Mastercycler梯度PCR仪操作规范.docx

Mastercycler梯度PCR仪操作规范 一仪器描述 样品槽可放置0.2mlPCR管（128），0.5mlPCR管（117）及96孔板。将样品放入样品槽后，将热盖上的旋钮按顺时针方向旋至对应的管型处使其紧闭。 二 开机 打开机器后部的主开关。 三设计程序 1、常规PCR反应： 出现主菜单后，按standard或new方式编制要运行的PCR程序，在输入预变性的温度及时间、变性的温度及时间、退火的温度及时间、延伸的温度及时间、Sock的温度后，按start/stop键开始启动运行当前程序。 如果设计程序时选择了CNTRL/TUBE命令，则程序启动后需要输入反应管的相应型号和样品体积。用SEL键选择反应管的型号，用ENTER键确认。 输入溶液体积，用Enter 键确认。 当程序运行时，按Opt键可以显示大概的运行时间和预期结束的时间。 2、梯度PCR反应： 开机后按照常规PCR反应设置程序，按控制面板上的四个方向选择键将闪烁的光标移至程序退火这一步的数字序号处（一般为3），按住控制面板上的OPTIONS键，则进入温度梯度程序设计。 按方向选择键将光标移至G = 0.0（输入数值范围0-12）， 一旦输入这个数值，即对样品槽的每一列设定了不同的温度，预设的温度在样品槽的中间，沿着样品槽从做至右温度依次升高。用0.2ml的管可设置12个不同的温度，用0.5ml的管则可设置11个不同的温度。在Option/Gradient中查看温度分布。反应槽最高温度不能超过99。 3、其它参数设置及说明： T 输入温度、循环次数、以及相关选项。 0.0温度变异量（0.0）：每一个循环温度增加或减少的量。必须注意温度不能超过99。例如，变异量是+0.1，25个循环，则起始温度不能超过96.5。先输入数值，然后输入加减号。+：温度上升；-：温度下降。 0.00 时间变异量（S）：输入每个循环时间的增加或减少（最大为1分钟） R=3.0 /S Ramp(K/S)代表了一个循环曲线的升降温速率。这个值越高，则加热或降温就越快。允许值范围：0.3-3.0K/S。 0.0 /S Ramp increment(S):输入升降温速率的变异量。该速率不能超过3K/S，因此，如果起始速率为0.3，变异量为0.1，则最大循环次数为27个。 四程序运行 程序设计好后可直接按控制面板上的start键运行， 如果设计程序时选择了CNTRL/TUBE命令，则程序启动后需要输入反应管的相应型号和样品体积。 用SEL键选择反应管的型号，用ENTER键确认。 输入溶液体积，用Enter 键确认。 当程序运行时，按Opt键可以显示大概的运行时间和预期结束的时间。 Lid用来确定热盖的温度。允许值为0-110。 启动时，NOWAIT 无需热盖温度，程序直接启动。 WAIT 程序直到热盖达到预设的温度才启动。 五. 关机 程序运行结束后，按Exit退出原程序。关闭机器后部的开关。 注意： 1. Sock时，温度应设为10，时间不要超过30分钟。温度过高，时间过长，易导致仪器的损坏。 2. 操作时，要严格遵守以上原则，及时记录仪器运行的情况。 凝胶成像仪基本使用说明作者： 来源： 阅读：1853 次 日期：2007-7-23 14:15:14【 字体：大 中 小 】 1 打开凝胶成像仪电源（机器后部），开电脑；2 将染色后凝胶用水冲洗后，将凝胶放在透射板正中，并关严暗仓门；3 打开GeneSnap软件，在软件界面中点击绿色按钮，打开镜头，该按钮会变成红色，如凝胶在屏幕上未出现，可适当调节光圈（绿色按钮下左一），使图象到达合适亮度，调整图象大小（绿色按钮下中间）及清晰度（绿色按钮下右一）；4 待图象最优化时，点击红色按钮使之变成绿色，成像保留在屏幕上，点击“Save”保存为.Sgd格式文件，用于使用“Gene Tools”软件分析；或点击“Save As”，在下拉菜单中 选取合适的图象类型后，生成该类型的图形文件，如“.jpg; .bmp; .gif”等；5 关闭软件（如未保存图象此时会提示）；6 打开暗仓门，拉出透射台，凝胶用PE手套包住后丢弃，并冲洗透射板；7 关上暗仓门，并关闭电源。注意：1 开关仓门时防止将EB沾在仓门盖上，如不慎沾上EB，擦干后用水冲洗；2 不推荐使用自动曝光；3 透射板紫外灯寿命有限，调整图象后及时成像；4 凝胶应及时清理，防止凝胶固化后贴附在透射板上，造成成像不清晰；5 如需对垂直电