反义HER-2neu寡聚核苷酸对卵巢肿瘤细胞增殖的影响.doc

反义HER-2/neu寡聚核苷酸对卵巢肿瘤细胞增殖的影响癌症 1999年第5期第18卷 论著摘要作者：吴林严隽鸿杨有文金由辛单位：吴林严隽鸿，上海第二医科大学仁济医院妇产科(上海，200001)；杨有文，首都医科大学北京神经科学研究所(北京，100054)；金由辛，中国科学院上海生物化学研究所通讯作者关键词：反义寡聚核苷酸；HER?2/neu；卵巢肿瘤中图分类号：Q74文献标识码：A 文章编号：1000467X(1999)05060101在卵巢肿瘤发生、发展过程中HER-2/neu基因呈高水平表达状态1，2，通过其反义寡聚核苷酸处理卵巢肿瘤细胞株3ao 10/3以探讨靶基因表达水平降低对卵巢肿瘤细胞增殖的影响。1材料与方法1.1材料卵巢肿瘤细胞株3ao 10/3购自中科院细胞所，反义HER-2/neu寡聚核苷酸自行设计合成，序列为5CAGCCCTGGTAGAGGTGGC3，HER-2/neu兔抗人多抗，羊抗兔IgG-HRP系华美生物工程公司产品。1.2细胞计数100ml的6个培养瓶中接种7.0105个3ao 10/3卵巢肿瘤细胞，培养过夜后，向其中3个培养瓶加2ml含20mol反义HER-2/neu寡聚核苷酸和15小牛血清的RPMI 1640培养液，另3瓶加等量的含15小牛血清的RPMI 1640培养液。12小时后每瓶均补加4ml培养液。3天后收集细胞计数。统计学检验采用t检验。1.3Western印迹法参考文献3进行。2结果2.1反义HER-2/neu寡聚核苷酸对卵巢肿瘤细胞增殖的影响实验至第3天，反义HER-2/neu寡聚核苷酸处理组细胞总数为6.191060.613106，未处理组为9.231060.66106。反义HER-2/neu寡聚核苷酸处理组细胞总数显著少于对照组(P0.05)。2.2反义HER-2/neu寡聚核苷酸对HER-2/neu蛋白表达的影响Western印迹结果表明经反义HER-2/neu寡聚核苷酸作用的卵巢肿瘤细胞，HER-2/neu蛋白表达水平低于未处理组(图1)。图1Westernblot结果1.分子量标准；2.示处理的卵巢肿瘤细胞；3.反义HER-2/neu寡聚核苷酸作用的卵巢肿瘤细胞3讨论HER-2/neu基因在卵巢肿瘤发生中的异常表现为过度表达2，4。近年尽管对其进行了大量的研究，但仍不清楚HER-2/neu基因高水平表达是卵巢肿瘤发生的原因还是其发生的结果。因此有必要寻找一种方法对其进行判别。反义寡聚核苷酸能与双螺旋DNA结合形成三股螺旋或与局部解链的DNA单链结合而抑制DNA的复制和转录，也可与mRNA靶序列结合而阻断mRNA的加工、成熟、核浆转移和翻译，从而对靶mRNA的表达实现抑制作用。本研究以HER-2/neu基因的反义寡聚核苷酸处理卵巢肿瘤细胞株3ao 10/3，发现反义HER-2/neu寡聚核苷酸不仅降低HER-2/neu基因的表达水平，而且抑制卵巢肿瘤细胞的增殖(P0.05)，提示HER-2/neu基因过度表达可能是某些卵巢肿瘤发生的原因之一。参考文献1Giannios J,Ioannidou-MouzakaL. Molecular aspects of breast and ovarian cancerJ. Eur J Gynaecol Oncol,1997,18(5):387393.2Bast RC Jr,Boyer CM,Jacobs I,et al. Cell growth regulation in epithelial ovarian cancerJ. Cancer,1993,71(4suppl):15971601.3Aosubel FM,Brent R,Kinggstry RE,et al. Short protocols in molecular biologyM. Published by Greene Publishing Associates and Wiley Interscience,1989:304306.4King BL,Carter D,Foellmer HC,et al. Neu proto-oncogene amplification and expression in