVP煤染剂处理以促进染料与革兰阳性菌的结合。经酒精-丙酮的脱色作用，革兰染色阴性菌中的结晶紫会被洗脱。番红精则是作为复染剂：革兰染色阴性的细菌呈粉红色，而革兰染色阳性的细菌呈现紫色。3.试剂3.1 结晶紫草酸盐溶液 结晶紫2；酒精20；草酸铵0.8。 3.2 稳定Lugol-PVP复合物 碘1.3；碘化钾2；PVP（聚乙烯呲咯烷酮）10。3.3 脱色剂 95酒精50；丙酮50。3,4 番红精溶液 番红精0.25；95酒精10。 4. 质控41 采用大肠埃希菌ATCC25922质控标准菌株，每周一次，有室内质控记录。4.2 采用金黄色葡萄球菌ATCC25923质控标准菌株，每周一次，：有室内质控记录。5 操作步骤5.1 初染 第一液初染剂（结晶紫）染色一分钟，水洗。5.2 媒染 第二液媒染剂（碘液）染色一分钟，水洗。5.3 脱色 第三液脱色剂（95酒精）用到无紫色脱落为止，水洗。5.4 复染 第四液复染剂（石炭酸复红或沙黄）染色30秒，水洗。自然干燥后镜检。6结果判断革兰阳性菌呈紫色，革兰阳性菌呈红色。7. 注意事项7.1 染色的结果常受操作者技术影响，尤其是容易过度脱色，往往阳性染成阴性。7.2 在同一载玻片上，需用已知金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌作阳性及阴性对照。7.3 染色关键在于涂片和脱色，涂片不宜过厚，固定不宜过热，脱色不宜过度。7.4 菌龄为1824 小时为佳。8. 临床意义8.1 鉴别细菌 可将细菌分为阳性和阴性两大类，因而可以初步识别细菌，缩小范围，有利于进一步鉴定。8.2 选择药物 革兰阳性菌与阴性菌的细胞壁结构有很大差别，因而抗菌药物有差异。参考文献1 周庭银编著临床微生物学诊断与图解第二版上海：上海科学技术出版社，20072 叶应妩，王毓三，申子瑜主编全国临床检验操作规程第三版南京：东南大学出版社，2006编写人签名复审人签名审批人签名生效日期姓 名：XX编写日期:2011
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