HBsAg II 04860586001V8.doc

04860586001V8乙型肝炎病毒表面抗原II（HBsAg II） 04687787 190 100测试l 本试剂盒适用的分析仪Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601主要用途用于体外定性检测人体血清或血浆中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）。Elecsys和cobas e 免疫分析仪的工作原理是电化学发光免疫分析“ECLIA”。注册证明Elecsys HBsAg II检测按照98/79/EC的指示进行CE标记。检测性能依据诊断和血制品筛查的普通技术规范（2002/364/EC）进行建立和认证。临床应用乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）是乙型肝炎病毒(HBV)颗粒的外衣壳成份，是一种分子大小不一的多肽。1感染乙肝的患者血液中不仅存在完整的具有感染性的HBV颗粒，同时也存在小的不具有感染性的空衣壳颗粒。2HBsAg的亚基抗原决定簇为所有HBsAg颗粒的共同免疫反应区域。包括亚基，HBsAg还具有d,Y,w1-w4,r和q亚基。3在抗病毒治疗或自身免疫应答的压力作用下，病毒能够表达多种适应生存的HBsAg突变株（也称为突变脱逃）。一些突变能导致一些商业化的HBsAg检测出现漏检。4Elecsys HBsAg II检测为了检测出这类突变进行了特别设计。检测人血清或血浆中HBsAg能够提示乙型肝炎病毒的感染。HBsAg是感染HBV后最早出现的免疫学指标，往往早于临床症状数天或数周出现。急、慢性HBV感染均会出现HBsAg。检测HBsAg临床可应用于HBV的诊断以及输血或血制品的筛查。HBsAg检测也适用于急、慢性HBV感染的病程进展和抗病毒治疗的疗效监测。6此外产前筛查建议检测HBsAg以防止将HBV垂直传播给胎儿。7，8Elecsys HBsAg II检测使用单克隆和多克隆抗-HBs抗体（鼠和羊）。检测原理双抗体夹心法，总检测时间：18分钟l 第一次孵育：50l标本、双生物素化的抗-HBs单克隆抗体和钌（Ru）a标记的抗-HBs多克隆抗体一起孵育，形成抗原抗体复合物。l 第二次孵育：添加包被链霉素的磁珠微粒进行孵育，复合体与磁珠通过生物素和链霉素的作用结合。l 将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面。未与磁珠结合的物质通过ProCell被去除。给电极加以一定的电压，使复合体化学发光，并通过光电倍增 器测量发光强度。l 仪器自动通过样本的信号值与先前定标获得的cutoff值的信号值进行比较得到检测结果。试剂工作溶液M包被链霉素的磁珠微粒（透明瓶盖），每瓶6.5ml；包被链霉素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐剂。R1 生物素化的抗-HBs抗体（灰盖），每瓶，8ml；双生物素化的单克隆抗-HBs抗体（鼠），浓度0.5 mg/L，磷酸缓冲液100mmol/L，pH 7.5；防腐剂。R2 Ru(bpy)32+标记的抗-HBs抗体（黑盖），每瓶，7ml，抗-HBs单克隆抗体（鼠），钌标记的多克隆抗-HBs抗体（羊），浓度1.5 mg/L，磷酸缓冲液100mmol/l，pH8.0；防腐剂。Cal1 阴性校准品1（白盖）：2瓶，每瓶1.3 mL人血清；防腐剂Cal2 阳性校准品2（黑盖）：2瓶，每瓶1.3 mL包含HBsAg浓度约为0.5 IU/mL的人血清；防腐剂警告和注意事项仅用于体外诊断。在使用本试剂盒时必需遵循所有试验室试剂操作的注意事项。所有废弃物必需按照当地法规进行处置。专业人员可要求获得安全数据报告。所有人源性物质必须视为有潜在感染性。来源于人血液的所有产品由献血员提供，经特殊制备而成，经检测HBSAg、HCV抗体(仅Cal 1)、HIV抗体，均为阴性。所应用的检测方法经FDA认可或符合欧洲法令98/79/EC附件II列表A。含有抗HCV的血清（Cal2）经-丙稀内酯和UV射线灭活。但由于任何实验方法都不能绝对地排除潜在感染的危险，故该产品仍需视作病人样本一样仔细处理。接触者必须遵循健康专业机构相应的法规9.10。若试剂超过保质期，则不能再使用。避免试剂和样本（样本、定标液和质控品）产生气泡。试剂处理试剂盒（M,R1和R2）为即用型，不能分开使用。Elecsys 2010和cobas e 411分析仪：定标液Cal 1和Cal 2使用前必须室温平衡(20-25C)。定标吸样结束后，应立即盖好瓶盖，2-8C储存。确保定标液瓶盖不粘有定标液，考虑蒸发因素，每瓶定标液定标次数不宜超过5次。MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪:不要把整瓶定标液放在分析仪上进行定标，可使用专用小空瓶分装定标液，并贴上标签，2-8C下储存。每瓶定标液一次使用。试剂相关信息可以通过试剂条形码阅读获取。储存及稳定性存放于28。请垂直摆放Elecsys TSH试剂盒，确保仪器的自动搅拌器能够完全混匀磁珠微粒。稳定性：未开封试剂，28有效期内均可使用开封试剂，288周放置分析仪MODULAR ANALYTICS E170 和cobas e 601上4周放置分析仪Elecsys 2010 和 cobas e 411上4周定标液稳定性开封后288周2025，在Elecsys 2010和cobas e 411分析仪上最长可保存5小时MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601 分析仪只可使用一次定标液的储存应垂直向上摆放！确保定标液瓶盖不粘有定标液。样本的采集和准备仅以下罗列的样本类型通过测试并符合检测要求。血清样本须用标准试管或有分离胶的真空管收集。肝素锂、EDTA-和枸橼酸-血浆都适用。标准：通过阴性和阳性标本进行纠正。稳定性： 2-8可保存5天；-20可保存3个月，可冻融4次。选择合适的试管进行不同类型样本的采集，不是所有的试管均可用于检测。不同厂商的样本采集系统可能含有不同的物质，某些情况下会影响检测结果。如果使用原始管进行检测（样本前处理系统）时，应遵循生产商所提供的指导。有沉淀和冰冻的样本检测前必须先作离心处理。避免使用热灭活的样本。添加叠氮化合物的样本和质控品均不能使用。检测前，样本、定标液及质控品须室温平衡(20-25)。由于蒸发因素的影响，样本、定标液及质控品在分析仪上的检测必须2小时内完成。提供的物品参阅“试剂工作溶液”章节。l 2 x6小瓶标签需要的物品（未提供）l 货号04687876190, PreciControl HBsAg II, 规格8 x1.3 mL，分别为PreciControl HBsAg II 1和2l 货号11820648122, HBsAg确认试剂，规格2 x1 mL，分别为确认和质控试剂l 货号11776576322，定标专用瓶，规格2 x56 有盖空瓶l 实验室基础设备l Elecsys 2010 、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析仪Elecsys 2010和cobas e 411分析仪所需材料：l 货号11662988122, ProCell, 6 x 380 mL ,系统缓冲液l 货号11662970122, CleanCell, 6 x 380 mL,测量池洗液 l 货号11930346122, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL 附加洗液l 货号11933159001, SysClean 适配器 l 货号11706802001, Elecsys 2010 分析杯, 60 x 60 反应管l 货号11706799001, Elecsys 2010 分析吸头, 30 x 120 移液管吸头 MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪所需材料：l 货号04880340190,ProCell M, 2 x 2 L 系统缓冲液l 货号04880293190, CleanCell M, 2 x 2 L测量池洗液 l 货号03023141001, PC/CC杯, 12个用于在检测前预热Procell M及Cleancell M。l 货号03005712190,ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在检测完毕后或更换试剂时清洗试剂针。l 货号12102137001,反应杯/吸头 组合装,84反应杯/吸头 组合装48盒,废物袋 l 货号03023150001, WasteLiner,废物袋 l 货号03027651001,系统清洁适配器 M所有分析仪需要：l 货号11298500316, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系统清洗液 检测要优化检测性能，请遵照本说明书中有关分析仪的相关指导，并参照分析仪操作手册。试剂使用前分析仪自动搅拌磁珠微粒，使其处于悬浮状态。试剂相关信息可通过条形码自动读取，在特殊情况下，分析仪无法自动读取条码信息时，请输入条码标签上的15位数字序列。MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys2010和cobas e分析仪：将冷藏试剂室温平衡至20C左右，放置分析仪的试剂盘（20C）内。避免泡沫产生。分析仪能自动调节试剂温度和开、关各试剂盒瓶盖。将定标液1和2放置于仪器的进样区域。仅在需要定标时才将盖子打开。所有定标所需要的信息可通过条码阅读自动获取。定标后立即将定标液1和2置28保存或丢弃。（MODULAR ANALYTICS E170和cobas e分析仪）定标溯源性：该检测可溯源至NIBSC参考标准(编码：00/558；WHO第二次HBsAg国际标准，adw2亚型，A基因型；IU/Ml)。下列Paul-Ehrilich-Institute的参考物质（德国Langen），单位U/mL,与WHO标准的换算关系如下：PEI标准AD（信息表1985，AD亚型；1000 U/mL;灭活）PEI标准AY（信息表1985，AY亚型；1000 U/mL;灭活）（1 IU/mL WHO标准相当于0.34 U/mL PEI标准AY和0.44 U/mL PEI标准AD）定校频率：新批号试剂必须进行定标（新试剂盒在分析仪上放置不能超过24小时）。以下情况建议重新进行定标：MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 和cobas e 分析仪:l 使用同一批号试剂，1月后（28天）l 7天后（同一试剂盒在分析仪上使用）l 根据需要：如失控。l 根据规定可增加定标的频率定标液的信号值约为：阴性校准品（Cal1）:600-1700；阳性校准品（Cal2）:3000-11000质控室内质控可使用Elecsys PreciControl HBsAg II。各浓度质控至少每24小时内检测一次，每次更换试剂盒或定标后也须进行质控。每个实验室可根据各自的情况设定合适的控制限和质控周期。质控值必须处于规定的控制限内。若失控每个试验室必须采取相应的纠正措施。如果需要应重复检测样本。注意：应技术原因须重新设定质控靶值时必须手工输入。因此请保存质控品盒内的赋值表以保证取值的正确。当使用新批号的试剂或质控时，仪器能够读取质控条码的原始赋值。请遵循关于质量控制的政府规定或当地导则。计算仪器通过测定校准品1和2的值自动计算cutoff值。样本的结果以有反应性（reactive）或无反应性（non- reactive）和cutoff指数（COI,样本信号值/cutoff值）表示。结果解释样本的COI0.9判断为无反应性，这些样本可认为HBsAg阴性，无须进一步实验。样本的COI0.9但1.0判断为临界。样本的COI1.0判断为有反应性。所有初次检测有反应性或临界的样本必须重复双份检测，如果COI均值0.9判断为阴性。如果任一一次COI0.9判断为重复试验有反应性。重复试验有反应性的样本必须进行单独的抗体中和实验（Elecsys HBsAg 确认试验）。经确认试验确定的样本判断为HBsAg阳性。干扰因素检测结果不受黄疸（胆红素684mol/L或40 mg/dL）, 溶血（血红蛋白1.24 mmol/L或 2 g/dL）, 脂血(甘油三酯22.8 mmol/L或2000mg/dL)和生物素164 nmol/L或 5mg/天），必须在末次生物素治疗8小时后采集样本。浓度高达6210 IU/ml的类风湿因子对检测无影响。浓度高达1500000 IU/mL的HBsAg不会产生HOOK效应的影响。浓度高达3678 mg/dL的免疫球蛋白IgM；浓度高达3250 mg/dL的免疫球蛋白IgA和浓度高达3817 mg/dL的免疫球蛋白IgG不对检测的敏感性和特异性造成影响。体外对21种常用药物进行试验未发现会影响检测结果。鉴于目前掌握的知识，任何可靠的HBsAg检测均不能检测出所有的感染血液标本或个人。阴性结果不能够排除可能的暴露或HBV感染。个别曾经暴露过的个体阴性的结果可能是由于抗原的浓度低于检测方法的灵敏度或与检测方法所使用的检测抗体缺乏特异性的反应。少数病例中极高浓度的HAMA、链霉素抗体钌抗体会影响检测结果。通过适宜性的实验设计可将影响因素降到最低。这些影响通过合适的实验设计可以避免。MODULAR ANALYTICS E170和cobas e分析仪：保证特殊清洗程序的设置（ScreenUtilitySpecial WashImmune）Elecsys HBsAg II检测与其它所有的检测项目共存时须设置，包括Elecsys HBsAg II之间：如果添加了新检测项目必须及时更新特殊清洗的程序设置。对于Elecsys Anti-HBs检测必须保证“步骤1”和“步骤2”被激活：仪器特殊清洗程序须手工设置，具体内容可参见仪器操作手册。作为诊断指标，必须结合患者病史，临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果。特殊的性能指标试剂在分析仪上的性能试验数据如下。各实验室由于具体情况不同，所得出的数据可能会稍有差异。精密度应用Elecsys试剂盒、人血清和质控品验证重复性（批内n=21；批间n=10）；总精密度由 MODULAR ANALYTICS E170分析仪完成按照CLSI的EP5-A执行：每天6次，共10天 (n=60)。下面是获得的结果。分析灵敏度（最低检出限） 灵敏度通过测定系列HBsAg阴性的人血清稀释HBsAg标准品（ad和ay）的信号值获得。分析特异性使用Elecsys HBsAg II试剂盒检测含有可能干扰物质的1596份样本：l 含有抗HAV、HCV、HIV、HTLV、CMV、EBV、HSV、风疹病毒、微小病毒、VZV、刚地弓形虫、苍白密螺旋体、疏螺旋体、李斯特菌抗体l 含有自身抗体（ANA,SLE）以及高滴度的类风湿因子或HAMA抗体l 腮腺炎，麻疹和疟疾阳性l HBV和流感疫苗接种后l 单克隆丙种球蛋白血症和多发性骨髓瘤的病人，透析病人，酒精性肝病病人l 妊娠妇女无假阳性结果的出现。14例样本为HBsAg阳性（HAV,HIV,HTLV和EBV抗体阳性各1例；1例为透析病人；9例为妊娠妇女）。2例样本（1例为HBV疫苗接种后，1例为RF升高）初次结果阳性，但重复检测结果为阴性。总体特异性为100（95的置信区间单侧为99.81）。临床灵敏度1025份不同疾病时期的HBsAg确认阳性标本使用Elecsys HBsAg II检测。1024份结果均吻合（1例样本重复检测为阴性（COI 0.81-0.88），抗体中和确认实验均为阳性；第三代HBsAg试剂检测为阴性，Anti-HBs检测为阴性，Anti-HBe检测为阴性，HBeAg检测为阴性，Anti-HBc检测为阳性）。该组1025份样本的灵敏度为99.9。总共156份不同基因型的样本（基因型A 30份；基因型B 8份；基因型C 11份；基因型C/E 1份；基因型D 68份；基因型E 17份；基因型F 17份；基因型G 3份；未确定 1份）和所有已报道的HBsAg亚型（CNTS，9种亚型）使用Elecsys HBsAg II检测，除6份样本（2份基因型A，1份基因型D和3份基因型E）其余均为阳性，且HBV-DNA检测均为阴性或低值（其它HBsAg检测方法均为阴性）。115份包括不同HBsAg突变的样本使用Elecsys HBsAg II和其它3种认证试剂同时检测。突变类型Elecsys HBsAg II检测数/阳性野生突变型1（由于疫苗抵抗，人HB免疫球蛋白治疗后产生耐受或HBsAg反应性修补所造成的氨基酸序列置换形成的突变株）41/40d野生突变型2(其它氨基酸序列的改变形成的突变株)24/24野生突变型319/17 e重组突变型31/31总计115/112d)G145R突变株的所有检测结果为阴性（COI 0.1-0.8）；所有检测均使用稀释液（FCS:胎牛血清）1：40稀释检测。e)M133L/M143T/G145R突变株和T45S/149R/133T114/186P突变株的所有检测结果为阴性；突变株第一次检测使用三种试剂（COI 0.03-0.76）；突变株第二次检测使用四种试剂（COI 0.03-0.78）Elecsys HBsAg II检测8个性能测试盘（Boston,Biomedia公司产品）的结果与预期值的相关性较好（150例样本140例阳性结果）。所有预期阳性的样本使用Elecsys HBsAg II检测的灵敏度为100。临床特异性6360份健康献血员的样本经Elecsys HBsAg II检测的结果如下：初次有反应性（IR）的特异性为99.91；重复检测有反应性（RR）的特异性为99.98。3593份常规临床样本（住院病人，门诊病人，外科手术前病人，医疗保健工作者和盲样）的特异性（IR和RR）均为99.88。f)5例样本由于样本量不足无法重复检测g)55例样本由于样本量不足无法进行抗体中和实验；1例样本Elecsys HBsAg II检测的结果为阴性血清与血浆的结果比较同时收集27份HBsAg阴性献血员和部份HBsAg暴露者的血清、肝素锂血浆、EDTA血浆和枸橼酸血浆样本。回收实验发现阴性及阳性血浆样本的结果与血清一致。血清分离管（SST）与血浆分离管（PST）的结果比较同时收集25份HBsAg阴性献血员和部份HBsAg暴露者的血清、SST血清和PST血浆样本。回收实验发现阴性及阳性SST-/PST-样本的结果与和血清一致。所有样本均适用于Elecsys HBsAg II检测。血清转化盘血清转化灵敏度通过Elecsys HBsAg II检测56份商业化血清转换盘并与其他认可的HBsAg试剂结果比较获得。所有转化盘样本Elecsys HBsAg II检测的结果均早于或相当其它的HBsAg试剂。参考文献1. 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