PCR引物流程设计详解.doc

资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除PCR引物设计流程详解本文目的：复制出IL-4基因片段一、 查找基因序列1、 进入NCBI主页，下拉选框选择Nucleotide，在搜索栏输入要查找的目的基因，即IL-4，点击搜索2 、在搜索结果选择灵长类（Homo sapiens）2、 在灵长类IL-4基因中选择需要的mRNA序列3、 查看基因的相关信息外显子区域CDs区域4、 点击FASTA格式，并将序列保存到文档二、 使用primer premier 5.0设计引物1、 建立新文件，将所得的序列复制进输入框内2、 点击搜索按钮，搜索引物3、 设置引物设计参数（因为在之前查找基因序列的时候获知，外显子区域分别为：1-200、201-248、249-425、426-618，又知在引物设计时引物位置最好跨越一个内含子，PCR产物长度通常为100-150bp，故设定上游引物位置为201-248，下游引物位置为249-425，产物长度为100-150bp）4、确认条件后，显示搜索结果4、 双击选中得分最高的引物查看引物情况（上图为上游引物情况，下图为下游引物情况）5、 将设计的上下游引物复制出来，保存到文档中三、 使用oligo 6.0对设计的引物进行评价1、 建立新文件，将从cnki上获得的cDNA复制进输入框，并点击accept接收2、 接收后显示出该序列的相关信息3、 点击edit按钮录入用primer设计的上游引物，每一次输入新数据后都需要点击accept按钮接收4、 同理，录入下游引物5、 分析上下游引物二聚体形成情况6、 分析上下游引物发卡形成情况7、 分析上下游引物GC%8、9、 （一）创业机会分析检测上下游引物与PCR模板其它位置错配情况2、传统文化对大学生饰品消费的影响三、主要竞争者分析加拿大公司就是根据年轻女性要充分展现自己个性的需求，将世界各地的珠类饰品汇集于“碧芝自制饰品店”内，由消费者自选、自组、自制，这样就能在每个消费者亲手制作、充分发挥她们的艺术想像力的基础上，创作出作品，达到展现个性的效果。上海市劳动和社会保障局所辖的“促进就业基金”，还专门为大学生创业提供担保，贷款最高上限达到万元。因此不难看出，自制饰品在校园里也大有市场所在。对于那些走在流行前端的女生来说，捕捉新事物便捕捉到了时尚与个性。10、 分析PCR整体情况四、五、 新材料手工艺品。目前，国际上传统的金银、仿金银制成饰品的销售在逐步下降，与此形成鲜明对比的是，数年以前兴起的崇尚然风格、追求个性的自制饰品-即根据自己的创意将各种材质的饰珠，用皮、布、金属等线材串出的品，正在各国的女性中大行其道。引物特异性检验（primer blast）1、 进入NCBI主页，并选择blast300元以下918%2、 选择primer blast“碧芝”隶属于加拿大的公司。这家公司原先从事首饰加工业，自助首饰的风行也自西方，随着人工饰品的欣欣向荣，自制饰品越来越受到了人们的认同。年碧芝自制饰品店在迪美购物中心开张，这里地理位置十分优越，交通四八达，由于是市中心，汇集了来自各地的游客和时尚人群，不用担心客流量问题。迪美有多家商铺，不包括柜台，现在这个商铺的位置还是比较合适的，位于中心地带，左边出口的自动扶梯直接通向地面，从正对着的旋转式楼拾阶而上就是人民广场中央，周边、条地下通道都交汇于此，从自家店铺门口经过的的顾客会因为好奇而进看一下。3、4、 4、“体验化” 消费在输入框内输入模板序列和上下游引物，并设定对比数据库，点击get primer进行