洋葱中黄酮的提取和纯化-论文.doc

科科技技创创新新论论文文 题题 目 目 洋葱中黄酮的优化提洋葱中黄酮的优化提 取取 1 目 录 摘要摘要 1 1 1 前言前言 1 2 2 实验材料与方法实验材料与方法 2 2 1 材料 2 2 1 1 实验材料 2 2 1 2 实验试剂 2 2 1 3 实验仪器 3 2 2 实验方法 3 2 2 1 材料处理 3 2 2 2 实验提取溶剂的选择 3 2 2 3 实验测定波长的选择 3 2 2 4 标准曲线的制备 3 2 2 5 正交实验设计 4 2 2 6 微波法测定洋葱黄酮类化合物 4 2 2 7 回流法提取洋葱黄酮类化合物 4 3 3 实验结果与分析 实验结果与分析 4 3 1 分析方法 4 3 2 实验结果 4 3 2 1 微波提取法与回流法测定结果的比较 5 4 4 讨讨 论论 5 5 5 参考文献参考文献 6 2 洋葱中黄酮的优化提取洋葱中黄酮的优化提取 摘要摘要 利用微波快速提取洋葱中黄酮类化合物 采用正交实验L9 34 优化实验条件 并 且对比研究了微波辅助提取法 MAE 与普通加热回法提取洋葱中黄酮的提取率 考察了提 取剂浓度 微波提取时间 微波功率 料液比等因素对洋葱中黄酮类化合物提取的影响 确定了微波法提取洋葱中黄酮类化合物最佳的工艺条件 确定了MAE提取洋葱中黄酮的最 佳条件为 提取剂浓度85 微波提取时间3min 微波功率600W 料液比1 20 与传统的 回流法进行比较 微波提取法具有提取效率高 所需时间短 提取溶剂用量少 操作方便 便于推广普及等优点 亦可用于其它样品的提取分析 关键词关键词 洋葱 微波提取 黄酮类化合物 正交实验设计 StudyStudy onon microwavemicrowave extractionextraction ofof totaltotal flavonesflavones fromfrom alliumallium cepacepa AbstractAbstract To optimize the extracting procedure for flavones from allium cepa Microwave assisted extraction MAE of flavones from allium cepa was optimized by an L9 34 orthogonal experiment And heating reflux extraction from onion were studied The effects of extracting solvent concentration extracting time microwave irradiation power ratio of material to liquor on the extraction yield were investigated And the optimal conditions of microwave assisted extracting flavones were obtained The optimized conditions were extracting solvent concentration 85 extracting time 3min microwave irradiation power 600W ratio of material to liquor on the extraction 1 20 Compared with the reflux MAE showed many advantages such as higher extraction yield shorter time use of less solvent being manipulated expediently and easy to popularize1 At the same time the method also could be used to distill and analyze other kinsmanship pattern KeywordsKeywords allium cepa microwave assisted extraction MAE flavones orthogonal experimental design 3 1 前言前言 洋葱 Allium Cepa Linn 又名玉葱 葱头 圆葱 属百合科葱属草本植物 通常所说的洋葱一般指普通洋葱 为多年生草本植物 具有强烈的香气 1 食 用可生可熟 可荤可素 肉质柔嫩 风味鲜美 含有蛋白质 碳水化合物 粗 纤维 维生素 胡萝卜素及钙 磷 铁矿质元素等多种营养成分 欧美国家誉 其为 菜中皇后 2 近年来 随着科学技术的快速发展和人民生活水平的提高 洋葱保健功能 逐步引起科研工作者的兴趣 对洋葱总黄酮 洋葱精油 多糖 葱色素 含氮 化合物等生理活性物质进行了研究 明确了洋葱较强的抗氧化 抗微生物 降 血糖 抗血栓 抗动脉粥样硬化 防治冠心病 抗糖尿病等多种作用 3 洋葱粗加工的产业发展已经具有了一定的规模 但洋葱类黄酮化合物的提 取方法和工艺尚未成熟 洋葱深加工和充分利用洋葱资源是我国食品工业的科 学发展方向 4 基于提取率 成本等因素的影响 通过对各种提取方法的比较 分析 从而探索开发出适合工业化生产应用的方案 提高洋葱的附加值 仍是 研究工作的重点之一 5 在洋葱生物活性物质研究方面 做得较好的要属日本 韩国 印度 德国 和美国等国家 6 而且 目前对洋葱生物活性物质的研究主要集中在含硫化合 物上 对类黄酮化合物的研究还有待进一步加强 特别是国内对洋葱的研究仍 处于起步阶段 大多集中在洋葱粗提取液的药理活性研究 因此 对洋葱类黄 酮化合物生理活性的应用研究是新药开发的一个重要课题 7 需要从更多的综 合性的试验来验证和探索 开展更深入的研究工作 而且要从整体 细胞和分 子水平上研究类黄酮化合物的作用机理 2 实验材料与方法实验材料与方法 2 1 材料材料 2 1 1 实验材料实验材料 4 新鲜洋葱 2 1 2 实验试剂实验试剂 芦丁 无水乙醇 5 亚硝酸钠 10 硝酸铝 1mol ml 氢氧化钠 2 1 3 实验仪器实验仪器 电子分析天平 微波炉 抽滤装置 烧杯若干 玻璃棒 容量瓶 圆底烧 瓶 吸耳球 滤纸 高速万能粉碎机 紫外线分光光度计 恒温干燥箱 回 流装置 2 2 实验方法实验方法 2 2 1 材料处理材料处理 洋葱经洗净后 切碎 置于80 恒温干燥箱中干燥12h 取出后用高速万能 粉碎机进行粉碎 过40目筛 备用 2 2 22 2 2 实验提取溶剂的选择实验提取溶剂的选择 常用的提取溶剂有甲醇 乙醇等 但由于甲醇毒性较大 对人体有一定的 危害 考虑到环保因素 本实验采用乙醇作为提取溶剂 8 9 2 2 32 2 3 实验测定波长的选择实验测定波长的选择 铝离子能与黄酮化合物形成稳定的配合物 在NaNO2碱性溶液中 于510nm处 有最大吸收 故选择510nm 波长为测定波长 10 2 2 42 2 4 标准曲线的制备标准曲线的制备 精确称取80 干燥至恒重的芦丁对照品0 0103g 用80 乙醇溶解 定容于 lOOml的容量瓶中 配制成0 103mg ml的芦丁对照溶液 精密吸取 0 0 0 5 1 0 1 5 2 0 2 5 3 OmL的芦丁对照品溶液于lOml容量瓶中 用 乙醇补充至3 0ml 加入5 亚硝酸钠溶液0 5mL 摇匀后放置6min 然后加入10 硝酸铝溶液0 5mL 摇匀后放置6min 最后加入1mol ml氢氧化钠溶液4mL 用80 乙 醇补充至刻度 摇匀后放置15 20min 以相应试剂做空白 于51Onm 处测定吸 光度 绘制标 准曲线见图1 5 图1芦丁标准曲线 2 2 5 正交实验设计正交实验设计 分别以乙醇浓度 料液比 微波萃取时间 微波功率为影响因素 以提取 含量为指标 进行L9 34 正交实验 其因素水平见表1 表1 正交实验因素水平表 因素 水平 1 2 3 A微波功率 W 600 700 800 B萃取时间 min 2 3 4 C乙醇浓度 80 85 90 D料液比 g ml 1 10 1 15 1 20 2 2 6微波法测定洋葱黄酮类化合物微波法测定洋葱黄酮类化合物 精确称取按2 2 1方法处理过的洋葱样品1 00g 于聚四氟乙烯溶样罐中 按 正交实验确定的最佳条件 加20ml85 乙醇后 600W微波处理3min 取出后冷却 然 后抽滤 分离残渣得提取液 再将提取液定容于25mL容量瓶中 准确吸取样品溶 液1 00mL 置于10mL容量瓶中 按标准曲线制备方法测吸光度 查标准曲线即得所 取样品液中黄酮类化合物的含量 2 2 7 回流法提取洋葱黄酮类化合物回流法提取洋葱黄酮类化合物 精确称取处理过的洋葱样品 1 00g 于 100mL 圆底烧瓶中 加入 80 乙醇溶 液 料液比为 1 50 在 90 水浴中回流 2h 11 定容后用上述标准曲线法测定吸 光度 计算得洋葱中黄酮类化合物的提取含量为 0 189 3 3 实验结果与分析实验结果与分析 3 1 分析方法分析方法 本实验采用正交试验法 3 2 实验结果实验结果 6 由正交实验结果得出 影响洋葱中黄酮类化合物提取含量的主次顺序为 微 波功率 微波萃取时间 料液比 乙醇浓度 提取黄酮类化合物的最佳工艺条件为 微 波功率600W 微波提取时间3min 提取溶剂85 乙醇 料液比1 20 3 2 1 微波提取法与回流法测定结果的比较微波提取法与回流法测定结果的比较 在最佳测定条件下 用两种提取方法分别做了5组平行实验 结果见表2 表2 微波协助提取法与回流法的结果比较 实验号微波协助提取法回流提取法 1 2 3 4 5 平均含量 相对标准偏差 置信区间 提取时间 料液比 g ml 0 1270 0 1273 0 1270 0 1265 0 1271 0 1270 1 7 0 270 0 005 3min 1 20 0 1187 0 1185 0 1189 0 1183 0 1181 0 1185 1 7 0 185 0 004 2h 1 50 从表2可以看出 微波协助提取法有明显的优点 其提取时间大大缩短 约为回 流法的1 24 提取溶剂的用量大为减少 结果另人满意 4 讨讨 论论 目前对洋葱的研究主要集中在含硫化合物上 黄酮类化合物 前列腺素类和 氨基酸类等的研究还有待进一步加强 对洋葱的深入研究将会为降血糖 降血脂 抗血栓 抗菌抗癌等天然药物的开发利用提供新的材料 总之 对洋葱的积极消 费 将为人们的健康作为更大的贡献 对洋葱中生理活性成分及其生理功能的应用 研究将开辟新药开发的新途径 7 参考文献参考文献 1 周长久 蔬菜种质资源概论 M 北京 北京农业大学出版社 1995 195 199 2 张京春 陈可冀 洋葱一全球性保健食品 J 国外医学 中医中药分册 2003 25 6 335 3 唐传板 植物功能性的食品 M 北京 化学工业出版社 2004 121 124 4 徐德锋 张卫明 孙晓明 洋葱皮中黄酮类化合物的初步分析 食品科技 2006 8 275 279 5 何照范 张迪清 保健食品化学及其检测技术 M 北京 中国轻工业出版社 1998 113 115 6 Bent HH The biochemistry and medical significance of the flavones J Pharmacology and Therapmaies 2002 96 67 7