第六章芳酸及其酯类药物的分析.ppt

芳酸及其酯类药物的分析 典型药物 鉴别试验 含量测定 体内药分 返回主目录 练习与思考 杂质检查 第六章 基本要求 基本要求 一 掌握水杨酸类 苯甲酸类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法 二 熟悉其他芳酸类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法 三 了解本类药物的体内分析方法 返回 一 水杨酸类 一 典型药物结构 第一节典型药物分类与理化性质 水杨酸 salycylicacid 阿司匹林 aspirin 对氨基水杨酸钠 sodiumaminosalicylate 双水杨酯 salsalate 贝诺酯 benorilate 1 酸性SA PKa2 95 ASA PKa3 49 双水杨酯均有酸性 2 溶解性 均为固体 有一定溶点 除钠盐溶于水 其余不溶 3 UV和IR光谱特性 分子结构中具有苯环 有UV和IR特征吸收 4 芳伯氨基和酚羟基特性 5 水解特性 ASA 双水杨酯及其制剂应检查水杨酸 对氨基水杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚 二 主要理化性质 一 典型药物结构 苯甲酸及其钠盐 benzoicacid 二 苯甲酸类 羟苯乙酯 ethylparoben 丙磺舒 probenecid 甲芬那酸 mefenamicacid 二 主要理化性质 1 溶解性 均为固体 有一定溶点 除钠盐溶于水 其余不溶 2 UV和IR光谱特性 分子结构中具有苯环 有UV和IR特征吸收 3 具有酚羟基特性 4 分解反应特性 苯甲酸钠分解为苯甲酸 丙磺舒分解为SO25 酸性 苯甲酸 丙磺舒和甲芬那酸有游离的羧基 可用NaOH直接滴定测定其含量 三 其他芳酸类 一 典型药物结构 氯贝丁酯 clofibrate 布洛芬 ibuprofen 二 主要理化性质1 溶解性 水中不溶 有机溶剂溶解 氯贝丁酯为液体 布洛芬为固体 有一定熔点 2 UV和IR特征吸收光谱 基于分子结构中具有苯环和特征基团 返回 一 与三氯化铁反应含有酚羟基药物可与FeCl3反应 能与FeCl3反应不一定含酚羟基 第二节鉴别试验 1 直接反应SA在中性或弱酸性条件下 与FeCl3生成紫堇色配位化合物 丙磺舒与NaOH成钠盐后 在pH5 0 6 0中与FeCl3生成米黄色布洛芬与高氯酸羟胺 N N 双环基己羧二亚胺及高氯酸铁反应 即显紫色 JP 14 方法 基于分子中 COOH的结构 2 水解或分解后与三氯化铁反应 ASA水解成SA后与FeCl3反应 成紫堇色 二 重氮化 偶合反应凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物均可反应 1 直接反应对氨基水杨酸钠2 水解后反应贝诺酯具有潜在芳伯氨基3 甲芬那酸与对 硝基苯重氮盐在NaOH介质中偶合产生橙红色 K2Cr2O7深蓝色棕绿色甲芬那酸 H2SO4黄色绿色荧光 JP 14 三 氧化反应 1 ASA酸水解生成SA和CH3COOH SA的mp为156 161 P118 2 双水杨酯水解生成SA SA的mp为158 3 氯贝丁酯碱水解后与盐酸羟胺生成异羟肟酸盐 在弱酸条件下再与三氯化铁反应生成紫色的异羟肟酸铁 四 水解反应 1 苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸升华物 可用于鉴别 2 丙磺舒与NaOH熔融分解成Na2SO3 经硝酸氧化成Na2SO4 3 丙磺舒加热分解 生成SO2气体 有臭味 五 分解产物反应 1 测定 max min 例如 布洛芬用0 4 NaOH溶液制备0 25mg ml max 265nm 273nm min 245nm 271nm 2 在 max处测定一定浓度供试液的吸收度A 例如 羟苯乙酯 5 g ml max 295nm A 0 483 在 max处测定供试液的百分吸收系数 例如 贝诺酯在 max 240nm E1 1cm 730 760 六 紫外吸收光谱法 4 在规定的波长测定吸收度比值 即双波长吸收度比值法 例如 对氨基水杨酸钠10 g ml A265 A299 1 56 1 56再例如 甲芬那酸14 g ml A278 280 A348 352 1 15 1 30 七 红外吸收光谱法 水杨酸的红外吸收图谱 3700 2900cm 1 N H O H 1660cm 1 C O 1610 15701480 1440 C C 775cm 1 Ar H 返回 3700 2900cm 1 N H O H 1640cm 1 N H 1580cm 11500cm 1 C C 1300cm 1 C N 1188cm 1 C O 对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱 第三节特殊杂质检查 一 ASA中特殊杂质的检查1 溶液的澄清度主要检查Na2CO3中不溶物 有苯酚 醋酸苯酯 水杨酸苯酯 乙酰水杨酸苯酯 ASA溶解因此ASA溶液应澄清 2 游离水杨酸检查利用SA可与FeCl3呈色 用比色法检查 3 易炭化物检查主要检查ASA中能被硫酸炭化显色的低分子有机杂质 采用与标准比色液比色的方法检查 主要检查成品药物中可能残留的间氨基酚 间氨基酚易氧化呈色 而且有毒性 因此要严格控制 双相滴定法 利用间氨基酚溶于乙醚 取3 0g样品用乙醚提取 0 02mol LHCl测定方法滴定V 0 3ml HPLC法 采用内标法 以磺胺作内标 USP 二 对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查 三 羟苯乙酯中有关物质的检查 BP收载的方法 由于杂质的结构不清 故采用TLC法中的供试品自身对照法 固定相 GF254C18化学键合硅胶 展开剂 甲醇 水 冰醋酸 反相TLC法 甲芬那酸是以邻 氯苯甲酸和2 3 二甲基苯胺在Cu的催化下缩合而成 因此成品药物中要检查铜盐及有关物质 分光光度法 利用Cu2 与Na DDC呈色后测定A1 铜盐检查法原子吸收分光光度法 BP 2000 2 有关物质的检查主要检查的是酰胺 二甲基苯胺和邻氯苯甲酸各国药典均采用TLC法中的自身高低浓度对照法 四 甲芬那酸中特殊杂质的检查 五 氯贝丁酯中特殊杂质的检查 主要检查成品药物中残留的对氯酚原料和挥发性杂质 GC FID法 HPLC法 以对 羟乙基酚作内标 用正相HPLC 2 挥发性杂质的检查方法GC法 1 对氯酚检查 返回 含量测定 1酸碱滴定法1 直接滴定法2 水解后剩余滴定法3 两步滴定法2亚硝酸钠滴定法3双相滴定4紫外分光光度法5HPLC 一 酸碱滴定法 一 直接滴定法基于本类药物 COOH 可用碱直接滴定 如ASA的含量测定 其原理如下 第四节含量测定 1 原理 2 条件 在中性乙醇 防止阿司匹林水解 使结果偏高 不用中性乙醇溶解 中 以酚酞作指示剂 摩尔比为1 1 3 应用 多国药典用于双水杨酯 苯甲酸 丙磺舒 布洛芬测定 USP和BP还用于甲芬那酸的测定 二 水解后剩余滴定法1 ASA含量测定 原理 条件 水溶液 具体试验 I份NaOH I份NaOH V VO Vo V相当于ASA消耗硫酸的ml数 ASA Vo V F T W 100 P129T的计算 2 羟苯乙酯的含量测定 三 两步滴定法 1 ASA片的含量测定 第一步为中和 ASA NaOH ASA Na H2O 水解产物SA NaOH SA Na H2O 酸性稳定剂 NaOH 中性盐 第二步为水解与测定 含量计算每1ml的硫酸滴定液 0 05mol l 相当于18 02mg的C9H8O4 P130 2 氯贝丁酯含量测定第一步 中和酸性杂质第二步 水解与测定 二 亚硝酸钠滴定法 对氨基水杨酸钠有芳伯氨基 在HCl中与NaNO2发生重氮化反应 Ar NH2 NaNO2 2HCl Ar N2Cl NaCl 2H2O 因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含量 此法在下章重点讨论 三 双相滴定法 是指在水相和有机相中的滴定 如苯甲酸钠的含量测定 生成的苯甲酸不溶于水 终点pH突跃不明显 不易观察 苯甲酸在乙醚中易溶 在水相中加入乙醚将滴定中产生的苯甲酸萃取入醚层 因此用双相滴定可使反应完全终点明显 一 直接紫外分光光度法丙磺舒片的测定 Ch P 2000 在HCl中 采用百分吸收系数法 BP 1998 再盐酸 乙醇 采用百分吸收系数法 USP 24 用氯仿提取后 采用对照品比较法 四 紫外分光光度法 二 离子交换 紫外分光光度法 氯贝丁酯及其制剂Ch P 2000 采用酸碱滴定法 当含有酸性杂质对氯酚时 可采用强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂质后 在甲醇溶液中 226nm波长处 采用对照品比较法 具体计算 W 1000 1 100 1 100 Cu g ml Au As Cu CCu C Au As W mg 10 Cu 10 C Au As P132 三 柱分配色谱 紫外分光光度法 USP 24 采用此法同时测定ASA胶囊中ASA和SA 1 SA的限量测定色谱柱的制备 对照品溶液的制备 供试品溶液的制备 供试品液 CHCl3液 洗脱液1 CHCl3洗脱液2 HAC 乙醚 硅藻土 FeCl3 尿素 玻璃棉 硅藻土 Na2CO3 供试品液 CHCl3 HCl液 洗脱液1 HAC CHCl3 1 10 10ml洗脱液2 HAC CHCl3 1 100 85ml 1 杂质先洗脱2 SA后洗脱 max 306nmAu As 1 杂质先洗脱2 ASA后洗脱 max 280nmASA mg C Au As 2 ASA的含量测定色谱柱的制备 对照品溶液的制备 供试品溶液的制备 Ch P 2000 ASA的胶囊剂的含量测定采用此法 USP 24 ASA片 对氨基水杨酸钠 甲芬那酸 布洛芬 丙磺舒等及其制剂 采用此法 五 HPLC法 P133 一 ASA栓剂的含量测定 色谱条件 色谱柱ODSC18 流动相为甲醇 0 1 二乙胺 HAC 40 60 4 检测波长280nm 内标物为咖啡因 系统适用性试验 n 2000 ASA与SA与内标物的R 1 5具体计算 Cx Rx RR CRW g 1 50 2 50 CxW测 1250 Cx 标示量 W测 W W平 标示量 100 Cx 1250 W平 W 标示量 100 色谱条件 色谱柱苯基硅胶柱 流动相为NaH2PO40 1 HAC液 0 1 HAC乙腈液 50 50 检测波长254nm 系统适用性试验 n 3900 T 2 3 重复性RSD 1 5 具体计算 二 丙磺舒原料的含量测定 W 1 100 Cu mg ml Cu Au As C供试品中丙磺舒 Mg 100C Au As 返回 一 血清中ASA和SA浓度的HPLC法色谱条件 色谱柱为ODS C18 150mm 4 6mm 5 m 流动相为甲醇 水 正丁醇 30 20 1 检测波长为237nm 内标物为苯甲酸 血清样品预处理血清100 l HClO450 l 不同浓度ASA和SA 内标液涡旋混合2min离心5min取上清液20 l进样 第五节体内药物分析 回归方程 以峰高比 H标 H内 对浓度回归ASA的回归方程 Y 5 8 10 3 5 29 10 2Xr 0 9996SA的回归方程 Y 6 0 10 3 8 33 10 2Xr 0 9981ASA和SA的线性范围分别为 1 20 g ml 2 30 g ml回收率 空白血清 五种不同浓度测定 ASA为96 0 106 0 SA为92 0 119 5 五种不同浓度均应在线性范围内 色谱条件 色谱柱为LiChrospher100RP 125mm 4mm 5 m 流动相为25 乙腈溶液 醋酸缓冲溶液梯度洗脱 检测波长为254nm 内标物为依他尼酸 尿样品预处理 C8固相萃取柱 100mg填料 ml用甲醇1 0ml 然后用0 5ml蒸馏水活化 2 0ml尿样 内标300 l 10 g ml 上柱1 0ml水洗脱生物杂质再用甲醇0 5ml洗脱保留在柱上的丙磺舒和内标 洗脱液0 45 m浸滤膜滤过 取5 l直接进样分析 二 尿中丙磺舒的固相萃取净化 HPLC法 运动员违禁药物 线性关系和回收率 取空白尿样2 0ml 不同浓度丙磺舒 内标液按上述方法分析 浓度范围为0 1 g ml 100 g ml A丙 A内对C丙回归 回收率 丙磺舒为100 3 n 14 内标为101 3 n 12 人尿样测定 丙磺舒 单剂量500mg 尿排泄药 时曲线 见P136 三 HPLC法测定人血浆中布洛芬含量色谱条件 色谱柱为Shim packCLC ODS 150mm 6mm 10 m 预柱为YWG C18 流动相为甲醇 20mol L磷酸二氢钾冲溶液 70 30 pH 4 0 流速为1 0ml min 检测波长为221nm 内标物为肉桂酸 样品预处理 取肝素抗凝血浆0 24ml 内标液 甲醇0 5ml 振荡混匀 离心 1000r min 15min 取上清液10 l直接进样分析 布洛芬和肉桂酸tR为5 15和2 85min 回归方程 以对照品与内标的峰高比对浓度回归 其回归方程为 Y 4 05 10 2C 2 0 10 3 r 0 9999 回收率测定 空白血浆 布洛芬对照品高 中 低三种浓度 按样品处理项下测定 测得平均回收率为99 2 1 6 精密度 日内精密度为RSD 1 8 日间精密度为2 8 1 0 1 5 2 0 3 0 4 0