常见植物的脱毒与快速繁殖技术.ppt

第9章常见植物的脱毒与快速繁殖技术 植物组织培养 本章主要内容 4学时 蔬菜的脱毒与快繁果树的脱毒与快繁花卉植物的脱毒与快繁农作物的脱毒与快繁药用植物的试管快繁树木的脱毒与快繁 第9章常见植物的脱毒与快速繁殖技术 1 掌握马铃薯的生物学习性 掌握马铃薯脱毒培养的过程以及马铃薯脱毒苗的鉴定方法 掌握番茄的生物学特性及快速繁殖方法 2 掌握苹果的脱毒方法与快繁技术 掌握葡萄的脱毒与快技术 掌握草莓的脱毒与快繁技术 3 掌握兰花 香石竹 菊花 非洲菊 矮牵牛 百合等花卉的生物学特性 组培快速繁殖方法及自然繁殖法 4 掌握甘薯的生物学特性 脱毒与快繁的方法及技术 5 掌握芦荟 桔梗等药用植物的快繁技术 6 掌握毛白杨 河北杨等绿化苗木的快繁技术 第9章常见植物的脱毒与快速繁殖技术 本章教学目的与要求 第一节蔬菜的脱毒与快繁 第9章常见植物的脱毒与快速繁殖技术 马铃薯 蕃茄 一 马铃薯的组织培养 第一节蔬菜脱毒与快繁 微型薯 第一节蔬菜脱毒与快繁 马铃薯是一种全球性的重要经济作物 适应性广 营养价值高 耐贮藏适运输 既是一种重要的粮食作物也是一种调节市场供应的重要蔬菜 马铃薯原产于拉丁美洲 当被发现可以食用后 很快传到世界各地 成为栽培很广的一种作物 第一节蔬菜脱毒与快繁 危害有17种之多 如X病毒 S病毒 Y病毒 M病毒 A病毒 花叶病毒 纺锤形块茎病毒等 马铃薯病毒可使块茎产量减少50 80 马铃薯病毒的种类 第一节蔬菜脱毒与快繁 1 形态特性根根系由出生根和匍匐根组成 茎分地上部分和地下部分 叶全缘 心脏形 花为聚伞花序 果实浆果 一 马铃薯特性和生物学习性 第一节蔬菜脱毒与快繁 马铃薯性喜冷气候 不耐高温和霜冻 发芽适温为12 18 地上茎叶生长温度为17 21 块茎形成要求昼温14 24 夜温12 14 结薯期要求12h左右的短日照和疏松 湿润 肥沃以及通气良好的土壤条件 土壤板结 薯块表面粗糙和薯形不整 2 生物学习性 第一节蔬菜脱毒与快繁 通过微茎尖组织培养技术能从马铃薯体内脱除PLRV PVY PVA PAF PVG PVM PSW等病毒 二 马铃薯脱毒技术 第一节蔬菜脱毒与快繁 全国现有马铃薯播种面积300多万公顷 每年需合格种薯45亿公斤 脱毒原种4亿公斤 脱毒小薯或微型薯45亿粒 我国的马铃薯平均单产仅为13 60吨 公顷 是世界单产最高国这瑞士 48 80吨 公顷 的1 4 最主要的因素就是种薯质量差 品种布局不合理 我国马铃薯栽培现状 第一节蔬菜脱毒与快繁 微茎尖组织培养 诱导出苗 联免疫吸附试验法或指示植物方法鉴定 脱毒试管基础苗 固体 液体培养基相结合 扩繁基础苗 在防虫网室栽植或封闭温室扦插 原原种 或称脱毒小薯 原原种 原种1代 原种2代 良种1代 良种2代 1 脱毒种薯生产程序 第一节蔬菜脱毒与快繁 1 茎尖消毒 一般在室内发芽 芽经热处理 38 2周 然后取1厘米的茎尖 水洗干净 无菌条件下先用70 的酒精浸组织15 20秒 再用2 次氯酸钠溶液浸泡4 5min 然后用无菌水冲洗3次 2 茎尖培养脱毒 第一节蔬菜脱毒与快繁 把消毒芽在解剖镜下逐层剥去幼叶 露出圆滑的生长点 留1 2个叶原基 0 2 0 3毫米 随即接种于MS液体培养基上 每升加0 1mgNAA 0 2mgGA3 0 5BA 2 蔗糖 pH值5 8 取材和接种 第一节蔬菜脱毒与快繁 温度 21 25 光照度 2000 3000lx光照时间 12h d2 3周长愈伤 4 5周长绿点 3 6月长成2 3厘米小芽 越慢越好 出芽很快的扔掉 培养条件 第一节蔬菜脱毒与快繁 培养成功的马铃薯脱毒苗 经ELISA 试剂盒 鉴定后 试管苗应每3月检测一次 每年4次 采用固体 液体培养基相结合方法扩繁 取试管苗单节切段扦插在 或平放 固体培养基上 每瓶可插20个左右茎段 经20d左右发育成5 10cm高小植株 继续进行切段繁殖 此法速度快 每月可繁殖5 8倍 试管苗多节接种在液体培养基上 进行浅层静止液体培养 2 继代和生根 第一节蔬菜脱毒与快繁 MS NAA0 2 0 5 D 泛酸钙10 3 蔗糖 20 25 3000 4000LX 14 16hr光照 每3周继代一次 单芽茎段约1厘米 原则试管苗用2年 3年 马铃薯继代培养基 第一节蔬菜脱毒与快繁 马铃薯试管苗 第一节蔬菜脱毒与快繁 炼苗室温度 白天23 27 夜间不低于14 炼苗具体方法 移植前7d左右 将长有3 5片叶 高2 3cm的试管苗 在不开瓶口的状态下 从培养室移至温室排好 为防止强光 高温灼伤试管苗 在温室顶上加盖一层黑色遮阳网 3 驯化 第一节蔬菜脱毒与快繁 1 指示植物鉴定在马铃薯的病毒鉴定中 汁液鉴定是最常用的方法 病毒 病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液来接种 2 鉴定寄主的准备马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋科的千日红 茄科的洋酸浆 毛曼佗罗等 寄主植物应在无虫网室中培养 三 马铃薯无病毒苗的鉴定材料 第一节蔬菜脱毒与快繁 叶片洗净后 在消毒的研钵中研成糊状 用纱布滤出汁液 再用蒸馏水稀释 倍作为接种物 混入 目的金刚砂 用左手心紧靠在鉴定寄主植物的背面 以右手指蘸取接种液 均匀的在叶背面擦过 以不造成叶片产生伤痕为度 最后把叶面上多余的接种物用清水洗净 放置在 的防虫室中 一般 天可发病 接种液制备及接种 第一节蔬菜脱毒与快繁 直接块茎繁殖 扦插繁殖 组织培养切段繁殖A 继代培养B 低温保存 四 马铃薯无病毒株的繁殖 第一节蔬菜脱毒与快繁 二 番茄的组织培养 一 形态特征和生物学习性 番茄的叶片为长羽状 在叶轴上生有裂片 顶生裂片 小裂片 间裂片 这些裂片是叶的深裂 缺刻的变化 两性花 聚伞花序 浆果 蕃茄耐低温 喜光照 对水分需求量极大 喜肥 适于微酸性或中性土壤 第一节蔬菜脱毒与快繁 二 番茄的组织培养 1 外植体 幼嫩叶片 2 消毒 用0 1 升汞浸泡4min 再用无菌水冲洗3 4次 3 愈伤组织培养条件 MS BA2mg L IAA1mg L 温度25 每天光照10h 光照度2000lx 4 分化培养 分化培养基MS BA4中 5 生根培养 MS IAA2mg L 6 炼苗栽植 将培养有根试管苗的瓶口打开 煅炼3d后取出 洗去根上带有的培养基 移栽到营养土中 浇透水 并罩上塑料薄膜 以保温保湿 4 5d后去掉薄膜 新叶长出时即定植田间 第一节蔬菜脱毒与快繁 三 番茄的胚培养 1 外植体制备 授粉后30 40d收获果皮完整的果实 果实放入95 乙醇中表面消毒 浸在5 NaCI中5min 用无菌蒸馏水充分淋洗 果实放在无菌吸水纸上 除去种子上的胶状复被 2 培养基 启动 MS 硫胺素0 3mg L 2 4 D2mg L 椰乳100ml L pH6 0 继代 MS 2 4 D2mg L 分化 MS BA1 5mg L 生根 MS NAA2mg L 3 培养条件 愈伤组织启动和继代 用暗培养 27 芽再生和生根在室温20 30 16h d的光照 2000lx 第一节蔬菜脱毒与快繁 第二节果树的脱毒与快繁 葡萄 苹果 第9章常见植物的脱毒与快速繁殖技术 草莓 一 苹果的脱毒与快繁 一 苹果的形态特性和生物学特性 苹果 Maluspumila 属落叶乔木 树木高大 果实为假果 苹果喜凉 喜光 适合在微酸性到中性土壤中栽种 第二节果树脱毒与快繁 二 脱毒技术 1 病毒种类 苹果褪绿叶斑病毒 苹果茎痘病毒和苹果茎沟病毒等 2 微尖嫁接脱毒 砧木 去顶的离体培养幼苗 接穗 试管培养的无毒新稍 嫁接后培养生叶 移栽即可 3 热处理脱毒 把植株置于38 下25 50天 4 茎尖培养脱毒 把0 1 0 3mm的茎尖离体培养 5 脱毒苗的鉴定 抗血清法 电子显微镜法 ELISA法 指示植物法 第二节果树脱毒与快繁 三 苹果茎尖脱毒快繁技术 1 材料与消毒 带芽或茎尖的茎段 常规消毒 用无菌水洗3 5次 切茎尖约0 1 0 5mm 2 芽的诱导 MS或LS BA2 300 500CH或LH 3 蔗糖的培养基上 诱导芽的分化 3 继代增殖培养 MS BA0 5 1 CH300培养基上增殖 4 生根培养 1 2MS或White Nitsh附加IAA1 IBA0 2和GA33等 第二节果树脱毒与快繁 四 苹果花粉培养 1 选材与预处理 选取中心花蕾吐红 周围花蕾明显增大 但花序尚未分离的花蕾 置于冰箱中1 3 预处理 2 消毒 70 的酒精浸约0 5min 再在10 漂白粉上清夜中浸15 20min 3 胚状体诱导 接种到MS 2 4 D0 4 KT0 2 IAA4 3 8 蔗糖培养基上 25 30 下培养 4 生根 同茎尖脱毒中所用方法 第二节果树脱毒与快繁 五 胚培养 1 取材消毒 取授粉30 50d内的幼果 用70 酒精擦拭 取出种子 剥出幼胚或成熟胚 2 启动培养 接种在BA0 25 IAA0 5的1 2MS培养基上 培养条件为25 30 和1500 2000lx光照14h 3 分化增殖 移植到加有BA0 5 1 0和CH300的1 2MS培养基上 在光下培养条件同上 4 生根培养 同茎尖培养 第二节果树脱毒与快繁 二 葡萄的脱毒与快繁 一 形态特征和生物学习性葡萄属落叶木质藤本植物 葡萄地上部分的茎细 节上具有卷须 可向上攀援 叶近圆型或卵型 3 5裂 葡萄原产于温带地区 不太抗寒 葡萄的根系抗寒力很弱 在 5 7 时即受冻 第二节果树脱毒与快繁 二 葡萄的组织培养 1 选材接种 从生长旺盛的葡萄新梢顶端取1 2 的茎尖 消毒 分离出约2 长的茎尖 接种到培养基上 2 培养基 MS培养基 无机盐减半为好 再添加BA1 2 NAA0 01 LH100 蔗糖2 琼脂0 6 而B5培养基愈伤组织化严重 茎尖生长不好 3 苗分化 BA0 5 同时添加GA30 2 黑暗处理可促进幼茎的伸成 提高成苗率 4 根分化 将苗转入MS IAA0 4 NAA0 05培养基中进行生根 第二节果树脱毒与快繁 三 葡萄无病毒苗的培养 葡萄受到26种病毒的危害 由于病毒的危害 葡萄的长势减弱 产量降低 果实的糖分含量减少 风味变劣 葡萄卷叶病是危害最大的病毒病 第二节果树脱毒与快繁 三 葡萄无病毒苗的培养 1 热处理脱毒 1 葡萄无性系处理 材料置于38 CO21200 10 6的人工空气侯箱内 经30min处理 较易从枝条尖端或休眠芽中除去扇叶病毒 2 将感染材料的修面芽插入健康指示植物的蔓中 然后在38 的环境中保持2个月 以后取出枝条和接种芽继续生长 3 直接将葡萄蔓浸泡在50 的温水中10 20min 可以治疗皮尔斯病 但不能治疗黄点病及卷叶病 第二节果树脱毒与快繁 2 组织培养脱毒技术 1 茎尖接种后变绿 增大期的培养 在25 相对湿度80 16h的长日照条件下水培生成的嫩茎取0 2 0 3mm茎尖接种于1 2MS 添加NAA0 1 BA1 0 Kt0 5 腺嘌呤4 0 蔗糖30g L 琼脂6 0 pH5 8培养基上 2 从畸形叶和茎叶伸长期 采用1 2MS 添加IAA0 2 BA0 1 KT0 5 腺嘌呤4 0 蔗糖30g L的培养基 3 地上部和地下部的伸长期 Galzy 1964 培养基 添加NAA0 1 三 葡萄无病毒苗的培养 第二节果树脱毒与快繁 三 草莓的脱毒与快繁 一 形态特征和生物习性草莓 Fragaria 属多年生草本植物 植株矮小 呈半平卧丛状生长 基生三出复叶 果实为聚合瘦果生于花托上 草莓喜光但又较耐阴 要求肥沃 疏松 透水 通气的中性微酸性或微碱性土壤 第二节果树脱毒与快繁 二 草莓脱毒苗的培养 1 热处理脱毒将草莓植株在40 41 温度下处理4 6周 2 微茎尖脱毒 1 初代培养 取草莓顶芽 用自来水流水冲洗2 4h 然后剥去外层叶片 消毒 切取0 2mm的茎尖 接入MS BA0 25 NAA0 25培养基中 培养条件为22 25 日照16 18h光强3000lx 第二节果树脱毒与快繁 二 草莓脱毒苗的培养 2 继代培养 把芽丛割成芽丛小块 转入MS培养基中 令其长大 并进行分株 扩大繁殖 3 生根培养 在培养基中加入NAA1或IBA1 第二节果树脱毒与快繁 第三节花卉植物的脱毒与快繁 第9章常见植物的脱毒与快速繁殖技术 一 兰花的脱毒与快繁 兰花系兰科 Orchidaceae 植物 在自然条件下主要靠分株繁殖 繁殖率一年只有几倍 所以无法大量繁殖生产 而且由于长期进行无性繁殖 带病毒株增多 逐渐使种性降低 影响生长 第三节花卉植物的脱毒与快繁 一 蝴蝶兰属的培养 1 茎尖的培养 1 取材消毒 将芽除去叶后 用水冲洗 再用10 的漂白粉表面灭菌15min 除去叶原基后 用5 的漂白粉中灭菌l0min 以后用无菌水冲洗3 5次 切取茎尖和腋芽 约2 3mm 接种到培养基中 2 培养基 采用Vacin和Went培养基 添加15 CM进行液体培养 或加9g L的琼脂进行固体培养 3 培养条件 为温度25 光照强度2000Lx 照明16 24h 液体培养基用60r min的速度进行振荡培养 培养1个月即可形成原球茎球状体 即可进行继代增殖 第三节花卉植物的脱毒与快繁 一 蝴蝶兰属的培养 2 花梗腋芽的培养 1 采芽 将带腋芽的花梗进行冲洗 用10 的漂白粉溶液表面灭菌20min 除去腋芽的苞叶 再在5 的漂白粉溶液中表面灭菌3min 无菌水冲洗净 仅取腋芽 接种到培养基上 2 培养基和培养条件 用德兰属1号培养基培养原球状体 育苗用卡德兰属1号加10 香蕉汁 培养条件是光照强度2000Lx 光照时间每天13h 保持恒温25 3 继代培养 用原球茎球状体繁殖 4 育苗 不切块继续培养即可分化产生叶片 移到育苗的培养基 3 6个月可得到能栽植的苗 第三节花卉植物的脱毒与快繁 一 蝴蝶兰属的培养 3 叶片的培养 1 取材 叶片是从试管内培养的材料上切取 取展开叶最上部先端 中央或基部约6 8mm2 2 培养基和培养条件 用Kyoto改良培养基 加复合肥料3 5g L 肌醇1000 烟酸1 维生素B11 NAAl 腺嘌呤10 BAl0 蔗糖2 琼脂1 0 25 恒温 光照500Lx 日照16h 3 继代培养 用改良的Kyoto培养基进行继代培养 或在Vacin和Went培养基中去掉蔗糖和琼脂 加20 的CM的液体培养基进行振荡培养 4 育苗 原球茎球状体2 3个月即可萌芽 形成细苗 以后转移到Kyoto培养基 加10 的香蕉汁 经数月后可得到能移f栽的大苗 第三节花卉植物的脱毒与快繁 二 卡特兰的培养 1 取材和消毒 选择5 10cm长的嫩茎 从基部采芽 先用流水冲洗 切去叶片酒精 漂白粉等消毒 2 培养基和培养条件 MS基本培养基 附加维生素 氨基酸 NAA0 186mg L Kt0 02mg L GA30 173mg L 蔗糖30g L 琼脂6g L 不加CM 启动培养温度15 20 成活以后 则保持在25 光照强度500 2000Lx 照明16 22h 3 防止培养材料变褐方法 1 采芽后 用无菌水冲洗再接种 2 在培养基中加 50 100 10 6芸香甙 2 开始培养到成活 保持温度15 20 4 调pH值至5 5 减轻褐化 提高成活率 5 避免6 8月采芽 由于多酚类物质的积累 褐化较严重 第三节花卉植物的脱毒与快繁 二 香石竹的组织培养 香石竹为石竹科石竹属草本植物 原产南欧地中海北岸 须根系 茎直立 多分枝 株高70 100cm 茎部半木质化 叶线状披针形 全缘 叶质较厚 上半部向外弯曲 对生 基部抱茎 花通常单生或2 3朵聚伞状排列 石竹是一种中日性花卉 喜干燥 通风 喜冷凉 最适宜的生长温度为19 21 忌高温多湿 喜保肥 通气 排水良好的腐殖质或砂质壤土 最适宜的土壤pH值为6 6 5 一 形态特性和生物学习性 第三节花卉植物的脱毒与快繁 二 组织培养育苗 1 取材灭菌 取长势健壮植株上较为粗壮的嫩芽 剥去成熟叶片 在清水中清洗后 常规消毒 切取0 3 0 4mm的茎尖 2 培养基 选用MS或White培养基 附加BA或KT0 5 2mg L 单位下同 NAA IAA浓度为0 2 2 2 4 D为0 1 1 3 分化增殖 于MS附加BA2 IAA0 5进行分化 于MS附加BA0 5 2 IAA0 5进行丛生芽诱导 4 生根 于1 2MS上 温度20 25 光照强度20001x 光照10 12h d 第三节花卉植物的脱毒与快繁 三 菊花的组织培养 菊花系多年生植物 株高60 180cm 茎直立粗壮 多分枝 叶形大 互生 叶片有深缺刻 花序单生或聚生 边缘为舌状花 中部为筒状花 也有全为舌状或筒状花的 形状各异 种子为细小的瘦果 中间膨大 两端突出 适宜的生育温度为15 25 喜阳光充足 通风良好 在光照条件下生长健壮 比较耐旱 不耐潮湿 忌低洼积水 秋菊 冬菊为典型的短日照植物 只有光照长度在12h以下时才能开花 一 形态特性和生物学习性 第三节花卉植物的脱毒与快繁 二 菊花的组织培养快速繁殖 1 取材 外植体很多 如茎段 侧芽 叶 花序梗 花序轴等 但最好采用茎尖或侧芽 其次是花序轴 经一般灭菌过程后即可接种 2 培养基与培养条件 MS B5 N6 White均可 多用MS 附加BA2 3mg L NAA0 02 0 2mg L 于22 28 24 26 最佳 光照12 16h d 光强1000 4000Lx 第三节花卉植物的脱毒与快繁 二 菊花的组织培养快速繁殖 3 继代培养 可通过茎尖直接分化出新芽 或经愈伤组织分化出新芽 也可用茎切段作微型扦插繁殖 MS或MS NAA0 1 4 生根和移栽 将无根幼苗转入1 2MS NAA 或IBA 0 1的培养基中 经两周即可生根 培养条件同上 第三节花卉植物的脱毒与快繁 三 菊花花瓣的培养 1 取材 在菊花开花前2 3d将整个花蕾剪下 冲洗十几分钟 用75 的酒精浸泡10 15min进行表面灭菌 后用无菌水冲洗两次 再用10 的漂白粉澄清液浸泡20min后 切取舌状花约5mm见方大小 2 培养基与培养条件 MS培养基 添加BAl 3mg L NAA0 5 2mg L 置于温度25 左右 光照强度2000Lx 每天照光12h的条件下培养 或获得愈伤组织 第三节花卉植物的脱毒与快繁 四 菊花的脱毒 危害菊花的病毒有 菊花斑纹病毒 菊花矮缩类病毒 菊花轻斑驳病毒 番茄不孕病毒 此外还有畸花病毒 绿花病毒 褪绿斑驳病毒 花叶病毒等 第三节花卉植物的脱毒与快繁 1 茎尖培养脱毒 取顶芽或腋芽经表面消毒后 切取0 5mm以下茎尖进行培养脱毒 2 热处理脱毒 在35 36 的条件下栽培2个月 可以达到脱毒的效果 但是热处理只能除去菊花矮缩类病毒和番茄不孕病毒 四 非洲菊的组织培养 非洲菊 Gerberahybrida 属菊科大丁草属 多年生宿根草本花卉 全株具细毛 叶片基生 椭圆至长椭圆形 花序顶生 舌状花较大 排列成一轮或数轮 非洲菊性喜冬季温和 夏季凉爽的气候条件 最适生长温度为20 25 4 5月和8 10月为盛花期 喜阳光充足的环境 土壤要求有机质丰富 排水良好 pH值为6 6 5的微酸性壤土 一 形态特性和生物学习性 第三节花卉植物的脱毒与快繁 二 非洲菊组织培养育苗 1 取材消毒 常用花托作为外植体 用0 1 的吐温浸泡10 15min 取出洗净后再放入0 1 氯化汞中消毒20min 将花托切成2 3mm见方的小块 2 培养基与培养条件 初代培养基为MS BA2mg L 单位下同 十NAA0 2 IAA0 2 培养条件为24土2 光照强度为2000 30001x 每天光照12 16h 3 分化生根 转入MS Kt5 IAA0 2培养基进行分化培养 待苗高2cm时 转移到I 2MS十NAA0 1生根培养基中生根 第三节花卉植物的脱毒与快繁 五 矮牵牛的组织培养 矮牵牛 Petuniabybrida 又名碧冬茄 茄科 矮牵牛属 多年生草本植物 株高40 60cm 茎直立或卧倒 全身被短毛 上部叶片对生 中下部叶片互生 卵圆形 花单生于枝顶或叶腋间 花冠喇叭状 花色丰富 朔果卵形 矮牵牛原产南美洲 喜温暖 向阳和通风良好的环境条件 不耐寒 耐暑热 在炎热的夏季仍能正常开花 要求排水良好疏松的酸性沙质土地 一 形态特性和生物学习性 第三节花卉植物的脱毒与快繁 二 矮牵牛组织培养育苗 1 叶片培养 选择嫩叶作为外植体 进行常规消毒后将其切成5mm见方 接种到MS BA0 5的培养基上诱导愈伤组织及丛生芽 所得芽丛接种于MS BA0 05的继代培养基上 第三节花卉植物的脱毒与快繁 2 茎尖茎段接种 选择茎尖 带芽的茎段作为外植体 消毒后 切取茎尖0 5cm或带腋芽茎段lcm接种到MS BA1 IBA0 02的诱导培养基上 1周后 芽开始萌动 逐渐长大成新梢 继代可用切割茎段法进行 六 百合的组织培养 百合是百合科 Liliaceae 百合属植物的统称 为多年生的草本植物 鳞茎无皮 广卵形 白色或黄白色 茎高30 90cm 直立 上叶多而散生 披针形 花单生或数花横向着生茎顶 花朵呈喇叭状 筒状 有清香 百合属于球根花卉 要求肥沃 疏松和排水良好的沙壤土 以利于鳞茎发育 百合喜微酸性土壤 土壤pH值在5 5 6 5最为适宜 一 形态特性和生物学习性 第三节花卉植物的脱毒与快繁 二 繁殖方法 1 分球 使用百合老鳞茎 母球 生长过程中于茎轴上逐渐形成小鳞茎进行繁殖 2 鳞片扦插 使用成熟鳞叶进行扦插 3 叶插及分珠芽 使用地上茎进行扦插 或使用腋生珠芽进行繁殖 4 播种 第三节花卉植物的脱毒与快繁 1 花器的组织培养 1 取材和灭菌 采取开花前数日的花蕾 花蕾的表面用酒精灭菌 再在酒精灯上灼烧数秒钟 在无菌培养皿内剥开花蕾 花丝 子房 花柱等分别切取3 5mm长 接种到培养基上 也可用花瓣和萼片培养 2 培养基及培养条件 采用MS KC等培养基 蔗糖浓度以7 0 为适 发芽和子球形成率可达90 左右 光照度2000Lx 每天照用15h 保温20 三 百合组织培养育苗 第三节花卉植物的脱毒与快繁 2 鳞片组织培养初代培养 切取0 5cm见方鳞片小块接人MS 2 4 D1 IAAI Kt0 5培养基中 置于20土2 照光9 10h d 光强1200Lx条件下培养 诱导愈伤组织及不定芽 三 百合组织培养育苗 第三节花卉植物的脱毒与快繁 继代培养 将愈伤组织转移到分化培养基 MS NAA2 IBAO 4 Kt0 05 上 10周后 可分化出许多大小不等的鳞茎 并在小鳞茎的基部长出许多粗壮的根 第四节农作物的脱毒与快繁 第9章常见植物的脱毒与快速繁殖技术 一 甘薯的脱毒与快繁 甘薯 IpomoeabatatasL Lam 属于旋花科 是一年生植物 我国近年来甘薯种植面积达到666 7万公顷 占世界的80 以上 病毒病成为我国甘薯生产的最大障碍之一 如 甘薯花椰菜花叶病毒 SPCLV 甘薯羽状斑驳病毒 SPFMV 甘薯潜隐病毒 SPLV 甘薯脉花叶病毒 SPVMV 甘薯轻斑驳病毒 SPMMV 甘薯黄矮病毒 SPYDV 烟草花叶病毒 TMV 烟草条纹病毒 TSV 黄瓜花叶病毒 CMV 等 第四节农作物的脱毒与快繁 一 甘薯脱毒 1 取材 取枝条 去叶切成数段 每段带一个腋芽 2 消毒 常规消毒 3 剥离茎尖 剥去顶芽和腋芽上较大的幼叶 切取0 3 0 5毫米含1 2个叶原基的茎尖组织 接种在培养基上 4 茎尖培养培养基与培养条件 培养基为MS 0 1 0 2mg LIAA 0 1 0 2mg LBA 培养于温度25 28 光照度1500 2000lx 光照14h d的条件下 5 茎尖苗的初级快繁 将小植株切段进行短枝扦插 切段直插于MS培养基中 培养条件同茎尖培养 6 脱毒鉴定 病毒病症状学诊断法 指示植物检定法 电子显微镜检定法 血清学检测法 第四节农作物的脱毒与快繁 二 甘薯的快繁 1 脱毒苗的快繁 可使用1 2或1 4MS 大量元素 培养基进行增殖 2 原原种的繁育 在无病毒土壤上种脱毒苗 让其结薯 即为原原种薯 3 原种的繁育 以原原种为种植材料在无病毒土壤中栽种 结薯即为原种 4 种薯的繁育 种薯可分为不同的等级 一级种薯的生产要求 在隔离地块上栽培原种 地块四周500米以内的范围内不栽甘薯 种薯每种一年降一级 第四节农作物的脱毒与快繁 三 脱毒试管苗的大规模移栽技术及管理方法 1 培育壮苗2 适当炼苗3 精心移栽4 控制湿 温 光等条件5 适时定植6 严防病虫害 第四节农作物的脱毒与快繁 第五节药用植物的试管快繁 第9章常见植物的脱毒与快速繁殖技术 一 芦荟的试管快繁 百合科芦荟属植物共有300多种 为多年生常绿植物 分布于热带和来热带地区 由于芦荟具有多种药用功效和保健美容作用 近年来 芦荟产业已经在国内外成为新的开发热点 芦荟植株生长数年后才开花结实 种子一般也很少 而且种子细小 又不耐保存 存放一年后发芽率就很低 生产上常用的扦插和分株法都不能在短时间内提供大量种苗 因此 只有通过组织培养快繁方法 才能生产出大小一致 性状稳定的优良种苗 第五节药用植物的试管快繁 一 芦荟的试管快繁 1 初代培养物的建立 采用茎段和腋芽作为外植体 以MS为基本培养基 NAA为0 2mg L BA3 5mg L2 取材与消毒 截取上端嫩芽或侧芽 将生长点切成1 2cm的小块 冲洗干净 然后用2 洗洁精或饱和洗衣粉摇动5分钟 然后用70 的酒精灭菌1分钟 立即用0 15 升汞溶液再灭菌10分钟 最后用无菌水冲洗4 5次 3 培养条件 温度26 3 光照10 12h d 照度为1000 1500lx 空气湿度大 有利芦荟生长 第五节药用植物的试管快繁 二 桔梗的组织培养 桔梗为桔梗科属多年生草本植物 株高30 90cm 根肥大肉质 圆锥形 茎直立 叶片卵状至卵状披针形 先端尖 基部楔形或近圆形 边缘有不规则锯齿 花单生或数朵成疏生的总状花序 花冠呈状 蓝紫色或白色 大型 直径3 5cm 蒴果倒卵圆形 成熟时先端裂开 桔梗喜欢生长在阳光充足 温暖湿润 雨量充沛的丘陵地区 一 形态特性和生物学习性 第五节药用植物的试管快繁 二 桔梗的快繁 播种 用种量0 5 1公斤 亩 播后畦面盖稻草保湿 播后半月左右即可发芽出苗 组织培养 一般用茎尖和茎段作为外植体 接种和培养方法参照其他作物的方法 移栽 桔梗喜肥 生长期间宜多施追肥 一般结合中耕除草时追肥 第一次亩施稀淡人畜粪废水1000 1500公斤 第二次亩施猪烘水1500 2000公斤 促进根部生长肥大 注意雨季排水 第五节药用植物的试管快繁 第六节树木的脱毒与快繁 第9章常见植物的脱毒与快速繁殖技术 一 毛白杨的快繁 1 无菌苗的建立采用休眠芽作外植体 经消毒后 削取2mm长 带有2 3个幼叶的茎尖 接种于MS 0 5mg LBA 水解乳蛋白100mg L的预培养基上 经5 6d后 选择未污染的茎尖转MS 0 5mg LBA 0 02mg LNAA 赖氨酸100mg L上 培养室温度25 27 日光灯连续照光 光照度为1000lx左右 经2 3个月培养 部分茎尖即可分化出芽 第六节树木的脱毒与快繁 一 毛白杨的快繁 2 扩大繁殖 1 茎切段生芽扩大繁殖法 取诱导出的幼芽 从基部切下 转接到新的生根培养基上 MS 0 25mg LIBA 盐酸硫胺素10mg L 蔗糖浓度为1 5 2 叶切块生芽扩大繁殖法 从叶基部中脉处切取1 1 5cm 并带有约0 5cm长叶柄的叶切块 转接到诱导培养基上 MS 0 25mg LIAA 3 蔗糖 7 琼脂 约经10d培养 即可从叶柄的切口处观察到有芽出现 之后逐渐增多成簇 第六节树木的脱毒与快繁 一 毛白杨的快繁 3 移栽与管理 打开瓶口炼苗 逐渐降低湿度 并逐渐增强光度 进行驯化 使新叶逐渐形成蜡质 产生表皮毛 逐渐恢复气孔功能 减少水分散失 初始光照应为日光的