豆豉提取物（发酵大豆制品提取的α葡萄糖苷酶抑制剂）对非胰岛素依.doc

豆豉提取物(发酵大豆制品提取的-葡萄糖苷酶抑制剂)对非胰岛素依赖型糖尿病的疗效和安全性Fujita Hiroyuki, Yamagami Tomohide, Ohshima Kazunori摘要：中国传统食物豆豉的水提物对大鼠肠-葡萄糖苷酶有强烈的抑制作用。对边缘及发病糖尿病患者，0.3g豆豉提取物(TE)有效抑制餐后血糖水平升高。为了确认其安全性，9为健康受试者在12周内每餐前服用1gTE(每天3g)，没有受试者表现出血液及相关生化指标、体重及BMI指数的变化。在一个非比较性研究中，18名二型糖尿病在6个月内每餐前服用0.3gTE(每天0.9g)，血糖(平均9.310.71mmol/L)和糖化血红蛋白(平均10.240.58%)水平逐渐下降，6个月后有明显效果，血糖水平达到8.610.66mmol/L(p0.01)，糖化血红蛋白在3个月后达到9.130.43%(p0.05)，6个月后达到0.860.30%(p0.01)，服用TE后血脂指数和总胆固醇水平有稳定的下降，同时高密度脂蛋白略有增长，而甘油三酯水平在3个月后(p0.05)和六个月后(p0.01)明显降低。在这份研究中，所有患者的其他生化指标没有受影响，也没有出现副作用和腹胀。TE表现出了葡萄糖苷酶抑制活性，有降血糖作用，并且可以证明对非胰岛素依赖型糖尿病病人控制血糖有益。关键词：豆豉提取物，葡萄糖苷酶抑制剂，降血糖作用，非胰岛素依赖型糖尿病1 引言糖尿病史日本最常见的疾病之一，对这种疾病的控制不佳会导致血管疾病发展如视网膜病变、神经病变和肾病。葡萄糖苷没抑制因子做口服药对患二型非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)的血糖控制有作用。这些药物抑制二糖水解成单糖，阻碍葡萄糖的消化和吸收，降低餐后血糖水平。比如，目前常用药物阿卡波糖和伏格列波糖通过延缓碳水化合物在小肠内的消化来减少餐后血糖波动。然而，近几年人们注意到食物中的生物活性物质的重要性，有很多食物的生理作用的报导。葡萄糖苷酶和淀粉酶的抑制剂从多种原料中分离出，对于它们的作用也在动物上进行了研究。对有葡萄糖苷酶抑制剂的食物进行筛选，豆豉提取物(TE)能强烈抑制大鼠肠葡萄糖苷酶。豆豉是一种中国传统食物，主要用作调味料，通过大豆蒸煮、发酵得到，日本的大德寺纳豆、寺纳豆、一休寺纳豆也是以同样的方法制作。TE对大鼠肠葡萄糖苷酶有抑制活性，并且在大鼠和人口服蔗糖后，剂量依赖性地减少了餐后血糖水平升高。在人体研究中，最低有效剂量约为0.3g。在这份研究中，追踪了健康受试者12周服用TE的安全性，糖尿病发病受试者长期(6个月)服用后的降血糖作用和脂类代谢作用。2 材料和方法2.1 TE的制备豆豉100g，研磨后加入900mL水，煮沸60min。室温条件下以2050g离心30min，取上清液，用Toyo滤纸No5C(日本Toyo Roshi公司)过滤，滤液用microacilizer-G3(日本Asahikasei Industry公司)电渗析，透析液浓缩后在气流中干燥。TE产量为9.8g每100g豆豉，得到的粉末为本研究中用的TE。根据Miwa 等人的方法，大鼠肠葡萄糖苷酶抑制剂以蔗糖为底物的IC50值为0.34 g/L。2.2 健康受试者中进行安全性测试年龄2656岁(平均38.9 3.40岁)的9名健康男性志愿者，在知晓性质、目的和可能的副作用的情况下参加研究。此研究在1999年3月经体制审查委员会通过。所有受试者都没有重要疾病史，体重在理想体重10%范围内。在无异常情况下，服用TE的第0周(服用前)、第6周、第12周测定他们的血液和相关生化指标，体重和体质指数(BMI)。禁食12小时后取血液样本，并在血液分析实验室(日本BML公司)进行分析。在研究其间，要求所有受试者维持平常的生活方式，详细记录遇到的症状，并评价所有在膳食服用量和排便习惯上的非预期偏差。在12周内，受试者每餐前服用1gTE，每日三次。这个每日服用量是以往的研究中建立的最低有效剂量的3倍(0.9g/天)。表1 健康受试者长期服用豆豉提取物(TE)安全性的血液研究之前6个星期服用TE12个星期血液学 白血球(个/nL)5.30.35.50.25.60.3 红血球(个/nL)5.01.35.11.35.01.3 血红蛋白(g/L)1514.11575.11523.5 血球密度(%)45.90.6946.91.1245.70.92 红细胞平均容量(fL)91.61.1591.30.5991.50.85 平均红细胞血红蛋白含量(pg)30.10.5330.50.5230.50.44 红细胞平均血红蛋白浓度(%)32.90.5433.40.5333.30.42 血小板(个/pL)0.200.110.200.130.200.11生化 尿谷草转氨酶 (U/L)21.12.223.11.423.82.0 丙氨酸氨基转移酶(U/L)19.13.121.52.821.52.5 碱性磷酸酶(U/L)149.614.9146.514.9138.012.0 -谷氨酰转肽酶(U/L)18.33.422.44.418.33.4 总蛋白(g/L)732732732 淀粉酶(U/L)4.880.164.870.164.830.10 血糖(mmol/L)4.960.345.110.415.110.48 总胆固醇(mmol/L)1.440.111.580.131.620.12 高密度脂蛋白胆固醇(mmol/L)55.54.161.15.262.64.8 甘油三酯(g/L)1.130.191.100.151.070.15 尿素(g/L)58.63.360.86.056.13.6 游离脂肪酸(mmol/L)5.30.84.60.45.10.6 血液尿素氮(mmol/L)5.460.395.460.395.570.39 肌氨酸酐(mol/L)88.43.488.44.488.43.5 C-反应蛋白(mg/L)2.30.53.10.82.00.7 钠(mmol/L)142.30.9142.80.8143.10.6 钾(mmol/L)3.760.123.760.174.040.08 氯(mmol/L)101.81.1102.41.1102.10.7 钙(mmol/L)6.290.846.410.876.430.9412周内9名健康受试者每天服用TE3次（每次1g）。结果以平均值标准差表示。2.3 糖尿病患者这个研究是在1999年10月到2000年4月在日本大阪一间医院进行的非比较性研究。18名完全发病糖尿病患者(包括男性和女性)参加了此次研究。他们的空腹血糖水平超过6.9mmol/L (9.31 0.71 mmol/L)，糖化血红蛋白(HbA1c)水平超过6.5%(10.24 0.58%)。所有的患者都知晓了研究的性质目的及可能的副作用。此研究由机构审查委员会在1999年9月批准。患者中排除了胰岛素治疗患者，患有有严重心脏病、肾病和肝病者，做过胃切除手术、肠切除手术及其他胃肠手术者，甲状腺机能减退者，以及主治医生判定不可参加者。9名患者允许使用磺脲类药物，在研究过程中计量不变，所有患者在研究过程中保持正常生理活动和膳食服用量。在服用TE第0、2、4、6个月时空腹12小时采血样以测定血液及生化指标。在研究期间，所有患者都无恙。血液和生化分析在血液分析实验室(日本BML公司)进行。要求所有受试者详细记录遇到的症状，并评价所有在膳食服用量和排便习惯上的非预期偏差。患者在六个月内每餐前立即服用0.3gTE(每天0.9g)。表2 糖尿病患者信息特征变量患者人数（%）性别男性9（50.0）女性9（50.0）年龄分布390（0.0）40-492（11.1）50-595（27.8）60-698（44.4）703（16.7）平均年龄62.02.5服用磺脲类药物是9（50.0）否9（50.0）糖尿病史（年）1-22（11.1）2-35（27.8）3-410（55.5）41（5.6）饮食控制是4（22.0）否12（78.0）运动习惯是5（27.8）否12（78.0）空腹血糖（mmol/L）7.8-8.84（22.2）8.9-9.94（22.2）10.0-11.05（27.8）11.112.14（22.2）12.21（5.6）糖化血红蛋白（%）5.0-5.90（0.0）6.0-6.91（5.5）7.0-7.93（16.7）8.0-8.93（16.7）9.0-9.94（22.2）10.0-10.94（22.2）11.03（16.7）BMI(kg/m2)17.0-19.93(16.7)20.0-21.91(5.5)23.0-23.92(11.1)24.0-24.91(5.5)25.026.95(27.8)27.029.93(16.7)图1 TE对糖尿病患者血糖计糖化血红蛋白水平的作用。18名糖尿病患者在6个月内，每日三餐前服用TE0.3g。在服用第0、1、3、6个月测血糖水平（）和糖化血红蛋白水平（）。结果以平均值标准差表示。2.4 统计分析结果以平均值标准差表示，以 the paired Students t-test (Stat View, Abacus Concepts, Inc., Berkeley, CA USA)评价服用TE前后差异的统计意义。3 结果3.1 健康受试者服用TE的安全性为了确认TE的安全性，9名健康受试者在12周内每餐前服用1gTE(每日3g)。与服用前相比，服用后的血液学和相关生化数据(表1)都没有明显变化。在服用前、服用后第6周和第12周，受试者体重无明显变化。此外，与服用前(23.8 0.92 kg/m2)相比，在第6周 (23.7 0.91 kg/m2)和第12周(23.6 0.95 kg/m2)，BMI无明显变化。糖尿病指数如空腹血糖和糖化血红蛋白水平也无变化。而且，没有收拾着表示有腹部不适，如腹胀、腹痛、腹泻、恶心和胀气。对于任何受试者都没有其他副作用。3.2 对发病糖尿病患者(非胰岛素依赖型糖尿病)的降血糖作用共18名患者参加并完成研究，其中约2/3的患者患型糖尿病超过3年。患者空腹血糖和糖化血红蛋白水平在服用TE一个月后降低，并且明显在第6个月明显降低。在服用TE6个月后，TE的降血糖效果显示，14名患者(77.8%)的空腹血糖水平和11名患者(61.1%)的糖化血红蛋白水平明显下降。糖尿病患者包括14例高血脂(4例高甘油三脂血症1.5g/L，4例高胆固醇血症5.69mmol/L及5例混合高血脂症)。图2表示TE对高血脂症的安全性。在服用TE后总胆固醇水平表现出平缓降低，而高密度脂蛋白(HDL)水平表现出平缓增加且无明显变化，而在服用TE第3周和第6周，甘油三酯含量明显降低。在此次研究中，没有患者表示有任何如下副作用：腹胀、腹痛、腹泻、恶心及胀气，同时，在血液分析中也没有发现异常的血液学和相关生化数据。体重无明显变化。与服用TE前相比，BMI由最初23.90.90kg/m2，变为第1个月23.80.91kg/m2，第3个月23.70.89kg/m2，第6个月23.80.90kg/m2。表3 服用TE后空腹血糖计糖化血红蛋白水平变化特征变量患者人数（%）空腹血糖(mmol/L)0.34(22.2%)-0.64(22.2%)-1.17(38.9%)-1.72(11.1%)-1.71(5.6%)糖化血红蛋白(%)0.57(38.9%)1.06(33.3%)-1.51(5.6%)-2.04(22.2%) 6个月内18名糖尿病患者每日三餐前服用TE（每次0.3g）图2 TE对糖尿病患者血脂代谢的作用。18名糖尿病患者在6个月内，每日三餐前服用TE0.3g。左侧图表表示总胆固醇水平（）和高密度脂蛋白水平（），右侧图表表示甘油三酯水平（）。在服用第0、1、3、6个月测各项参数。结果以平均值标准差表示。表4 糖尿病患者长期服用TE安全性的血液分析之前1个月3个月服用TE6个月血液学 白血球(个/nL)6.30.36.30.36.30.36.30.3 红血球(个/nL)4.710.124.670.114.620.104.650.10 血红蛋白(g/L)1.442.71.442.71.432.41.422.6 血球密度(%)45.90.6943.50.7443.10.6942.80.71 红细胞平均容量(fL)93.41.4592.81.1992.81.1892.01.15 平均红细胞血红蛋白含量(pg)30.60.4730.70.4530.80.4730.80.49 红细胞平均血红蛋白浓度(%)32.80.2233.00.2333.10.2133.50.17 血小板(个/pL)0.190.020.200.020.200.020.180.01生化 尿谷草转氨酶 (U/L)35.45.133.74.830.13.128.92.9 丙氨酸氨基转移酶(U/L)51.511.146.78.939.85.439.35.2 碱性磷酸酶(U/L)194.714.9210.615.3206.716.2206.513.3 -谷氨酰转肽酶(U/L)52.28.946.98.949.95.957.96.8 总蛋白(g/L)731741731741 淀粉酶(U/L)110.510.5100.210.697.99.298.68.6 尿素(g/L)4.80.264.60.254.60.274.70.24 游离脂肪酸(mmol/L)0.900.061.030.070.990.050.900.03 血液尿素氮(mmol/L)5.670.315.890.025.820.275.670.27 肌氨酸酐(mol/L)79.65.379.62.779.65.379.65.3 C-反应蛋白(mg/L)3.10.33.20.72.10.61.20.