乳腺癌患者尿液基质金属蛋白酶检测的临床意义.pdf

第16卷 第8期 医 学 研 究 生 学 报 Vol 16 No 8 2003年8月 Journal of Medical Postgraduates Aug 2003 论 著 乳腺癌患者尿液基质金属蛋白酶 检测的临床意义 张 群 陈龙邦 臧 静 褚晓源 王靖华 耿怀成 南京军区南京总医院肿瘤科 江苏南京210002 摘要 目的 探讨乳腺癌患者尿液基质金属蛋白酶 MMP 检测的临床意义 方法 应用以明胶为底物的SDS2 聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对92例乳腺癌患者进行尿液MMP的检测 结果 乳腺癌组尿液中相对分子质量为 130 000 92 000及72 000的MMP检出率分别为55 4 64 1 及51 1 明显高于乳腺良性疾病组的11 1 22 2 及16 7 P 0 05 乳腺癌远处转移组的检出率分别为80 0 86 7 及70 0 明显高于乳腺癌无转 移组的43 5 53 2 及41 9 P 0 05 结论 尿液MMP的检测可用于判断肿瘤的发生和发展 并可作为 判断乳腺癌是否转移的标志 关键词 乳腺肿瘤 转移 基质金属蛋白酶 酶谱电泳 中图分类号 R737 9 文献标识码 A 文章编号 100828199 2003 0820594202 Activity of matrix metalloproteinases in urine of breast cancer patients ZHANGQun CHEN Long2bang ZANGJing CHU Xiao2yuan W ANG Jing2hua GENG Huai2cheng Department of Oncology Nanjing General Hospital of Nanjing Command Nanjing210002 Jiangsu China Abstract Objectives To evaluate the clinical significance of the activity of matrix metalloproteinases MMP in urine of human breast cancer Methods MMP in urine of 92 breast cancer patients were detected by substrate gel electrophoresis Results The positive rates of urinary MMP Mr 130 000 92 000 and 72 000 species in urine of breast cancer group were 55 4 64 1 and 51 10 respec2 tively which were much higher than those 11 1 22 2 and 16 7 respectively in urine of benign breast disease group The positive rates of three MMP in urine of metastatic breast cancer group were 80 0 86 7 and 70 0 respectively which were much higher than those 43 5 53 2 and 41 9 respectively in urine of non2metastatic cancer group Conclusions It was sug2 gested that the detection of MMP in urine of breast cancer using zymography is an important predictor of metastatic breast cancer Key words Breast neoplasms Metastasis Matrix metalloproteinases Zymography 0 引 言 肿瘤的侵袭和转移是一个复杂的 多步骤 多阶 段的过程 溶解 穿越基膜是癌细胞侵袭和转移过 程中的重要环节 基质金属蛋白酶 MMP 是一类 锌离子依赖的细胞外蛋白水解酶 可降解基膜 促进 恶性肿瘤细胞的侵袭和转移 1 我们曾对乳腺癌 术后患者的尿液进行酶谱电泳分析 发现乳腺癌术 后转移组尿液中MMP的检出率明显高于术后无转 移组 2 此次我们进一步对乳腺癌患者尿液MMP 的动态变化及其与CA2153之间的关系进行对照研 究 495 收稿日期 2003203217 修订日期 2003204208 作者简介 张 群 19722 女 浙江义乌人 主治医师 医学硕士 从事肿瘤内科专业 1 资料和方法 1 1 资料 收集1999 2002年我院经病理证实的 92例乳腺癌患者晨尿标本 乳腺癌组 患者年龄23 78 中位年龄 49 岁 病理类型 浸润性导管癌87 例 浸润性小叶癌3例 单纯癌2例 分期按国际抗 癌联盟 UICC TNM标准 其中 期21例 期22 例 期19例 期30例 另外 收集9例乳腺增 生及9例乳腺纤维瘤患者的尿液标本 乳腺良性疾 病组 肌酐及常规检查均正常 并排除肝硬化 关节 炎 创伤 肾小球肾炎 糖尿病等疾病 尿液收取后 立即放入 30 冻存待检 同时留取血清进行CA2 153的检测 1 2 标本处理 取1 ml尿液装入透析带 截流相 对分子质量为3 500 Spectrum Houston TX USA 内置于4 双蒸水中透析约2 h 换液2次 于室温下 4 000 r min离心5 min 取上清液备用 1 3 检测方法 采用我科建立的酶谱电泳法 2 过程如下 常规配制10 分离胶 含0 01 明胶 和 5 浓缩胶 取尿液用样品缓冲液处理 加样后于 Tris2甘氨酸电泳缓冲液中电泳3 4 h 小心将胶 取出 移入2 5 TritonX2100溶液100 ml中 低速 振荡30 min 共2次 用蒸馏水漂洗数次后 放入底 物缓冲液中 37 孵育44 h 用0 2 考马斯亮蓝 R2250染色1 h后 脱色至负染带透明清晰为止 并 摄片保存 根据是否有负染带确定检出率 用标准 蛋白测定MMP蛋白的相对分子质量 1 4 统计学方法 不同组别间MMP检出率的比 较采用 2 及精确概率法检验 CA2153与MMP检 出率的比较采用配对 2 检验 2 结 果 2 1 乳腺癌组与乳腺良性疾病组尿液MMP检出 率的比较 经统计学处理 乳腺癌组相对分子质量 为130 000 92 000和72 000的MMP检出率显著 高于乳腺良性疾病组 P 0 05 表 1 表1 各组中尿液MMP的阳性数 Table 1 Positive rates of MMP in urine of different groups 分 组n MMP相对分子质量 130 00092 00072 000 乳腺癌组 9251 55 4 59 64 1 47 51 1 乳腺良性疾病组182 11 1 4 22 2 3 16 7 2 2 乳腺癌各期尿液MMP的检出率 乳腺癌不 同分期尿液MMP的检出率差异显著 表2 晚期 患者的检出率明显高于早期患者 P 0 05 表2 乳腺癌组各期尿液MMP的阳性数 Table 2 The positive ratesof MMP in differert stagesof breast cancer 乳腺癌分期n MMP相对分子质量 130 00092 00072 000 期215 23 8 6 28 6 4 19 0 期229 40 9 12 54 5 10 45 5 期1913 68 4 15 78 9 12 63 2 期3024 80 0 26 86 7 21 70 0 2 3 乳腺癌患者尿液MMP检出率与远处转移的 关系 乳腺癌远处转移组相对分子质量为130 000 92 000及72 000的MMP检出率分别为80 0 86 7 及70 0 明显高于乳腺癌无远处转移组的 43 5 53 2 及41 9 P 0 05 2 4 乳腺癌患者尿液MMP检出与CA2153的关系 CA2153在乳腺癌组中阳性率为17 9 乳腺癌 转移组中阳性率为36 7 两组间无显著差异 乳 腺癌患者MMP的检出率显著高于CA2153阳性率 P 0 05 二者之间存在密切相关性 表 3 表3 乳腺癌患者尿液MMP的检出与CA2153的关系 Table 3 Relationship between MMP and CA2153 检测项目 MMP相对分子质量 130 00092 00072 000 CA2153 16 6 19 3 14 8 CA2153 35 35 40 30 33 37 3 讨 论 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一 其发病 率占女性肿瘤的31 病死率仅次于肺癌 死亡原 因几乎都是远处转移 大量的研究表明 肿瘤侵袭 转移的潜能与其产生或诱导产生MMP的能力有密 切关系 3 Bianco等 4 检测膀胱癌患者膀胱冲洗液 的 型胶原酶 结果表明MMP29的活性水平随着 肿瘤分级的增加而增高 并且在侵袭性肿瘤中明显 高于表浅性肿瘤 Davies等 5 利用酶谱法检测乳腺 癌患者肿瘤组织中MMP29的含量 结果发现 有转 移者明显高于正常人及无转移的乳腺癌患者 表明 肿瘤的转移与瘤组织中MMP29的活性有关 目前 研究表明 多种肿瘤组织及血清中MMP的表达和 活性水平与肿瘤的侵袭和转移相关 但对于尿液中 MMP的动态变化目前尚未见详细报道 下转第610页 595 第8期 张 群 等 乳腺癌患者尿液基质金属蛋白酶检测的临床意义 知识水平和专业能力 但也不排除有 高分低能 名不符实 大事做不来而小事不愿做 等情况的 存在 势必造成人才指标的浪费 因此 我们选才既 要重文凭 更要看实际能力 3 3 注重投资 培养新型人才 各级领导应充分认 识对医院图书馆人力资源投资的重要性和必要性 加大投资力度 加速培养人才 应将图书馆人才培养 与医疗业务骨干培养同等对待 使图书馆与医院同 步发展 3 网络环境下医院图书馆人才培养的目 标 是拥有一批既精通图书情报专业知识 又了解医 学基础知识 既具备高智能多学科知识 又有较高的 英语水平和娴熟的计算机操作能力 既有社会科学 自然科学方面的知识 又有强烈的信息意识 同时还 要具有良好的职业道德和甘为人梯 无私奉献精神 的综合型人才 人才来自教育和培养 在从馆外引进优秀人才 的同时 不可忽略馆内人才的开发与管理 必须提 高图书馆人员的整体素质 人才培养的方法 一是 要加强职业道德教育 使图书馆员牢固树立 读者第 一 服务至上 的理念 全心全意为临床 教学 科研 服务 不仅具有良好的职业道德 还应具有主动服务 的意识 二是采取多样 灵活 针对性强的继续教育 形式 使图书馆员的知识和技能不断更新 补充 拓 展和提高 完善知识结构 提高创造能力和专业水 平 三是对有一定学历 基础好 素质高 接受新技 术能力强的馆员 要跳出专业范围的圈子 加强管理 学 心理学 公共关系学 科学研究方法等方面的理 论学习 鼓励他们继续接受高一级学历教育 也可 通过进修学习 参观学习或考察 参加学术和科研活 动等方法 培养他们的自学能力 研究和创新能力以 及综合运用与传递知识的能力 不断扩大知识面 及 时掌握专业发展动向 不仅要成为某一学科方面的 信息咨询专家 还要力争成为图书馆界科研与现代 化技术应用的专门人才 参考文献 1 史世鹏 许正中 经济管理原理M 北京 中国财政经济出版 社 2000 2382264 2 孟雪梅 略论图书馆人力资源的管理J 图书与情报 2001 2 72274 3 袁 波 夏合金 杨国斌 等 为适应医疗市场必须增强五个意 识J 医学研究生学报 2000 13 5 3522353 责任编辑 石 东 上接第595页 我们研究结果发现 乳腺癌患者尿液中三种相对分 子质量MMP的检出率明显高于乳腺良性疾病患 者 乳腺癌各期患者的MMP检出率随着肿瘤分期 的增加而升高 晚期患者的检出率明显高于早期患 者 乳腺癌远处转移组尿液中三种相对分子质量 MMP的检出率明显高于乳腺癌无远处转移组 结 合本试验以往的研究结果 乳腺癌术后转移组尿液 中MMP检出率明显高于术后无转移组 表明随着 肿瘤的发生 发展和转移 尿液中三种相对分子质量 MMP的检出率逐渐提高 因此我们认为 尿液 MMP的动态检测可用于判断肿瘤的发生和发展 并可作为判断乳腺癌是否转移的标志 目前 用于乳腺癌的辅助诊断中 CA2153是临 床上较为常用的指标 是Hilkens等自人乳腺脂肪 球膜上糖蛋白MAM26制成的小鼠单克隆抗体 115 2DB 由这些抗体识别出CA2153 它的相对分 子质量为400 000 据报道 乳腺癌患者中有20 25 增高 而有转移灶者30 40 增高 以此 发现癌转移比临床发现转移可早几个月 6 我们 的研究结果显示 尿MMP的检出率明显高于CA2 153 它的特异性及敏感性均较CA2153高 如果二 者协同 则能进一步提高检测的准确率 参考文献 1 Massova I Kotra LP Fridman Ret al Matrix metallopro2 teinases structure substrate specificities evolution and diversi2 ficationJ FASEB J 1998 12 5 107521095 2 张 群 陈龙邦 臧 静 等 用酶谱电泳技术检测乳腺癌患者 尿液基质金属蛋白酶J 南京大学学报 医学专辑 2002 33 30232 3 Olson MW Bernardo M Pietila Met al Characterization of the monomeric and dimeric forms of latent and active matrix m