高中生物 1.1.1 微生物培养基的配制同步课件 苏教版选修1.ppt

第一章无菌操作技术实践 第一章无菌操作技术实践 第一节微生物的培养和应用 一 微生物培养基的配制 学习导航1 掌握培养基的用途和种类 重点 2 能区别消毒和灭菌 会运用常用的消毒 灭菌方法 难点 3 了解培养基的配制过程及培养基的配制原则 重点 繁殖 代谢产物 天然培养基 2 按物理状态可分为液体培养基 半固体培养基和 培养基 是最理想的凝固剂 3 按功能可分为基础培养基 加富培养基 和鉴别培养基 培养基中加入链霉素 即可达到抑制 的生长 将 分离出来 培养基中添加 能区分大肠杆菌和产气肠杆菌 固体 琼脂 选择培养基 细菌和放线菌 真菌 伊红 美蓝 1 1 天然培养基取材便利 营养丰富 配制简便 实验结果的重复性好 2 各种培养基尽管配方不同 但一般都有水 无机盐 碳源 氮源和生长因子 3 利用无氮培养基可筛选出固氮细菌 这属于鉴别培养基的应用 4 液体培养基 半固体培养基及固体培养基的主要区别在于是否加入琼脂及加入的多少 判一判 二 消毒与灭菌 温和 病原微生物 营养细胞 强烈 干热 湿热 高温灭菌是利用高温的致死作用 使微生物的蛋白质和核酸等重要的生物大分子发生不可逆转的变性 你知道高温破坏的是蛋白质的哪一结构吗 提示 高温使蛋白质内部的氢键断裂 从而破坏其空间结构 但并不破坏肽键 想一想 三 细菌培养基的配制过程1 配制过程配制培养液 分装 包扎 2 几种天然有机营养物质的主要成分 调节ph 灭菌 搁置斜面 水溶性糖类 有机氮化合物 3 细菌 放线菌 真菌生长的最适ph分别为 维生素 6 5 7 5 7 5 8 5 5 0 6 0 2 1 培养基调节合适的ph后就可以接种使用 2 牛肉膏只能为微生物提供碳源和氮源 3 制备细菌培养基操作顺序为配制培养液 调节ph 灭菌 分装 判一判 特别提醒判定培养基的类型及所培养微生物的生活方式的方法 培养基中是否含有有机物 若有 则培养的微生物为异养型微生物 若无 则培养的微生物为自养型微生物 是否含有琼脂 若有 则该培养基为固体培养基 是否含有一些特殊物质 如含有青霉素 高浓度盐等 用于抑制不需要的微生物的生长 而促进所需微生物的生长的培养基为选择培养基 如含有伊红 美蓝等 用于区分不同微生物种类的培养基为鉴别培养基 根据各类微生物的形态结构特点和新陈代谢类型 利用选择培养基和鉴别培养基 结合显微镜镜检 以及菌落特征 可以把混杂在一起的大肠杆菌 硝化细菌 乳酸细菌 酵母菌 金黄色葡萄球菌 圆褐固氮菌分离开来 下面是分离筛选的方法步骤 请根据各个步骤的条件 填写空格中的内容 首先配制一系列不同性质的固体培养基 然后进行高温灭菌 再将上述微生物的混合液分别接种到各种培养基上培养 1 用无氮培养基可筛选出 2 用不含有机碳源的选择性培养基可筛选出 3 酵母菌的筛选需要在常规培养基中另加入 4 用加了较高浓度nacl的培养基可选择出 或者根据菌落的颜色呈现 色 将其挑取单独培养 5 利用伊红 美蓝培养基培养混合菌 菌落呈 色并带有金属光泽的是 挑取该菌落单独培养 结合显微镜镜检和进一步用伊红 美蓝培养基鉴别来确定 6 在无氧环境下培养混合菌 可以生长 加入一定浓度的乳酸 使培养基ph充分降低 可抑制 微生物的生长 利用菌落特征 结合显微镜镜检 选取生长优势的菌落 即可分离出 解析 若培养基中无氮 则凡是不能自生固氮的微生物均不能生存 题中所列微生物中 只有圆褐固氮菌能固氮 因而无氮培养基可选出该菌 若用不含有机碳的培养基则可选出自养型微生物 真菌的筛选可在培养基中加入青霉素 高浓度nacl可选出耐盐微生物 如金黄色葡萄球菌 用伊红 美蓝培养基可鉴定大肠杆菌 在无氧环境中 厌氧型及兼性厌氧型微生物才能生长 需氧型微生物将被抑制 答案 1 圆褐固氮菌 2 硝化细菌 3 青霉素 4 金黄色葡萄球菌桔红 金黄 5 绿大肠杆菌 6 大肠杆菌 乳酸细菌 酵母菌大肠杆菌和酵母菌乳酸细菌 1 在培养微生物的培养基中加入某些物质能分离出所需的微生物 下列选项中 前者是在培养基中加入的物质 后者是能被分离出的微生物 其中正确的是 a 氢氧化钠 酵母菌b 盐酸 放线菌c 适量的青霉素 霉菌d 适量的伊红 美蓝 大肠杆菌 变式训练 解析 选c 氢氧化钠 盐酸分别为强碱 强酸 酵母菌和放线菌都不能生存 加入伊红 美蓝的培养基是用来鉴定大肠杆菌 并不能分离大肠杆菌 适量的青霉素对原核生物有抑制作用 对真核生物的生命活动并不影响 1 营养要素微生物的化学组成与其他生物大体相同 也是由c h o n p s等元素组成 其中c h o n占细胞干重的90 以上 这些元素主要来自外界环境中的各种无机化合物和有机化合物 这些化合物归纳成碳源 氮源 生长因子 无机盐和水这五大类营养要素 特别提醒 对异养微生物来说 含c n的化合物既是碳源 也是氮源 即有些化合物作为营养要素成分时并不是单一方面的作用 有些微生物需添加特殊营养物质 原因是它们自身缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限 2 配制原则 1 目的要明确 根据微生物的种类 培养目的等 如培养基可由简单的无机物组成 生产用培养基内可加入化学成分不明确的天然物质 而分类 鉴定用培养基内必须加入已知化学成分的物质 2 营养要协调 注意各种营养物质的浓度和比例 3 ph要适宜 各种微生物适宜生长的ph范围不同 如细菌 放线菌和真菌的最适ph分别为 6 5 7 5 7 5 8 5和5 0 6 0 2012 盐城高二检测 分析有关微生物的资料 回答问题 1 1982年澳大利亚学者从胃活检组织中分离出幽门螺杆菌 幽门螺杆菌的遗传物质集中分布的区域称为 2 如图4支试管分别代表4种微生物在半固体培养基 琼脂含量3 5g l 中的生长状态 其中 号试管代表幽门螺杆菌的生长状态 由图判断 该菌在 条件下不能生长 3 下表是某培养基的配方 将幽门螺杆菌接种到ph适宜的该培养基中 置于37 下培养一段时间后 在该培养基中幽门螺杆菌的数目比刚接种时 主要原因是 4 幽门螺杆菌形态如图所示 该菌在人体中可引起胃溃疡等胃部疾病 幽门螺杆菌生长的最适ph为6 7 人体胃腔内ph在1 2之间 但胃黏膜的黏液层靠近上皮细胞侧ph为7 4左右 若幽门螺杆菌随食物进入胃腔 结合其结构特点以及能导致胃溃疡的特性 推测该菌在胃内如何存活 思路点拨 本题主要考查微生物培养的相关知识 解答本题应明确以下几点 了解幽门螺杆菌的生活习性 了解培养基的营养成分组成 区别原核生物和真核生物 解析 1 幽门螺杆菌为原核生物 没有核膜包围的细胞核 遗传物质集中在拟核内 2 幽门螺杆菌生活在半固体培养基的中部 说明它不能生活在氧气浓度过高或过低的地方 3 培养基中缺乏氮源 幽门螺杆菌不能正常生活 数量会减少 4 幽门螺杆菌进入胃腔后 可以先依靠鞭毛运动至ph较高处缓冲 然后分泌蛋白中和胃酸 提高ph 以便继续生存和繁殖 答案 1 拟核 核区 2 氧气浓度过高或过低 3 少缺少氮源 缺少氮源和生长因子 4 幽门螺杆菌进入胃腔后 首先依靠鞭毛运动至ph较高处缓冲 然后分泌蛋白中和胃酸 提高ph 以便继续生存和繁殖 变式训练2 微生物在生命活动过程中 需要不断从外界吸收营养物质 下列有关微生物营养物质的叙述 正确的是 a 不同种类的微生物 对碳源的需要情况差别不大b 无机氮源不能为微生物的生命活动提供能源c 除水以外的无机物仅提供无机盐 d 蛋白胨可以为微生物的生命活动提供碳源 氮源 生长因子解析 选d 异养型的微生物需要有机物作碳源 自养型微生物需无机物作碳源 无机物nh3不仅能为硝化细菌提供能量 还能作为其氮源 不仅能为其生命活动提供无机盐 还能调节ph等 故前三项均错 蛋白胨可为微生物提供碳源和氮源 水解后的氨基酸还可为微生物提供生长因子 下面对发酵过程中灭菌的理解不正确的是 a 防止杂菌污染b 消灭杂菌c 培养基和发酵设备都必须灭菌d 灭菌必须在接种前 解析 灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节 a项所述是灭菌的目的 因为发酵所用的菌种大多是单一纯种 整个发酵过程不能混入其他微生物 杂菌 所以是正确的 b是错误的 因为灭菌的目的是防止杂菌污染 但实际操作中不可能只消灭杂菌 而是消灭全部微生物 c是正确的 因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌 发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的 d也是正确的 灭菌必须在接种前 如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死 答案 b 变式训练3 高温灭菌的原理是 a 每种微生物生长的最适温度都是一定的b 微生物对于高温环境不适应c 高温破坏了微生物细胞内的蛋白质结构 从而使其失去侵染性d 高温降低了环境中氧的浓度 解析 选c 蛋白质是生物体生命活动的承担者和体现者 核酸可控制生物体的代谢活动 高温可使蛋白质和核酸变性失活 从而影响微生物的生命活动 操作与实践 细菌培养基的配制 问题与探究 1 培养基灭菌后 为什么需要冷却到50 左右时 才能用来搁置斜面或倒平板 你用什么办法来估计培养基的温度 提示 琼脂的凝固点为40 温度太高易使培养皿破裂 低于40 培养基已凝固 倒不出 所以培养基灭菌后 需冷却到50 左右时才能用来倒平板 可以用手触摸盛有培养基的试管 感觉试管的温度下降到刚刚不烫手时就可以进行倒平板了 2 为什么需要使试管口通过火焰 提示 通过灼烧灭菌 防止试管口的微生物污染培养基 3 为了能彻底灭菌 在操作过程中应注意哪些事项 提示 使用高压蒸汽灭菌锅时 加压之前一定要把原先的空气排尽 注意恒温灭菌 同时要注意高压蒸汽灭菌锅的压力 100kpa 温度 121 和灭菌时间 20min 例题 下表为牛肉膏蛋白胨培养基的成分表 据表回答相关问题 1 蛋白胨在培养基中的主要作用是 2 若用表中成分材料配制观察金黄色葡萄球菌菌落状况的培养基 还需要添加的成分是 3 培养基配制好时 分装前应进行的工作程序是 4 从配制培养基直至接种培养 所采用的预防杂菌感染的方法是 5 对培养基进行搁置