妇科再造丸对体外酪氨酸酶活性的抑制作用.doc

妇科再造丸对体外酪氨酸酶活性的抑制作用作者：张晴，罗俊，黄能慧 【摘要】 目的研究妇科再造丸对体外酪氨酸酶活性的影响。方法酪氨酸酶多巴速率氧化法测定妇科再造丸对体外酪氨酸酶活性的抑制率。结果妇科再造丸各剂量组均能抑制体外酪氨酸酶活性，其中妇科再造丸高剂量组抑制率达到41%。结论妇科再造丸对体外酪氨酸酶活性有抑制作用，提示妇科再造丸对皮肤色素沉着可能有一定的治疗效果。 【关键词】 妇科再造丸 色素沉着 酪氨酸酶Abstract：ObjectiveTo study the inhibitory effect of Fu-Ke-Zai-Zao Pill on Tyrosinase activity in vitro.MethodsTyrosinase activity in vitro was measured by the rate of oxidation of L-Dopa. ResultsThree dose groups all had inhibitory effect on tyrosinase activity , especially in high dose group(41%). ConclusionFu-Ke-Zai-Zao Pill can inhibit tyrosinase activity, which maybe the mechanism that make it valid in treating skin pigmentation.Key words：Fu-Ke-Zai-Zao Pill; Pigmentation; Tyrosinase皮肤色素沉着是临床常见疾病，发病人群广泛，在影响患者容貌的同时还会造成心理压力。酪氨酸酶是皮肤黑色素合成过程中的限速酶1，2。如果它的活性受到抑制，就能使黑色素的合成减少。妇科再造丸由四十余味中药材组成。据文献报道，其组方中的当归、熟地、黄芪、白芍、川芎、益母草、茯苓及山药等多味中药均有抑制酪氨酸酶活性的作用3，4。因此，我们探讨了妇科再造丸对体外酪氨酸酶活性的影响，旨在为其进一步开发利用提供科学的理论依据。1 材料与仪器1.1 试剂妇科再造丸（贵阳德昌祥制药有限公司，批号051126），左旋多巴（L-Dopa，Sigma公司），酪氨酸酶(Sigma公司)，熊果苷（北京贝丽莱日用化工厂，批号 060502）。1.2 仪器721型分光光度计（上海第三分析仪器厂），AB104-N型电子天平（Metter-Toledo Group）。2 方法2.1 药物制备5取研磨成粉末的妇科再造丸置于烧杯内，加相当于药量57倍的蒸馏水浸泡12 h，煮沸30 min，过滤。滤渣加35倍量蒸馏水继续煮沸20 min，过滤，合并两次滤液，于水浴上浓缩成每毫升相当于原料药1 g的药液。用pH 6.8，1/15molL-1 的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液配制为高（100 mgml-1）、中（50 mgml-1）、低（25 mgml-1）3个剂量组。阳性对照熊果苷，用Na2HPO4-KH2PO4缓冲液配制成15 mgml-1。酪氨酸酶用Na2HPO4-KH2PO4缓冲液配制成1 000 uml-1。L-Dopa用Na2HPO4-KH2PO4缓冲液配制成0.1%的溶液。2.2 方法6，7取1 ml不同浓度的妇科再造丸溶液，加入酪氨酸酶100 l(100 u)，37孵育10 min。加入0.1% L-Dopa溶液1 ml，继续在37孵育5 min，立即于分光光度计475 nm处测A475。用15 mgml-1的熊果苷作为阳性对照组。每一实验均重复6次。实验结果用Excel2003统计软件进行t检验。2.3 检测指标测定溶液的A475，并按下列公式计算酪氨酸酶活性抑制率：抑制率(%)=(A-B)-(C-D)/（A-B）100式中A=A475药+酶 ：加1ml缓冲液与100 l 酪氨酸酶B=A475药酶 ：只加1.1ml 缓冲液，不加酪氨酸酶C=A475+药+酶 ：加1ml不同浓度的妇科再造丸与100l酪氨酸酶D=A475+药酶 ：加1ml不同浓度的妇科再造丸与0.1ml缓冲液3 结果实验结果表明，妇科再造丸3个剂量组对体外酪氨酸酶活性均有不同程度的抑制作用，其中妇科再造丸高剂量组抑制率达41%，与熊果苷组比较，抑制率无显著性差异（P>0.05）。结果见表1。表1 妇科再造丸对体外酪氨酸酶活性的抑制率（略）4 讨论色素沉着部位主要在表皮基底层，其发病机制主要与皮肤中黑色素细胞增多、合成黑色素能力增强有关。最新的研究表明， 黑色素的生成是以酪氨酸为基质,在酪氨酸酶、多巴色素互变酶和DHICA氧化酶作用下形成的8。酪氨酸酶在这一系列反应中起着至关重要的作用，是黑色素合成过程中的限速酶，其表达和活性决定着黑色素生成的量和速度。如果酪氨酸酶的活性受到抑制，就能使黑色素的合成减少，就能在一定程度上预防和治疗色素沉着。实验结果显示妇科再造丸3个剂量组对体外酪氨酸酶活性均有不同程度的抑制作用，且随着妇科再造丸剂量增加，抑制作用增强。其中妇科再造丸高剂量组与熊果苷组比较，抑制率无显著性差异。说明妇科再造丸的确能抑制酪氨酸酶活性，且作用不亚于熊果苷，提示妇科再造丸对于治疗皮肤色素沉着可能有一定的应用前景。【参考文献】 1Maeda K,et al.J Pharm Exp Therapeutics,1996,276(2):7652Shirota S,et al.Biol Pharm Bull,1994,17(2):266.3雷铁池,朱文元,夏明玉,等.中药对黑素生物合成影响研究I-82味中药乙醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用J.中草药,1999,30（5）:336.4王福兴,陈前进.具抑制酪氨酸酶活性祛斑增白药物J.中国医院药学杂志,1999,19（8）:479.5魏振承,孙 玲,张 雁,等.大豆异黄酮对酪氨酸酶抑制作用的研究J.广州食品工业科技,2004,20（3）：10.6Masamoto Y,