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第一章 脱落细胞检查技术和临床应用评价 脱落细胞学：是对人体各部位特别是管腔器官表面的脱落细胞，或对病变组织通过细针吸取的方法获得的细胞染色并在显微镜下观察作出诊断，又称诊断细胞学。标本来源：自然排出物 体腔抽出液 细针穿刺吸取液第一节 标本采集和涂片制作一、标本采集原则：尽量减少受检者的痛苦，取得合作；方法简便、实用、经济；尽量取得足够供诊断的细胞成分；及时快速送检立刻制片；绝对避免污染；标本号标记清楚。途径： 细针穿刺；脱落细胞学检查常用方法直视采集法：直接用刮片刮取、吸管吸取、刷洗自然分泌液采取法：痰涂片、尿液涂片、前列腺液涂片、乳头溢液涂片灌洗法：空腔器官、盆腔或腹腔摩擦法：鼻咽、食管、胃针穿抽吸法：浆膜腔关节腔积液，淋巴结、软组织、甲状腺、肝浆膜腔积液的处理w 抽出应立即送检（4保存，24h内处理完标本）w 对检查影响较大的是过多成熟的红细胞和标本的严重凝固，需处理，淋巴细胞分离液或低渗方法可去除红细胞，凝固的积液将凝块吸出，剩余液体离心涂片。二、涂片制作（一）要求： 1 标本要新鲜 2 操作要轻柔：细胞分布均匀；薄厚适当勿挤压摩擦，以免细胞损伤变形； 3 玻片要清洁 4 涂片要牢固 5 涂片数量 6 标号准确 （二）涂片制备方法推片法 涂抹法 压拉涂片法 吸管推片法 喷射法 印片法 （三）涂片的固定目的：保持细胞形态结构，防止其自溶。 固定液：首选95酒精，乙醇乙醚，氯仿乙 醇 注意事项：巴氏染色，涂片勿在空气中干燥后染色；固定时间不短于15分钟（48h内进行巴氏染色）；固定液要达到90以上；液体标本离心后涂片，待潮干后再固定，宫颈的刮片、痰涂片、拉网涂片、内窥镜的刷片、针吸涂片应立即固定。干燥固定固定时间：1530min固定方法：带湿固定（四）涂片的染色 目的：使细胞结构清晰显示；应用各种染色使细胞浆与核恰当显示不同颜色；使细胞透明度高，结构清晰。 方法：常规染色为巴氏染色，配合HE、Giemsa、特染等。 1巴氏染色法 水化：固定好的涂片80、70、50乙醇蒸馏水 各1min 染核：苏木素染35min 分色：1盐酸中数秒，水洗 蓝化：置饱和碳酸锂溶液中1min，水洗 脱水：50、70、80、95乙醇各1min 染浆：置于橘黄G液中染24min95乙醇洗2次置于 EA36染液中45min 脱水：95、无水乙醇各12min二甲苯透明2 3min 2 封片：中性树胶封固 适用于上皮细胞染色和阴道涂片观察女性激素的影响 优点：细胞具有多色性 缺点：染色程序较复杂 结果判定：胞核呈紫蓝色，核仁红色，底层细胞、中层细胞和表层角化前细胞为淡蓝色，不全角化细胞（角化前细胞）呈粉红色，角化细胞呈桔黄色。注意事项：w 染液要充分溶解w 苏木素要染前月余配制，用时每天过滤1次，加新液。室温低时不易着色，可20的假阴性 2 具体部位难确定 3 肿瘤分型困难 4 非肿瘤性疾病诊断研究少细胞诊断学与病理诊断的关系： 细胞学诊断准确性低于病理组织学诊断，因此细胞学诊断有赖于病理组织学诊断的证实。辅助检查：组织化学 免疫组化 流式细胞仪DNA分析 染色体倍体分析 电镜第二章 脱落细胞检查的基本知识第一节 细胞诊断学的基本概念一、细胞增生活跃 细胞体积增大，核明显增大，核染色质增多，颗粒增粗，核仁增大增多，核浆比例失常，胞浆蓝染（巴氏），可伴核分裂像。二、组织修复细胞 组织损伤或修复过程中从新生上皮脱落下来的细胞 特征：细胞多成片出现，似合体细胞，排列规则；细胞稍增大，胞核也增大，核不深染，胞浆尚丰富，深染；核仁明显增大或增多；可能出现核分裂像 。三、细胞化生1未成熟的鳞状上皮化生细胞的特征：似正常上皮外底层细胞大小；多成群出现，可呈铺砖式排列；细胞呈圆或卵圆形，边缘有小突起；胞浆常有小空泡使胞浆透亮。2成熟的鳞状上皮化生细胞的特征：细胞似正常鳞状上皮中层细胞大小；多成群出现，细胞呈多边形，有锐角突起，形态多样；胞浆中常见小空泡。胞浆少，排列紧密，无细胞间桥。四、储备细胞增生 储备细胞是柱状上皮细胞下的一层具有分化潜能的幼稚细胞（或未分化细胞）。 形态特征：细胞小，似鳞状上皮内底层细胞大小；圆或卵圆形，胞浆有小突起；胞浆淡染可见小空泡；核偏位，可能大小稍不一致； 核染色质匀细，可见核仁和几个大小一致的核粒：细胞常成群，有时彼此相连；其周围常伴化生细胞。五、细胞增生细胞分裂增强，数目增多，体积可增大，形态可出现异常。细胞大，核大，核染色质增多、增粗，双核或多核，核仁明显，核膜增厚，甚至轻度不规则。可分为轻度和重度增生。六、细胞分化从幼稚细胞发育成具有完备结构和功能的成熟细胞的过程。上皮细胞分化的形态表现：1 细胞体积由小到大 2 胞浆量由少到多 3 核浆比由大到小4 饱和由大到小 5 染色质排列由疏松到致密 6 核仁由大到小，由多到少七、细胞核分裂像 病理性分裂像应与核碎裂鉴别（核染色质呈大小不等的块状）八、细胞退行性变 细胞退变包括变性和坏死，涂片中二者鉴别较困难，统称退变。 1人工引起的退变 原因：标本放置过久，细胞自溶；细胞置于高渗或低渗溶液中；固定液浓度或时间不适合，过湿或过干 形态特征：细胞呈大片结构不清，细胞均增大或均缩小，胞浆多呈红染，各种类型细胞退变形式一致。2细胞自然退变 原因：细胞脱落过久，细胞营养不良，炎症、放疗、化疗的影响，肿瘤表面供血不足，细胞生理性衰老类型：（1）肿胀性退变细胞及胞核肿大，染色质模糊、断裂并淡染，核内有空泡。胞浆空泡状、蜂窝状或网孔状，胞界不清胞膜消失。（2）固缩性退变细胞及胞核缩小，胞浆红染、橘黄、淡黄或多彩，常出现核周晕，核固缩，染色质致密，核碎裂核膜消失。第二节 正常脱落细胞形态 一、上皮细胞（一）复层鳞状上皮 由底层到表层分为：基底层、中层、表层1基底层细胞：（1）内底层细胞：单层立方或柱状，很少脱落。 （2）外底层细胞：23层2中层细胞 3表层细胞 （1角化前细胞 （2不全角化细胞 （3完全角化细胞（二）柱状细胞类型：单层柱状上皮、假复层纤毛柱状上皮、复层柱状上皮涂片中常见： 1 纤毛柱状上皮细胞 2 黏液柱状上皮细胞 3 储备细胞（三）移行上皮细胞 1表层 2中层 3低层（四）上皮细胞成团脱落的形态 1鳞状上皮 2 纤毛柱状上皮3 黏液柱状上皮二、间皮细胞1分化程度：成熟型和幼稚型 2大小：大、中、小3胞浆嗜色性：嗜酸性、嗜碱性4花边间皮细胞5创伤性间皮细胞三、非上皮细胞 1内皮细胞 2成纤维细胞 3组织细胞4多核异物巨细胞 5血细胞四、背景成分红细胞 炎细胞 多核巨细胞 坏死 黏液等炎症增生时脱落细胞的形态一、一般形态特征（一）上皮细胞 急性炎症：退化变性坏死 慢性炎症：增生再生化生，退化变性1鳞状上皮细胞 （1）细胞核：核肥大、核固缩、核碎裂（2）细胞形态：变形（梭性、星形、蝌蚪形、不规则形），核改变不明显 柱状上皮的鳞状化生。常见底层和中层细胞团（正常或轻度畸形）2 柱状上皮细胞：纤毛柱状上皮常成片脱落，以固缩退变为主。（1）细胞核：固缩退变（2）细胞形态：缩小3 病毒感染所致的上皮细胞改变（1）单纯疱疹病毒：鳞状细胞核肿大，弱嗜碱性不透明，大的嗜酸性包涵体，多核巨细胞细胞变性。（2）巨细胞病毒：胞体增大，胞核、胞浆见嗜酸性包涵体。（二）上皮增生再生化生时的形态1增生共同特点：胞浆嗜碱性胞浆相对减少，核浆比略大，核增大可见核仁，核分裂活跃（1）鳞状上皮（2）纤毛柱状上皮2再生：再生上皮和基底层细胞 再生细胞核大染色深，染色质结块及有丝分裂，核仁大、多，浆略嗜碱性，见双核多核，常见炎细胞。3 化生：不成熟的鳞状化生上皮似基底层与棘层细胞之间的过渡细胞，成熟的鳞状化生上皮与正常鳞状上皮很难区分。 如化生的细胞核染色质增粗，染色深，核大，染色大小异常称不典型化生或异型化生。（三）各种炎症时脱落细胞的特征1急性炎症：上皮细胞常严重退变，有较多中性粒细胞、吞噬细胞、坏死细胞碎屑，纤维素。2亚急性炎症：退变上皮细胞、坏死细胞碎屑和增生上皮细胞，中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞。3慢性炎症：较多成团的增生上皮细胞，淋巴细胞浆细胞。4 肉芽肿性炎上皮样细胞：朗格汉斯巨细胞：仅靠此细胞诊断结核不可靠，需同时见到上皮样细胞和干酪样坏死。干酪样坏死：若邻近出现上皮样细胞，更支持结核的诊断。其他细胞：大量单 核细胞、淋巴细胞核异质和角化不良的脱落细胞形态（一） 核异质1 轻度核异质细胞：又称炎性核异质，病因去除多能恢复。多见于鳞状上皮的中、表层细胞。与炎性增生细胞的鉴别：核虽大但染色质仍为细颗粒状，分布均匀，无染色加深和核畸形。2重度核异质细胞：见于慢性炎症，可发展为癌细胞，又称癌前核异质。核增大12倍，染色质粗颗粒状，分布略不均，核膜增厚，核仁大、多，胞浆与正常细胞相似，核浆比轻度增大。 见于癌前病变、原位癌、浸润癌的细胞与癌细胞的鉴别：核异型性中等，核浆比无明显改变。（二）角化不良又称异常角化、不成熟角化、细胞内角化细胞呈圆形，核深染，胞浆呈深红色，巴氏染色呈桔黄色，此种细胞出现在底层、中层时，可能为癌前病变的表现，在老年和更年期妇女应高度重视。 三、放疗对细胞形态的影响（一）良型上皮细胞的改变 1 急性放射反应 2上皮细胞持续性放射改变（二）癌细胞放射后的改变（三）放射灵敏度、放射治疗反应及灵敏反应 1 放射灵敏度2 放射治疗反应3 灵敏反应第三节 肿瘤脱落细胞形态一、一般特征（一）核异型性1核大大小不等2核染色质深染粗糙3核畸形4核浆比明显增大5核仁增大增多6核分裂像增多，病理性核分裂像7瘤巨细胞8裸核（二）胞浆异型性1高分化：胞浆丰富，有特征性分化物质2低分化：胞浆少3染色：嗜碱性染色红中带蓝，深染 4胞浆出现吞噬异物：细胞碎片、红细胞，封入现象（三）癌细胞团 癌具有成巢的倾向，可见单个散在的细胞，