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实验一培养基制作及灭菌 林标声 实验一培养基配置和灭菌 一 实验目的1 掌握微生物学实验中常用的玻璃器皿的包扎方法与棉塞的制作2 了解配制培养基的原理 并掌握配制培养基的一般方法和步骤3 了解加压蒸汽灭菌的原理 并掌握其具体操作方法 二 实验原理 1 微生物学常用的玻璃仪器培养皿 试管 三角瓶 锥形瓶 吸量管 大小 2 培养基的分类按物理状态分 按组成成分分 按用途分配置培养基时注意的事项 pH 不能回调 T 3 培养基的灭菌培养基配置好后应立即灭菌 且不能再次灭菌化学灭菌 甲醛 洁尔灭 升汞 物理灭菌 干热 紫外线等 过滤除菌 湿热灭菌 干燥箱 细菌过滤器 用于滤过除菌的各式滤器 手提式灭菌锅 坐式灭菌锅 高压蒸汽灭菌器 卧式灭菌锅 三 实验器材 1 药品及试剂 2 仪器及其它试管 三角瓶 烧杯 量筒 玻棒 天平 药匙 高压蒸汽灭菌锅 pH试纸 5 5 9 0 棉花 牛皮纸 记号笔 麻绳 纱布 干燥箱 培养皿 涂布棒 吸管 1ml 玻璃珠 四 实验方法和步骤 微生物常用玻璃仪器的包扎和棉塞的制作a 培养皿的包装每10套一包 用旧报纸包扎 或放在特制铁皮圆筒里 加盖扣严 b 吸管的包装首先在吸管的上端塞上一小段棉花 用长纸条包扎 打结 c 玻璃涂布棒的包装方法同吸管的包装 d 三角瓶的包扎 2 培养基的制备与分装 1 三角瓶固体培养基的制备a 称量按培养基配方比例依次准确地称取药品 放入在瓷缸内 注意药品称量顺序 b 加入定量的琼脂 水 煮沸 溶解c 完全溶解后 补充水分 调pH值 不要调过头 d 分装置三角瓶中 注意装液量e 加棉塞 包扎 高压蒸汽灭菌 121 0 10Mpa 20min 2 试管斜面固体培养基的制备 a 称量按培养基配方比例依次准确地称取药品 放入在瓷缸内 注意药品称量顺序 b 加入定量的琼脂 水 煮沸 溶解c 完全溶解后 补充水分 调pH值d 在培养基未融化之前 用10mL移液管快速加入试管内 每根7 8mL 塞上棉塞 包扎 灭菌 灭菌完后摆斜面 3 培养基 无菌水 器皿的灭菌 a 将培养基 无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内 湿热灭菌 b 灭菌完毕 将试管培养基搁成斜面 c 器皿放入干热灭菌箱内 加热灭菌 思考题 1 培养基配好后 为什么必须立即灭菌 如何检查灭菌后的培养菌是无菌的 2 加压蒸汽灭菌的原理是什么 是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度 为什么 3 干热灭菌应该注意哪些事项 4 管口 瓶口为什么要用棉塞 能否用木塞或棉皮塞代替 为什么 实验报告注意事项 1 上课前必须写好预习实验报告2 实验报告内容必须填写完整 如实验课程 实验时间 指导教师等3 本次实验结束后必须记录好原始记录 由
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