土壤有机磷分组测定-Bowman,1978.doc

土壤有机磷组分测定（Bowman-Cole法） 按土壤有机磷在不同浓度的酸碱溶液中的水解量，分成4组活性不同的有机磷：1.活性有机磷碳酸氢钠溶液c(NaHCO3)=0.5mol/L提取的有机磷；2.中等活性有机磷硫酸溶液c(H2SO4)=1.0mol/L和氢氧化钠溶液c(H2SO4)=1.0mol/L提取的有机磷；3.中等稳定性有机磷富里酸磷：能溶于氢氧化钠溶液c(NaOH)=0.5mol/L在pH1pH1.8的条件下不发生沉淀但难为植物吸收的磷；4.高稳定性有机磷胡敏酸磷：能溶于氢氧化钠溶液c(NaOH)=0.5mol/L，在pH1pH1.8的条件下发生沉淀又难为植物吸收的磷。 一仪器设备：分光光度计二试剂：1.硫酸溶液c(H2SO4)=1.0mol/L：55ml浓硫酸（H2SO4,=1.84g/cm3，分析纯）慢慢倒入500ml水中，冷却后定容1000ml。2.氢氧化钠溶液c(H2SO4)=1.0mol/L：称取氢氧化钠（NaOH,分析纯）20g溶于500ml水中，冷却，定容于1000ml。3.碳酸氢钠溶液c(NaHCO3)=0.5mol/L，pH8.5：称取碳酸氢钠（NaHCO3，分析纯）42g溶于水稀释至1L，用稀硫酸或氢氧化钠溶液调节pH至8.5。（其余试剂同水中磷的测定）4.无水碳酸钠（Na2CO3,分析纯），磨细通过60孔筛。5.硫酸溶液c(1/2H2SO4)=6mol/L:在800ml蒸馏水中缓慢加入浓硫酸（H2SO4,=1.84g/cm3，分析纯）167ml，同时搅拌，待冷却后，加入蒸馏水定容到1000ml。6.钼锑贮存溶液：浓硫酸（H2SO4，分析纯）153ml缓慢倒入约400ml蒸馏水中，同时搅拌，放置冷却。另称10g钼酸铵（(NH4)6Mo7O244H2O,分析纯）溶于约60的300ml蒸馏水中，冷却。将配好的硫酸溶液缓慢倒入钼酸铵溶液中，同时搅拌。随后加入酒石酸锑钾(KSbOC4H4O61/2H2O)=5g/L,分析纯溶液100ml，最后用蒸馏水稀释至1000ml，避光贮存。7.钼锑抗显色剂：1.50g抗血酸（C6H8O6,左旋，旋光度+21 +22，分析纯）加入到100ml钼锑贮存液中。此液须随配随用，有效期一天。8.二硝基酚指示剂：0.2g2，6二硝基酚或是2，4二硝基酚C6H3OH(NO2)2溶于100ml水中。9.磷标准贮存溶液：0.4390g磷酸二氢钾（KH2PO4,分析纯，105烘2小时）溶于200ml蒸馏水中，加入5ml浓硫酸，转入1L容量瓶中，用水定容。此为磷标准溶液(P)=100mg/L可以长期保存。10.磷标准溶液：取磷标准贮存液准确稀释20倍，即为磷标准溶液(P)=5mg/L，此溶液不宜久存。三操作步骤：1.活性有机磷（OP）的测定.称取通过2mm筛的风干土样5.00g于200ml三角瓶中，加100ml（0.5mol/L）碳酸氢钠溶液，再加一角勺无磷活性炭，在振荡机上振荡30min。立即用无磷滤纸过滤，滤液承接于100ml三角瓶中。1.1滤液中总磷量（TP）的测定。 （1）取滤液20ml于50ml三角瓶中，置沸水浴上蒸干，加3ml浓硫酸摇匀，再加10滴高氯酸（HClO4）摇匀，在瓶口放一个弯颈小漏斗，置于电热板上加热消煮15min，使浓硫酸发烟回流，全部消煮时间约30min。（2）消煮液冷却后，用蒸馏水小心地由三角瓶洗入50ml量瓶内，轻轻摇动容量瓶，待溶液完全冷却后，用蒸馏水定容至刻度，充分摇匀，澄清或用无磷干滤纸过滤。（3）取消煮后的待测液5ml于25ml容量瓶中，加水10ml及2，6二硝基酚指示剂1滴，用稀酸或稀碱调节至淡黄色，准确加入钼锑抗指示剂2.5ml，摇匀，充分排除二氧化碳，用水定容，30min后于660nm处比色。 （4）工作曲线绘制：（同前）取磷标准溶液0，1，2，3，4，5，6ml于50ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至约30ml，加磷钼锑抗指示剂5ml，摇匀，定容。即溶液浓度分别为0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6mg/L。（5）结果计算：式中，浸提出的活性有机磷和无机磷（TP）质量分数mg/kg。 从工作曲线上查得显色液中磷的浓度，mg/L。 V显色液体积，mL。 ts分取倍数。 m土样质量，g。两次平衡测定结果允许误差为0.021.2滤液中无机磷（IP）的测定（1）取滤液5ml于25ml容量瓶，加2，6二硝基酚1滴，用稀酸或稀碱溶液调节至微黄色，等二氧化碳充分放出后，加钼锑抗2.5ml，定容，30min后比色。（2）工作曲线绘制（同上）（3）结果计算：式中，土壤中活性无机磷（IP）质量分数mg/kg。 从工作曲线上查得显色液中磷的浓度，mg/L。 V显色液体积，mL。 ts分取倍数。 m土样质量，g。两次平衡测定结果允许误差为0.021.3活性有机磷 =TP-IP式中，土壤活性有机磷（OP）质量分数，mg/kg。2.中等活性有机磷。2.1中等活性有机磷1（OP1）称取通过2mm筛的风干土壤2.00g于150ml三角瓶中，加1.0mol/L硫酸溶液100ml，摇匀，浸提小时后，用无磷干滤纸过滤，滤液承接于100ml三角瓶中。 （1）滤液中总磷量（TP2）测定。取滤液20ml于100ml三角瓶中，置沸水浴蒸干，消煮，计算等步骤同上1.1。 （2）滤液中无机磷（IP1）测定。 取滤液20ml于100ml三角瓶中，加一角勺无磷活性炭，摇匀脱色，用无磷滤纸过滤，滤液承接于100ml三角瓶中，其余步骤见1.2。 （3）结果计算： =TP1-IP1式中，中等活性有机磷（OP1）质量分数，mg/kg。2.2中等活性有机磷2（OP2）测定。 上述用硫酸溶液c(H2SO4)=1.0mol/L处理的土壤过滤后，滤纸上残留的土壤用2ml3ml乙醇洗涤，风干后置150ml三角瓶中，加1.0mol/L氢氧化钠溶液100ml，摇匀，浸提6小时后过滤，清液（A液）盛于100ml三角瓶中，取（A）液20ml于100ml三角瓶中，加一角勺无机活性炭，摇匀脱色，用无机磷滤纸过滤，滤液承接于100ml三角瓶中，余见1.22.3中等活性有机磷计算。 =OP1+OP23.中稳性有机磷。 取2.2中A液50ml于150ml三角瓶中，加浓盐酸酸化至Ph1.0pH1.8，静置过夜，过滤。3.1滤液中总磷量（TP）测定。 取滤液20ml于50ml三角瓶中，置沸水浴上蒸干。消蒸，比色，计算等同1.1。3.2滤液中无机磷（IP）测定。 取滤液20ml于100ml三角瓶中，加一角勺无磷活性炭，摇匀脱色，用无磷滤纸过滤，滤液承接于100ml三角瓶中，余见1.2。3.3结果计算： =TP-IP式中，土壤中稳性有机磷（OP