HBsAg分析性能评估.doc

乙型肝炎病毒表面抗原检测试剂（胶体金法）分析性能评估资料本试剂系采用双抗体夹心法和胶体金免疫层析法原理，在硝酸纤维素膜的检测区和控制区分别包被鼠抗-HBsAg单抗和羊抗鼠IgG，在结合垫上含胶体金标记的鼠抗-HBsAg单抗，检测时将样本加至加样区，样本通过结合垫时，溶解包被在结合垫上的胶体金标记的抗-HBsAg抗体，由于毛细效应，沿膜向上移动。如果样本中含有HBsAg，则在检测区形成双抗体夹心复合物出现紫红色条带。如果样本中不含有HBsAg，检测区不出现紫红色条带。无论样本中是否含有HBsAg，胶体金标记的抗-HBsAg抗体在控制区与羊抗鼠IgG结合出现紫红色条带，表明检测结果有效。用于体外定性检测人全血、血清或血浆中的HBsAg。我们参考中国生物制品规程，对试剂成品的性能进行了系统的评估，主要涉及灵敏度、特异性、批内和批间精密度等。检测评估所用标本源于进口标准品和临床样本。评估所用试剂为质量合格的规格为40人份/盒的试剂三批（Lot：HBsAg20080501-1，Lot：HBsAg20080503-1，Lot：HBsAg20080505-1），规格为100人份/盒的试剂三批（Lot：HBsAg20080502-2，Lot：HBsAg20080504-2，Lot：HBsAg20080506-2）。1. 灵敏度的评估1.1 材料和方法1.1.1 检测下限标本准备取HBsAg 标准品（来自中国药品生物制品检定所），用一份正常人的阴性血清定量溶解稀释到2.5ng/mL的终浓度，作为灵敏度评估指标。1.1.2 检测下限确定每批试剂对已准备好的检测下限标本做30次重复测定。30次重复的阳性符合率要求大于99%，确定该批试剂的检测限度，分析不同包装规格的试剂各三批的检测限度，得到试剂的最低检测限度。1.2 实验结果及讨论按照试剂使用操作标准程序进行检验。重复30次。同时每次设定1份阴性质控。结果如下（“”表示阳性结果，“”表示阴性结果）：表1-1 规格为40人份/盒的试剂的实验结果重复次数标本检测结果（2.5ng/mL）阴性Lot：HBsAg20080501-1Lot：HBsAg20080503-1Lot：HBsAg20080505-1123456789101112131415161718192021222324252627282930阳性符合率（%）100100100表1-2 规格为100人份/盒的试剂的实验结果重复次数标本检测结果（2.5ng/mL）阴性Lot：HBsAg20080502-2Lot：HBsAg20080504-2Lot：HBsAg20080506-2123456789101112131415161718192021222324252627282930阳性符合率（%）100100100根据上面的结果，我们可以看出人血清中HBsAg浓度达到2.5ng/mL的标本能够稳定的检测出阳性结果，阳性符合率合乎要求，能够满足定性的需求，并且不同规格试剂各三批的结果均如此。我们将试剂的最低检测下限规定为2.5ng/mL。2. 特异性的评估2.1 材料和方法购买临床甲型肝炎病毒样本（来自 公司）、丙型肝炎病毒样本（来自 公司）、梅毒螺旋体抗体（来自 公司）、类风湿因子阳性（来自 公司）和红斑狼疮患者的样本（来自 公司），以及正常人的阴性血清，作为一套特异性标本，验证试剂的抗干扰能力。按照试剂使用操作标准程序，每个标本重复3次。2.2 结果与讨论按照试剂使用操作标准程序进行检验。每个标本重复3次。同时每次设定1份阳性质控。结果如下（“”表示阳性结果，“”表示阴性结果）： 表2-1规格为40人份/盒的试剂的实验结果样品名称Lot：HBsAg20080501-1Lot：HBsAg20080503-1Lot：HBsAg20080505-1123123123甲型肝炎病毒丙型肝炎病毒梅毒螺旋体类风湿因子红斑狼疮阴性血清阳性血清+表2-2规格为100人份/盒的试剂的实验结果样品名称Lot：HBsAg20080501-1Lot：HBsAg20080503-1Lot：HBsAg20080505-1123123123甲型肝炎病毒丙型肝炎病毒梅毒螺旋体类风湿因子红斑狼疮阴性血清阳性血清+从检测结果可以看出，本产品检测临床甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、梅毒螺旋体抗体、类风湿因子阳性和红斑狼疮患者的样本，结果不会对本品的检测结果产生干扰。试剂的特异性良好，符合设计要求。3. 阳性参考品符合率3.1 材料和方法从中国生物制品检定所购买HBsAg标准品，用一份正常人的阴性血清定量溶解稀释到2.5ng/mL（弱阳）、10 ng/mL（中阳）、20 ng/mL（强阳）的终浓度，依次记为P1、P2、P3；作为企业内部质量控制标准中所需的阳性参考品符合率质控标准。按照试剂使用操作标准程序，对三份阳性参考品进行检验。每个标本重复3次。同时每次设定1份阴性质控（正常人血清）。阳性符合率应为100%。3.2结果和讨论表2-1规格为40人份/盒的试剂的实验结果样品名称Lot：HBsAg20080501-1Lot：HBsAg20080503-1Lot：HBsAg20080505-1123123123P1+P2+P3+阴性血清表2-1规格为100人份/盒的试剂的实验结果样品名称Lot：HBsAg20080502-2Lot：HBsAg20080504-2Lot：HBsAg20080506-2123123123P1+P2+P3+阴性血清根据上面的结果，我们可以看出人血清中HBsAg浓度达到2.5ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL，本产品均能够稳定的检测出阳性结果，阳性符合率合乎要求（100%），能够满足定性的需求，并且不同规格试剂各三批的结果均如此。4. 批内、批间精密度4.1 材料和方法选取1例确定HBsAg浓度为2.5ng/mL的临床标本，一次实验当中同时使用三批试剂检测，每批试剂对该例标本重复检测10次。实验完成后，分两步分析结果：首先分别对每批试剂所得10个的检测结果进行分析，判断各批试剂的批内精密度。然后对三批试剂检测所得的30个结果进行综合分析，判断三批试剂的批间精密度。4.2 结果和讨论规格为40人份/盒的三批试剂的检测结果如下（“”表示阳性结果，“”表示阴性结果）：表3-1 Lot：HBsAg20080501-1检测次数标本浓度123456789102.5ng/mL表3-2 Lot：HBsAg20080503-1检测次数标本浓度123456789102.5ng/mL表3-3 Lot：HBsAg20080505-1检测次数标本浓度123456789102.5ng/mL规格为100人份/盒的三批试剂的检测结果如下（“”表示阳性结果，“”表示阴性结果）：表3-4 Lot：HBsAg20080502-2检测次数标本浓