简化版基因工程.doc

一 名词解释（2分/题）1 基因敲入：使利用同源重组原理将外源基因插入到染色体的特定位点上。P2582 分子杂交：是指在分子克隆中的一类核酸和蛋白质分析方法，用于检测混合样品中特定核酸分子或蛋白质分子是否存在，以及其相对分子质量的大小。P1073 DNA体外重组：是指依赖序列同源性的DNA体外重组，包括经典的DNA洗牌、交错延伸、随机引发重组等技术。P1734 RNA干扰：是指对应于某种mRNA的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA分子使mRNA发生特异性降解，导致其不能表达的转录后基因沉默现象。P3505核酶：是一类具有催化活性的RNA分子，具有核苷酸水解活性，可特异性剪切RNA分子，相当于RNA酶。P3486 黏性末端：识别位点为回文对称结构的序列经限制酶切割后，产生的末端。P197 平末端：在回文对称轴上同时切割DNA的两条链所产生的末端。P198 同尾酶：许多不同的限制酶切割DNA产生的末端是相同的，且是对称的，即它们可产生相同的黏性末端。P229 偏爱位点：某些限制酶对同一底物中的有些位点表现出偏爱性切割，即对不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率的现象。P2410 星星活性：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性陈星星活性。11 DNA聚合酶：在加有模板、底物和引物时，可催化新链DNA的生成的酶。P2912 PCR技术：是通过模拟体内DNA复制的方式，在体外选择性地将DNA某个特殊区域扩增出来的技术。P13413 基因治疗：是将目的基因放进特定载体中导入靶细胞或组织，通过替换或补偿引起疾病的基因，或者关闭或抑制异常表达的基因来克服疾病的治疗方法。P35114 嵌套缺失：从DNA的一端或两端删除多个寡核苷酸，得到一套终末端长短不同的嵌套缺失突变体。P18315 原生质体介导法：是以原生质体为受体，借助于特定的化学或物理手段将外源DNA直接导入植物细胞的方法。P23116 基因定向打靶：是通过外源基因与靶细胞染色体上的同源序列间的同源重组，将外源基因定点整合到靶细胞特定位置上，而使某一个特定位点上的基因发生定点突变的技术。P25617 反向PCR:是一种简单的扩增已知序列周边未知序列的方法。P14318 热不对称交错PCR：即TAIL-PCR，是一种利用随机引物进行染色体步查的技术。P14419 多重PCR：在一个反应体系中使用一对以上引物的PCR。P14920 基因芯片：是生物芯片的一种类型，它是将DNA分子固定于支持物上，并与标记的样品杂交，通过自动化仪器检测杂交信号的强度来判断样品中靶分子的数量，进而得知样品中mRNA的表达量，也可进行基因突变体的检测和基因序列的测定。P11921 反转录酶：依赖于RNA德DNA聚合酶，有53合成DNA活性，但是无35外切核酸酶活性。P3222 连接酶：就是能将两段核酸连接起来的酶。P3423 黏粒：是质粒的衍生物，是带有COS序列的质粒。P7124穿梭载体：是指能够在两类不同宿主中复制、增殖和选择的载体。P9425 错误掺入诱变：指在体外DNA扩增过程中，使用具有错配倾向的DNA聚合酶以及反应条件，使碱基错误掺入到新合成的基因中。P16926 cDNA文库：DNA是指以mRNA为模板,由逆转录酶催化形成的互补DNA(cDNA),其核苷酸序列完全互补于模板mRNA链;再以cDNA为模板,由DNA聚合酶合成第二链,得到互补双链DNA.由于模板mRNA含有该种细胞的各种mRNA分子,因而合成的cDNA产物是各种mRNA拷贝的混合物,然后将双链产物与载体(质粒或噬菌体)DNA重组,并转化到宿主细菌或包装成噬菌体颗粒,得到一系列重组的克隆混合体.每个克隆含单独一种mRNA分子,克隆总和则包含细胞的全部mRNA信息,即cDNA文库. P18727 体外诱变：对克隆化的DNA进行诱变处理，改变其核苷酸序列，从而获得突变基因，用于基因工程等研究. P16828 基因下调：有称RNA干扰，通过干扰RNA分子的作用达到转录后基因沉默的效应。P25829、动物基因工程：是指利用DNA重组技术对动物所进行的工程操作。P25030、报告基因：是指其编码产物能够被快速测定、常用于判断外源基因是否成功地导入受体细胞，是否启动表达的一类特殊用途的基因。P24031 载体：将外源DNA或基因携带入宿主细胞的工具。P4032 病毒感染法：是一种将外源基因引入细胞内的高效基因转移法。P25433 .间隔区：位于基因和基因之间的最大的非编码区，简称IR区。P6034 .复制型DNA：在宿主细胞内，感染性的单链噬菌体DNA在宿主酶的作用下转变成环状双链DNA,用于DNA的复制,因此这种双链DNA称为复制型DNA。6135 .噬菌粒：是带有丝状噬菌体大间隔区的质粒载体，是集质粒和丝状噬菌体的有利特征与一身的载体，具有ColEl复制起点及抗生素抗性选择标记，以及丝状体噬菌体的间隔区。P6736 .反转录PCR：是以反转录的cDNA作模版所进行的PCR反应，可用于测定基因表达的强度，还可用于鉴定已转录序列是否发生突变，呈现mRNA多态性，克隆mRNA的5和3末端序列，以及从非常少量的mRNA样品构建大容量的cDNA文库。P14637、质粒：质粒是染色体外的遗传因子，能进行自我复制。P3938、整合载体：将某个基因插入到染色体中去的工作，承担这部分工作的载体可称为整合载体。P9539、杂交：在一定的条件下，分子间氢键的断裂与恢复是DNA/DNA、DNA/RNA分子间选择性结合的根本动力，这一过程称之为杂交。P12740 调节子：是指被一个调控因子控制的一组基因的总和。P13041 、cDNA文库的构建：将来自真核生物的mRNA体外反转录成cDNA，与载体连接并转化大肠杆菌的过程，称为cDNA文库的构建。P19242、基因工程：即重组DNA技术，是根据人们的意愿对不同生物的遗传基因进行切割，拼接和重新组合，在转入生物体内产生出人们所期望的产物，或创造出具有新的遗传特征的生物类实践。P22343、微生物肥料：利用微生物的生命活动及代谢产物的作用，改善作物养分供应，为农作物提供营养元素，生长物质，调控生长增强抗逆性，达到提高产量，改善品质，减少化肥使用，提高土壤肥力的一类生物制品就是生物肥料。P30144 酵母人工染色体（YAC）：是模拟酵母菌染色体的复制而构建的载体，当装载外源DNA片段后在酵母中可以像酵母菌的染色体一样复制，从而达到克隆大片段DNA的目的。(P70)45穿梭质粒载体: 指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。P9446 单核苷酸多态性（SNP）：在不同物种、不同等位基因之间，在基因组水平上单个或少数几个核苷酸的差异（如发生转换、颠倒、插入、缺失等变异）就形成了单核苷酸多态性。P21247 基因定点诱变：使已克隆基因或DNA片段中的任何一个特定碱基发生取代、插入或缺失突变的过程。（P176）48、克隆载体(cloning vector) ：用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体。一般具有较低的分子量、较高的拷贝数和松弛型复制子。主要由细菌质粒或与其它质粒、噬菌体及真核生物病毒的DNA重组构建。常用载体pUC18 pUC 19.。49、重组率：重组率 = 含有外源DNA的重组分子数 / 载体分子总数在常规实验条件下，重组率一般为25 - 75%，重组率是衡量连接反应效率的重要指标，较高的重组率可以大大简化DNA重组的后续操作。50、基因文库（gene library or gene bank）：从特定生物个体中分离的全部基因，这些基因以克隆的形式存在（人工构建）。根据构建方法的不同，基因文库分为： 基因组文库（含有全部基因）和 cDNA文库（含有全部蛋白质编码的结构基因） 51、原位合成：是指利用光导合成的方法在载体表面上逐个合成寡核苷酸，合成后点样可能将十几至几十个碱基的寡核苷酸或几百个碱基的cDNA片段固定到载体上制成寡核苷酸芯片或cDNA微阵列。52、交错延伸(stagger extension process, StEP)： 在PCR反应中把常规的退火和延伸合并为一步, 缩短其反应时间，从而只能合成出非常短的新生链，经变性的新生链再作为引物与体系内同时存在的不同模板退火而继续延伸。此过程反复进行，直到产生完整的基因长度。53、离子交换层析：以离子交换剂为固定相，以特定的含离子溶液为流动相，利用离子交换剂对待分离的各种离子结合力的差异，而将混合物中不同离子进行分离的层析技术。54、反义核酸药物：反义核酸是一些人工合成的单链反义分子，可以通 过碱基互补原则与被感染细胞内部的某个靶标mRNA或DNA结合，抑制或封闭该基因的转录和表达，或切割mRNA使其丧失功能。受体细胞，是否启动表达的一类特殊用途的基因。P240二 选择题（1分/题）1、下列设计的探针中，最佳的是 （D ）A ACATTAAATTATT B GGGCAC ACCTTGATAAGGT D CGGACTTGACCATC2、 第一个作为重组DNA载体的质粒是（C） A、pBR322 B、C01E1 C、pSClOl D、pUCl8 3.基因工程的单元操作顺序是（ B ）A 增，转，检，切，接B 切，接，转，增，检C 接，转，增，检，切D 切，接，增，转，检 4分子杂交的化学原理是形成 （D ）A 共价键 B 离子键 C 疏水键 D 氢键5下列对限制性内切酶描述正确的是（B） 限制性内切酶可识别任一的DNA序列 使用限制性内切酶时，有时可出现星活性 限制性内切酶可识别碱基数不超过5个 限制性内切酶切割碱基序列产生都是黏性末端6根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成（B ）A 2 大类 B 3 大类 C 4 大类 D 5 大类7T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是（D ）A 2 -OH 和 5 P B 2 -OH 和 3 -PC 3 -OH 和 2 P D 5 -OH 和 3 -P8下列有关连接反应的叙述，错误的是（A ）A 连接反应的最佳温度为 37 B 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10%C 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mMD 连接酶通常应过量 2-5 倍9原生质体转化方法不大适用于 （ A）A 大肠杆菌 B 枯草杆菌 C 酵母菌 D 链霉菌10研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是（C） A、A.Kornberg B、W.Gilert C、P.Berg D、B.McClintock 11一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是（A） A、EcoRI B、EcoB C、EcoC D、EcoRII 12基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ） A I 类限制酶 B. II 类限制酶 C. III 类限制酶 D. 核酸内切酶 E. RNAase 13下列关于同裂酶的叙述错误的是 ( B ) A. 是从不同菌种分离到的不同的酶 , 也称异源同工酶。 B. 它们的识别序列完全相同。 C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。 14 下列关于限制酶的叙述错误的是 ( B ) A. I 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP 和 S- 腺苷蛋氨酸。 B. II 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP 。 C. III 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP ， S- 腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。 15 lacZ 标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入 （D ）A 半乳糖 B 异丙基巯基 - 半乳糖苷（ IPTG ）C 蔗糖 D 5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚基 - -D- 半乳糖苷（ X-gal ）16列与 RFLP 相关的一条是 ( D ) A. 不同限制酶在单个染色体 DNA 上的限制性图谱。 B. 两种物种个体间的限制性图谱。 C. 同一个体等位基因的限制性图谱。 D. 同一物种不同个体的限制性图谱17 多数限制酶消化 DNA 的最佳温度是（ A ） A. 37 B.30 C.25 D.16 E.33 18各组专业术语中，含义最为接近的是 （C ）A 终止子与终止密码子 B 基因表达与基因转译C DNA 退火与 DNA 复性 D 重组子与转化子19 下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是 （C ）A 大肠杆菌繁殖迅速 B 枯草杆菌分泌机制健全C 链霉菌遗传稳定 D 酵母菌表达产物具有真核性20 下列常用载体的装载量排列顺序，正确的是 （A ）A Cosmid -DNA Plasmid B -DNA Cosmid PlasmidC Plasmid -DNA Cosmid D Cosmid Plasmid -DNA21 FLP 形成的原因是 （ A ） A. 由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。 B. 使用不同的限制性内切酶进行切割。 C. 杂交时使用不同的探针。 D. 每种染色体存在两条。22 生质体转化方法不适用于 （ A）A 大肠杆菌 B 枯草杆菌 C 酵母菌 D 链霉菌23 II 类限制酶反应中必须的阳离子是（ C ） A. Na + B. Ca2+ C. Mg2+ D. Zn2+ 23 列有关回文序列的一般特征不正确的是（A） A 可增强基因表达 B 有对称轴 C 是自我互补的序列 D 是 II 类限制酶的识别序列24 制酶的星星活性是指在非正常条件下，限制酶（ A ） A. 识别和切割序列发生变化。 B. 切割活性大大提高。 C. 识别和切割序列与原来完全不同。D. 可以任意切割 DNA 。E. 只能部分切割 DNA 。 25下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D ) A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。 B. 许多限制酶对线性 DNA 和超螺旋 DNA 底物的切割活性是有明显差异的。 C. 有些限制酶对同一 DNA 底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。 D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。 26限制性内切酶可特异性识别 ( B ) A. 双链 DNA 的特定碱基对 B. 双链 DNA 的特定碱基序列 C. 单链 RNA 的特定碱基序列 D. 单链 DNA 的特定碱基序列 27某一重组 DNA （ 6.2 kb ） 的载体部分有两个 SmaI 酶切位点。用 SmaI 酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的 SmaI 酶切位点共有 （D ）A 4 个 B 3 个 C 2 个 D 至少 2 个28 DNA 法获得目的基因的优点是（A ）A 成功率高 B 不含内含子 C 操作简便 D 表达产物可以分泌29下列有关基因的叙述，错误的是（ A）A蛋白质是基因表达的唯一产物 B 基因是 DNA 链上具有编码功能的片段C 基因也可以是 RNA D 基因突变不一定导致其表达产物改变结构30 物工程的上游技术是（A ）A 基因工程及分离工程 B 基因工程及发酵工程C 基因工程及酶工程 D 基因工程及细胞工程31下列关于限制酶命名的表示方法，正确的是（ B ） A. Sau.3A I B. Hind III C. pst I D. Ecor I 32 进行 DNA 部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（ D ） A. 反应时间 B. 反应体积 C. PH D. 限制酶量 33下列酶在反应中不需要 ATP 的是 ( D ) A. E coK B. T4DNA 连接酶 C. BamH I D. EcoB 34下列哪种方法可用于mRNA的纯化（C）A 透析袋电洗脱法 B Glass Milk 结合法 C 酚异硫氰酸胍抽提法 D Qiagen纯化法35 如果一个限制酶识别长度为 6bp , 则其在 DNA 上识别 6bp 的切割概率为 ( D ) A. 1/44 B. 1/66 C. 1/64 D.1/46 36 关于 II 类限制酶说法正确的是（ B ） A 具内切核酸酶和甲基化酶活性 B 仅有内切核酸酶活性 C 只识别非甲基化的 DNA 序列 D II 类限制酶反应需要 Mg2+,ATP 37以下哪个不是生物芯片按载体分类的情况（C）P120A玻璃芯片 B硅芯片 C蛋白质芯片 D陶瓷芯片38按芯片使用功能和用途来分，不包括以下哪项（D）P121A测序芯片 B表达芯片 C 基因差异表达芯片 D玻璃芯片39以下哪一项不属于常用的基因芯片制作法（D）P123A接触点样法 B喷墨法 C光刻DNA合成法 D直接合成法40关于制作生物芯片的载体材料要求说法正确的是（D）P125A载体表明必须具有可以进行化学反应的活性机团；B载体应当是惰性的和有足够的稳定性；C应使单位载体上结合的生物分子达到最佳容量；D以上说法都正确41在设计克隆方法的时候，主要考虑产物如何能与克隆载体高效连接，以下那种方法是考虑这一因素的体现（D）P138A在PCR产物两端添加限制性内切酶位点B A/T克隆法C平末端DNA片段的克隆D以上都是42（ A ）基因工程操作的三大基本元件是:(I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体) I + II + III I + III + IV II + III + IV II + IV + V III + IV + V43 ( A )下列对逆转录酶描述正确的是： A 依赖于RNA的DNA聚合酶或称为RNA指导的DNA聚合酶B 依赖于cDNA的DNA聚合酶或称为cDNA指导的DNA聚合酶C 依赖于DNA的DNA聚合酶或称为DNA指导的DNA聚合酶D 依赖于RNA的RNA聚合酶或称为rNA指导的RNA聚合酶44（ C ）下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大? A质粒B黏粒C酵母人工染色体(YAC)D噬菌体45（ C ）关于cDNA的最正确的提法是： A 同mRNA互补的单链DNA B 同mRNA互补的双链DNA C 以mRNA为模板合成的双链DNA D以上都正确46（ B ） 同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是： A OC DNASC DNPLDNA B SC DNAL DNAOC DNAC L DNAOC DNASC DNA D SC DNAOC DNAL DNA47.下列哪项不属于酶切反应的条件 (P24) ( C )A 缓冲液 B 温度 C 引物 D 时间48关于S1核酸酶下列说法错误的是（P35） （ C ）A 可降解单链DNAB 可降解单链RNAC 可降解双链DNAD 可用于分析DNA:RNA杂交体的结构49.下列不属于M13噬菌体生物学特征的是（P60） （ A ）A M13噬菌体基因组可编码复制蛋白、形态蛋白和功能蛋白B M13噬菌体的基因组为单链DNAC M13噬菌体颗粒是丝状的D 基因组DNA为正链50一段DNA序列大小约为40kb，可用下列哪种载体装载 （P70） （ D ）A PAC B BACC YACD 黏粒51下列哪项不是目前已知的基因芯片的制作方法（P123） （ B ）A 接触点样法B 物理合成法C 喷墨法D 原位合成法52多数 II 类限制酶反应最适 PH 是 ( C ) A. PH:2-4 B. PH:4-6 C. PH:6-8 D. PH:8-10 53以下关于扩增操作目的不正确的是（D）增殖转化细胞，使得有足够数量的转化细胞用于筛选程序 B）扩增和表达载体分子上的标记基因，便于筛选 C）表达外源基因，便于筛选和鉴定 D）区分转化子与非转化子54双链平头的cDNA通常不使用下列那种方法克隆入载体中 （C）平头末端直接与载体连接B）平头两端分别接同聚物尾C）平头一端接同聚物尾D）人工接头引入酶切口54下列关于加装基因文库的质量标准叙述正确的是（B）重组克隆的总数越大越好（不宜过大，以减轻筛选工作的压力） B）载体的装载量最好大于基因的长度 （ 避免基因被分隔克隆）C）克隆与克隆之间没必要存在足够长度的重叠区域（必须存在足够长度的重叠区域，以利克隆排序） D）克隆片段易于从载体分子上部分卸下（完整卸下）55YAC载体的最大装载量是(A)）400 kb B）300 kbC）25 kbD）45 kb56下列那种生物芯片是按点样方式分类的（C）A）硅芯片B)基因芯片C)微矩阵芯片D)表达谱芯片57以下不属于PCR反应体系循环参数的是（A）A）模板B）变性 C）退火D）循环次数三 是非判断题 (1分/题,共5分)1. 质粒提取后,在琼脂糖电泳出现一条带时说明质粒提取纯度高,当为三条带时为纯度不高.( )2 基因是指携带从一代到下一代信息的遗传的物质单位和功能单位。（）3 PCR技术是通过酶促反应体外大量扩增一段目的基因的技术。它需要加模板、TaqDNA聚合酶、单核苷酸三种类型的物质。（X）4.DNA连接酶是一种能催化二条DNA链之间形成磷酸二酯键的酶,因此该酶既可修复基因序列中的缺口,也可修复裂口. ( )5.入噬菌体的插入型载体只有一个单一限制酶切点,替换型载体有2个成对的限制性酶切点.( )6.原核细胞和真核细胞转录的mRNA均具有与rRNA结合的SD序列,以利于进行有效的转录.( )7. cDNA文库是包含有细胞中所有mRNA，因此该文库能包含细胞所有的遗传信息。（ X ）8、S1酶具有补平DNA链粘性末端的特性。 （ X ）9、细胞分化的实质是组织特异性基因在时间上与空间上的差异表达。（）10碱性磷酸酶是用于脱去DNA（RNA）5末端的磷酸根，使5-P成为5-OH，该过程称核酸分子的脱磷酸作用。( )11连接反应的最佳温度为 37 （ X ）12 分子诊断是指利用PCR技术与分子杂交标记相结合的技术，它能快速准确地检测出病原性物质。（）13 甲基化酶能使DNA序列发生甲基化，早基化DNA的更为稳定，被甲基化的酶切点，不易被酶切割 。 （ ）14 DNA复制总是从35方向进行的。（X ）15COS位点，COS质粒都含有用于载体自身环化的12个碱基的互补粘性末端 。（ ）16 原核细胞的RNA聚合酶只能识别原核 细胞的启动子以催化RNA的合成。 （ X ）17.原核有3种DNA聚合酶，都与链的延长无关。（X ）18.载体与常规克隆载体的核心区别在于其复制单元的特殊性。（）P7919.Southern印迹转移法是一种将RNA片段从琼脂糖凝胶转移到滤膜的方式。（X）P10820.PCR反应中使用的DNA聚合酶是耐高温的，在900C以上的高温下仍能有活性。（）21.随着温度升高，引物与模板结合的特异性降低，非膜特异性的扩增几率增强，扩增效率随之增强。（X）P13722、1977年世界上第一张全基因组基因芯片-含有6116个基因的酵母全基因组芯片在斯坦福大学实验室完成（）P12023、生物芯片的分析步骤通常可以分为生物芯片的制作、杂交、或反应、测定或扫读和数据处理等。（）P12824单色荧光图像处理比较复杂，通常需多次输入。（）P12925、基因芯片在分析过程中试用一系列短的、未知序列的寡核苷酸探针与目的DNA进行杂交，根据杂交模式可构建目的DNA的序列。（）P12826、同一组织细胞在不同的发育阶段、不同外界环境因素影响下，其基因的表达模式不同。同一个体的不同组织器官的基因表达模式也不同。（）P12927、在进化过程中同一物种不同种群和个体之间存在着不同的基因型，这些不同的基因型与生物个体间不同的性状有着密切的关系。（）P13028、A/T克隆法是目前使用最广泛的PCR产物克隆方法，须在产物末端添加酶切位点，对任何引物扩增的产物都可克隆。（）P13929、为了使PCR产物能够方便地装载到克隆载体上，可在扩增的过程中在其两端添加限制性酶切位点。（）P13830、病毒感染法适合于离体培养的细胞与活体细胞进行基因转移操作，具有简便、快捷的优势，且只对有丝分裂细胞有效。（）P26231、Northern 杂交可以检测转基因动物或转染细胞是否转录出目的基因所对应得mRNA.()P26932.质粒的构型中，线性L型是最简单的构型，因而，电泳时，泳动的速度最快。()33.甲基化酶和DNA连接酶均需要引物。()34.转化子就是重组子。( )35.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和过氧化物酶。()36启动子与克隆基因间的距离对基因表达有影响。()37 TaqDNA聚合酶主要用于PCR反应。（P32） （ ）38、YAC载体主要是用来构建大片段DNA文库，可用作常规的基因克隆。（P77） （ X ）39 PCR 反应的每一个温度循环周期都是由DNA变性、引物退火和反应延伸三个步骤完成的。( )40噬菌粒载体 由质粒载体和单链噬菌体载体结合而成的新型的载体系列( )41金属微粒可以影响基因枪法的转化率，常用的是钨粉和金粉颗粒。（P234） （ ）42.只有处于细胞分裂S期的细胞才具有被外源基因转化的能力。（P239） （ ）43、超声波处理后的DNA片段呈平头末端，需加装人工接头。（）44部分酶切法一般选用四对碱基识别序列的限制性内切酶。（）45由于绝大多数真核生物的mRNA小于10 kb，因此用于cDNA文库构建的载体通常选 入DNA。（） （质粒）46、基因的结构或种类决定物种；基因的功能或表达则决定生命，即生物的生、老、病、死。（）47、不对称PCR的目的是扩增产生特异长度的单链DNA。（）48、FQ-PCR的工作原理是利用Taq酶的53内切酶活性，在PCR反应系统中加入一个荧光标记探针。（） （外切酶活性）49 PCR反应模板 单、双链DNA均可，能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂、DNA结合蛋白类。（） （不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂、DNA结合蛋白类能）50单双链DNA均可转化酵母菌，但单链的转化率是双链的10-30倍。（）51、乙肝病毒是一种蛋白包裹型的双链RNA病毒，具有感染力的病毒颗粒呈球面状，直径为42 nm，基因组仅为3.2 kb。（） （双链DNA病毒）52如果有两种以上的成分被吸附在离子交换剂上，则在用洗脱液洗脱时，各成分被洗脱的可能性取决于各自反应的平衡常数。（）四 简答题（5分/题）一P1噬菌体由哪些部分组成？P821 复制元件2环化和包装信号3 标记基因4 克隆位点5 填充片段二 实现体外随机诱变的方法有哪些？P1681 错误掺入法 2 增变菌株诱变3 盒式诱变4 化学诱变三 构建基因文库的基本程序包括?P1881 提取研究对象基因组DNA，制备合适大小的DNA片段，或提取组织或器官的mRAN并反转录成cDNA。2 DNA片段或cDNA与经特殊处理的载体连接形成重组DNA。3 重组DNA转化宿主细胞或体外包装后侵染受体菌。4 阳性重组菌落或噬菌斑的选择。四 抗性基因工程包括哪些内容？P2431 抗虫基因工程。2 抗除草剂基因工程。3 抗病基因工程。4 抗逆基因工程。五 生物芯片的分类有哪些？P1201 按载体材料可将芯片分为玻璃芯片、硅芯片、陶瓷芯片。2 按点样方式不同，可分为原位合成芯片、微距阵芯片和电定位芯片。3 按芯片固定的生物分子类型可将芯片分为基因芯片、蛋白质芯片及芯片实验室。4 按芯片使用功能和用途不同可分为测序芯片、表达谱芯片和基因差异表达分析芯片。六 酶切反应条件的类型有哪些？P241 缓冲液2 反应温度3 反应时间4 终止酶切的方法七、试述PCR反应的步骤以及反应体系。P133反应步骤：（1） 模板DNA变性，由双链状态变成单链状态。（2） 引物与模板结合，完成复性过程。（3） DNA聚合酶和底物合成与模板互补的DAN。 反应体系：（1） 缓冲液 （2） 脱氧三磷酸核苷 （3） 引物 （4） 模板 （5） DNA聚合酶八 基因组DNA文库的构建程序？(1）载体的制备。(2) 高纯度大相对分子质量基因组DNA的提取。(3) HMW DNA的部分酶切与脉冲电泳分级分离。(4) 载体与外源片段的连接与转化或侵染宿主细胞。(5) 重组克隆的挑取和保存。P190九 PCR的扩增步骤?首先将模版DNA进行变性，使双链DNA在高温下成单链，然后退火，使引物于模版的互补链结合，最后，在一定条件下，将DNA聚合酶dNTP连续加到引物的3羟基端，合成DNA，这个步骤称为延伸。P134十 动物基因工程载体必须具备哪些功能？P252（1） 为外源基因提供进入受体细胞的转移能力。（2） 为外源基因提供在受体细胞内复制或整合的能力。（3） 为外源基因提供在受体细胞内的扩增和表达能力十一 分子克隆载体应具备哪些特点？P391 在宿主细胞内必须能够自主复制2 必须具备合适的酶切位点，供外源DNA片段插入，同时不影响其复制3 有一定的选择标记，用于筛选4 具有较高的拷贝数，便于载体的制备十二 TDNA转移的影响因素有哪些？P2381 农杆菌菌株。2 农杆菌菌株高侵染活力的生长时期。3 基因活化的诱导物。4 外植体的类型和生理状态。5 外植体的与培养。6 外植体的接种及共培养。十三 原生质体介导常用方法有哪些？P231（1） PEG介导的基因转化。（2） 脂质体介导基因转化。（3） 电激法介导基因转化。（4）显微注射介导的基因转化。十四 构建cDNA文库时需要用到哪些工具酶？ 答：逆转录酶，DNA 聚合酶 I 或 Klenow 片断，单链核酸酶 S1，末端转移酶，限制性核酸内切酶，DNA连接酶 十五. 简述进行菌落原位杂交的基本过程。 答：噬菌斑杂交法的基本步骤是将重组噬菌体感染的宿主菌倒在平皿上，待生成噬菌斑后，将与培养皿一样大小的硝酸纤维素薄膜盖在上面，每个噬菌斑中约100000个噬菌体就影印转移到膜上。 膜揭下后，用碱处理除去蛋白质外壳，使噬菌体DNA变性并同膜共价结合，然后用同位素标记的探针与之杂交，放射自显影检测。按照膜与培养基上预先做好的方法标记，将阳性噬菌斑挑出来扩增。十六. 基因芯片的主要应用是什么？ 答：1 寻找正常样本与异常样本之间在mRNA表达水平差异的基因(定量和定性); 2 寻找和研究参与某一特定功能的基因或基因群; 3 确定目的基因表达的时空性; 4 测序与点突变的确定。十七 .基因转移的病毒需要具备哪些基本条件？.携带外源基因并能包装成病毒颗粒；2.介导外源基因转移与表达；3.对机体不致病。十八 基因表达水平检测的方法？P2681 报告基因。2 Northern杂交。3 反转录PCR。4 聚丙烯酰胺凝胶电泳。5 Western杂交。6 目的蛋白的生物活性检测。十九 cDNA文库的构建步骤？P1931 细胞总RNA的提取和mRNA分离。2 第一链cDNA合成。3 第二链cDNA合成。4 双链cDNA克隆进质粒或噬菌体载体并导入宿主中繁殖。二十 典型的DNA重组实验通常包含几步？ 提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一DNA分子上（克隆载体），形成一个新的重组DNA分子。将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。二十一 荧光标记的方式？1 .SYBR荧光染料 2.水解探针 3.发夹型杂交探针 P152二十二 cDNA第二条链的合成方法1.自身引导合成法 2.置换合成法 3.引导合成法 4.引物衔接头合成法二十三 噬菌体的特征？双链DNA稳定，有高产，具有常规质粒的特征免除了将外援DNA片段从质粒亚克隆于噬菌体这一既繁琐又费时的。P67二十四 外源基因表达的方式有哪些？1 外源基因以融合蛋白形式表达。2 构建可分泌蛋白，分泌到胞外培养基中。3 外源蛋白在宿主细胞中以包涵体的形式表达。4 外源基因在细胞表面的表达。二十五、PCR反应体系包括哪些内容？基本反应过程是什么？PCR反应体系所要求的条件: a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的 DNA引物（约20个碱基左右）。b、具有热稳定性的酶如：TagDNA聚合酶。c、dNTP。d、作为模板的目的DNA序列，E 无菌水，F，缓冲液PCR反应体系的基本反应过程：预变性、变性、退火、延伸、复延伸。二十六、限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响？酶的纯度。DNA样品的纯度。DNA的甲基化程度。酶切反应的温度与时间。DNA分子的构型。限制性核酸内切酶的反应缓冲液。二十七、作为基因工程载体必须具备的基本条件是什么 能在宿主细胞内进行独立和稳定的自我复制具有合适的限制内切酶位点具有合适的选择标记基因二十八.分子克隆载体应具备的特征（P39）答：（1）在宿主细胞内必须能够自主复制； （2）必须具备合适的酶切位点，供外源DNA片段插入，同时不影响其复制； （3）有一定的选择标记用于筛选； （4）有较高的拷贝数，便于载体的制备。二十九.试述转基因动物的鉴定方法（P266）答：主要有两种：标记筛选法和分子检测法标记筛选法包括：（1）正负选择标记筛选法； （2）无启动子筛选法。分子鉴定法包括：（1）PCR扩增； （2）斑点杂交； （3）Southern杂交； （4）荧光原位杂交。三十.动物基因工程表达水平检测的报告基因应具备的特点（P268） 答：（1）报告分子不存在于宿主中或易于与内源性基因相区别； （2）应该有一个简单、快捷、灵敏及经济的分析方法； （3）报告基因的分析结果应具有很强的线性范围，便于分析启动子活性的大小变化； （4）报告基因的表达必须不改变受体细胞或生物体生理活动。三十一 基因芯片的应用有哪些？P1291 基因表达分析2 基因型及多态性分析3杂交测序4核酸和蛋白质相互作用的研究5疾病的诊断与治疗6药物开发7在营养与食品卫生领域的应用8在环境科学领域中的应用三十二、S1核酸酶的基本特性降解单链DNA的速度比降解双链DNA快75000倍Zn2+必需最适pH范围为4.0 - 4.3需要NaCl 10 - 300 mM降解单链DNA的速度比降解单链RNA快7倍三十三、T4-DNA酶的基本特性：53的DNA聚合酶活性和35的核酸外切酶活性在无dNTP时，可以从任何3-OH端外切在只有一种dNTP时，外切至互补核苷酸暴露时停止在四种dNTP均存在时，聚合活性占主导地位三十四、营养缺陷型筛选法的基本原理： 营养缺陷型筛选法可以区分转化子与非转化子，一般不能区分重组子与非重组子。其原理是：载体分子上携带某种营养组份的合成基因，而受体细胞本身不能合成这一营养组份，将转化细胞涂布在不含此营养组份的培养基上，长出的便是转化子 三十五 基因芯片的特点微型化和自动化。现已出现的芯片面积最大不过525cm,最小仅有1cm,;每个阵列中阵点样品DNA的用量仅为5nl(0.5g/L)左右;同时杂交和洗片等过程都可实现自动化,工作效率大幅度提高。高度平行性。基因芯片技术是将待研究的基因制作成芯片,并在同一张芯片上同时对实验组和对照组材料进行杂交分析,从而使实验结果具有可比性.巨大的信息产出率。在一张芯片上不仅可以获得组织、细胞、血液等基因表达信号的定性、定量分析，还可实现全局检测静态到动态、时间与空间上的差异及遗传信息。高度敏感性和专一性。能可靠并准确检测出10 pg/L的DNA样品。 高度重复性。一张由尼龙膜制作的微阵列，可以重复杂交使用多达20次。强大的类比性。使得以往需多次处理的遗传分析在同一时间和条件下快速完成。哺育新的实验方法。此技术易与其它常规生物技术相融合交叉。基因芯片这些独一无二的特点也代表了后基因组时代技术的发展方向。三十六、在进行PCR时，遇到凝胶电泳中出现引物二聚体区带问题时应怎样解决？ 检查引物的 3端是否互补； 设计较长的引物； 增加靶目标DNA的量； 降低引物浓度； 减少周期次数； 增加退火温度；五 问答题（10分/题）一 酵母基因工程有哪些优点？P274答：酵母基因工程的优点具体表现在以下方面： 酵母是真核生物，大多具有较高的安全性。 酵母繁殖速度快，能够像细菌一样在廉价的培养基上高密度培养，因此能大规模生产，具有降低基因工程产品成本的潜力。 将原核生物中已知的分子和基因操作技术与真核生物中复杂的转译后修饰能力相结合，能方便地用于外源基因的操作。 采用高表达的启动子，可高效表达目的基因，而且可诱导调控。 作为真核生物，提供了翻译后加工和分泌的环境，使得产物与天然蛋白一样或类似。 酵母菌可将表达的外源蛋白与N末端前导肽融合，指导新生肽分泌，同时在分泌过程中可对表达的蛋白进行糖基化修饰。不会形成不溶性的重组蛋白包涵体，易于进行分离提纯。 酵母还能像高等真核生物一样移去起始甲硫氨酸，这避免了在作为是使用中引起免疫反应的问题。酵母菌的分子生物学研究已取得重大进展，已完成全基因组测序，它具有比大肠杆菌更完备的基因表达调控机制和对表达产物的加工修饰及分泌能力。 酵母可进行蛋白的N乙酰化、C甲基化、十四酰化，对定向到膜的胞内表达蛋白具有重要作用。二、简述影响转化率的因素。载体本身的性质：载体及DNA重组分子方面，不同的载体转化同一株受体细胞，其转化率不同； 载体的空间构象，质粒的超螺旋构象转化率最高，经酶切连接操作后的载体由于空间构象难以恢复，其转化率一般要比新制备的超螺旋质粒低两个数量级； 插入片段的大小，对质粒载体而言，插入片段越大，转化效率越低 。受体细胞方面：受体细胞必须与载体相匹配，例如：pBR322转化大肠杆菌JM83株，转化率很低；但对大肠杆菌ED8767株的转化率则较高 转化方法方面： 受体细胞的预处理，影响最大；供受体的比例；转化方法。三、PCR引物的设计一般原则引物长度一般以1830bp为宜，过短则降低特异性，过长则会引起引物间的退火而影响有效扩增，同时也增加引物合成的成本。避免引物内部出现二级结构，避免序列内有较长的回文结构，使引物自身不能形成发夹结构。G/C和A/T碱基均匀分布， G+C含量在4060%之间，引物碱基序列尽可能选择碱基随机分布，避免