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Imagej对SDS PAGE灰度分析定量蛋白浓度 朱伟伟20180319 每个泳道对应的数值为点样体积 l 制备所有样品的时候蛋白溶液和2 loadingbuffer的体积比均为1 1 SDS PAGE图像 可以用相机或光密度扫描仪成像 作为标准样品的蛋白最好和待测蛋白的条带大小一致 用Bradford的方法测得标样的浓度 然后把标样的浓度调成300 g ml 注意事项 一般用SDS PAGE灰度分析的方法检测蛋白浓度 其上样量不宜过大 条带太黑容易过曝 导致定量结果不准确 检测结果会小于实际的蛋白浓度 1 打开imagej把SDS PAGE图片拖到红色箭头所指区域 2 单击image Type 8 bit转换成灰度图像 3 单击process subtractbackground会出现左图的界面 勾选lightbackground和preview 选择合适的像素值 在此一30 0pixels为例 单击OK 4 方框工具选择并画出第一条永道 单击analyze gels selectfirstlane也可以用快捷键 Ctrl 1 4 方框工具选择并画出第一条永道 单击analyze gels selectfirstlane也可以用快捷键 Ctrl 1 会出现左图界面 点击OK 并在图上画出第一条条带 5 单击analyze setmeasurements出现下图界面 勾选Area和meangrayvalue单击OK 7 选好条带以后按住Ctrl m出现一个文本 如上图所示 然后把鼠标移到黄色方框的中心 按住鼠标 把方框拖到下一个条带 然后按Ctrl m 文本中出现第二条带的面积和平均灰度值 以此类推 8 新建一个Excel 把文本框内的数据复制到表格 计算绝对灰度 255 灰度平均值 同时标出点样体积 理论上 标样的绝对灰度值的比值和点样
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