宫颈癌基因E6E7mRNA(南阳讲课).ppt

科蒂亚生物 周贺娟 E6 E7mRNA 新一代宫颈癌变风险评估方法 宫颈癌变评估 与 HPV癌基因E6 E7mRNA 主要内容 报告解读 处理建议 1 临床意义 适用范围 3 2 主要内容 1 HPV癌基因E6 E7mRNA 1 2 型别 120多种 依据L1DNA 1 结构 外壳蛋白 L1蛋白 72个五聚体 L2蛋白 12个 内部遗传物质 闭环 双链DNA 不含RNA 3 分类 依据生物特性 致癌性高危型HPV HR HPV 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 68 66低危型HPV LR HPV 6 11 42 43 44 什么是E6 E7mRNA L1 主要衣壳蛋白 是疫苗的主要成分 L2 次要衣壳蛋白 是市售抗体的主要识别位点 E4 结合并破坏细胞角蛋白网 形成挖空细胞的外观 E2 负性调节E6和E7 维持凋亡和细胞周期的调控 通常在病毒发生整合时失活 HPV的主要致癌基因E6通过抑制p53而阻断凋亡E7通过抑制pRB使细胞周期失控 X HPV的基因片段及功能 E6 E7mRNA 高危亚型HPV感染宫颈上皮细胞 将产生两种癌蛋白 E6和E7蛋白 癌蛋白可与宿主细胞的细胞周期调节蛋白 抑癌蛋白如P53 RB等 相结合 导致细胞周期控制失常 发生癌变 人民卫生出版社 妇产科学 2004年1月第6版 致癌原理 E6 E7mRNA与宫颈癌的关系 E6 E7mRNA 是宫颈病变开始和进展的必由之路 HPV感染在宫颈细胞内的表达过程 基因改变早于细胞改变 E6 E7mRNA 是致癌基因E6 E7表达的直接产物 是最终致癌物 E6 E7癌蛋白合成的模板 是宫颈病变开始和进展的必要条件 小结 主要内容 1 E6 E7mRNA的临床意义与适用范围 2 高危的HPV感染宫颈上皮细胞 癌基因E6 E7mRNA E6 E7癌蛋白 E6 E7癌蛋白与抑癌蛋白P53 RB等结合 宫颈细胞CIN或癌变 癌基因E6 E7DNA HPV病毒学检测 病毒癌基因学检测 细胞形态学检测 HPVL1DNA HPVL1mRNA HPVL1蛋白 HPV复制繁殖 HPV感染后演变路径及宫颈癌筛查 诊断方法应用 临床意义 特异性强 阳性预测值高 HPV感染致宫颈癌模式图 什么样的感染者会进一步进展呢 哪种检测方法能提示 E6 E7mRNA检测1 发现已感染HPV 且癌基因已经表达的宫颈病变高风险者 特异性强 阳性预测值高 2 弥补 细胞学检测敏感性 HPV检测特异性 阴道镜 活检的漏检等 3 预测发展趋势 指导后续治疗 随访 提供关键的癌变信息 治疗更及时 预防更有效 小结 适用范围 不局限于30岁以上人群 1 筛查 细胞学 E6 E7mRNA检测 2 辅助诊断 1 细胞学 E6 E7mRNA检测 2 若HPV E6 E7mRNA检测 3 病理组织 E6 E7mRNA检测 3 手术后及随访时 组织学 癌基因E6 E7mRNA 细胞学 E6 E7mRNA检测 TCT结果正常的女性 在正常筛查间隔内一定是安全的吗 TCT结果 ASCUS 如何评估风险 直接镜检 活检 过度检查 随访 漏诊 30岁以下妇女 感染率高 清除率高 HPV 率高 该如何评估风险 筛查常见问题 IntracellularHumanPapillomavirusE6 E7mRNAQuantificationPredictsCIN2 inCervicalBiopsiesBetterThanPapanicolaouScreeningforWomenRegardlessofAge ArchPatholLabMed 2012 136 956 960 E6 E7mRNA检测 联合TCT筛查基因改变早于细胞形态改变 辅助提高细胞学敏感性 ASC US分流30岁以下女性筛查效率 筛查应用 CIN1风险评估 随访时间确定 CINII III的患者 手术方式术后随访 特殊病例 未生育女性 妊娠女性 随访间隔 辅助诊断常见问题 HPV感染致宫颈癌模式图 预测性能 ASCUS LSIL者 2年内跟踪诊断至CIN2 女性 HPVE6 E7mRNA作为监测手段 检测呈阳性数量约是阴性数量的69 8倍 HPVDNA作为监测手段 检测呈阳性数量约是阴性数量的5 7倍 TorMoldenetc PredictingCIN2 whendetectingHPVmRNAandDNAbyPreTectHPV ProoferandconsensusPCR a2 yearfollow upofwomenwithASCUSorLSILPapsmear InternationalJournalofCancer Int J Cancer 2005 114 973 976 E6 E7mRNA检测 辅助活检后人群的后续处理 提高诊断水平 组织学CIN1 建议采用E6 E7mRNA检测 E6 E7mRNA检测阳性 建议缩短随访时间 E6 E7mRNA检测阴性 建议根据医嘱随访 组织学CIN2 建议采用E6 E7mRNA检测 E6 E7mRNA检测阳性 建议积极治疗 E6 E7mRNA检测阴性 建议保守治疗 密切随访 辅助诊断应用 手术后残端是否会残留病毒 复发的可能性多大 术后随访间隔是多久 确定依据是什么 术后随访常见问题 DetectionofResidual RecurrentCervicalDiseaseafterSuccessfulLEEPConization thePossibleRoleofmRNA HPVTest Leep锥切术成功后检测剩余 复发的宫颈疾病 mRNAHPV检测可能发挥的作用 14 70 的阳性切缘患者5 15 的干净切缘患者存在复发宫颈疾病的风险 E6 E7mRNA检测的随访 DetectionofResidual RecurrentCervicalDiseaseafterSuccessfulLEEPConization thePossibleRoleofmRNA HPVTest CurrentPharmaceuticalDesign2013 19 1450 1457 术后 mRNA 比mRNA 复发的几率更高 n 116 CIN患者经LEEP刀治疗后 E6 E7mRNA检测 辅助术后的后续处理 手术后 病理组织学诊断 E6 E7mRNA检测术后随访 细胞学 E6 E7mRNA检测 术后随访应用 病例分析 30岁已婚女性 2013 12 3体检 E6 E7mRNA 低度风险TCT正常 未进行干预性治疗 3个月复查 2014 3 25细胞学 ASC USE6 E7mRNA 高度风险 术后病检结果 宫颈1点 6点慢性宫颈炎 部分区域呈湿疣性改变 12点处小灶区域CIN2 LEEP 3 2012 9月 广东一家医院 一病人66岁TCTHSIL E6 E7mRNA检测阴性 TCT阅片老师认为那个标本报告为癌都不为过 所以进行活检 但活检结果为CIN1 2级 临床医生对活检不满意 并考虑到该病人年龄比较大 行使锥切后活检 活检结果CIN1 1 2012 3月 河北一医院对一LEEP术后45岁病人加做E6 E7mRNA检测 发现拷贝值为2万多 两周后重新取样检测 发现E6 E7mRNA检测仍有一万多拷贝 于是重新取样活检 发现切缘为CIN3级 2 2012 7月浙江余姚市一医院 一病人HPV检测阴性 TCT检测正常 E6 E7mRNA检测一万多拷贝 主任对该检测结果质疑 对该病人进行活检 病理结果CIN2 3级 病例 主要内容 1 报告解读及处理建议 3 阴道镜 活检 如无病变 半年后复查E6 E7mRNA 如E6 E7mRNA 查细胞学 细胞学 ASC US 阴道镜检 如E6 E7mRNA 半年后查E6 E7mRNA 细胞学 阴道镜 活检 无病变 严密随访 CIN2 相应手术治疗 E6 E7mRNA 6个月复查细胞学及E6 E7mRNA检测 E6 E7mRNA 6个月复查细胞学 ASCUS或E6 E7mRNA 建议积极处理 如冷冻 电灼或LEEP 报告单解读 阴性 报告单解读 阳性 取样方法 一 细胞样本 二 组织样本 石蜡切片 厚度3 5um切片4 10片 宫颈