H-ClassXEVO TQD 用户操作练习手册.docx

H-Class/Xevo TQD 用户操作练习手册Waters 客服电话座机拨打：8008202676 手机拨打：4008202676电子邮箱：china_一仪器的原理H-Class 四元泵示意图H-Class 四元泵比例阀脱气包放空阀低压混合器Seal wash 泵初级泵蓄集泵过滤器H-Class 自动进样器Sample Manager-FL示意图Sample Manager-FL样品盘盘号选择钮进样六通阀样品注射器Sample Manager FTN示意图Sample Manager FTN样品盘盘号选择钮进样六通阀样品注射器Xevo TQD示意图二软件的基本操作与实验的一般流程打开Masslynx软件，调用已有的项目或建立新的项目（project）调用已有的项目1. 在桌面上双击Masslynx图标，打开Masslynx软件2. 单击File Open Project,出现如下对话框3. 单击Yes选择合适的路径和合适的项目，单击OK 即可建立新项目1. 在桌面上双击Masslynx图标2. 单击File Project Wizard3. 出现对话框“When changing to a new project, some services are automatically closed down, Continue?”,单击Yes4. 出现如下对话框输入项目名称（project name）,对项目的描述（Description）,路径（Location），在路径中建议在C盘下新建一个文件夹，并命名为MS DATA，所有新建项目都放在这个文件夹中，单击Next5.选择create using existing project as template,并以C:MasslynxD为模板单击Finish注意：一般建议以当前PROJECT或DEFAULT或工程师安装仪器的Installation Project为模板建立新的PROJECT，一般不建议建全新的PROJECT。三准备液相准备液相的一般流程：准备流动相 准备样品 灌注二元泵 灌注自动进样器 建立液相方法 平衡系统准备流动相 所有流动相都要求经0.22um过滤器过滤，建议使用预先过滤好的甲醇，乙腈，常用的有MERCK，FISHER等品牌，纯水机应安装有0.22um过滤器。更详细的信息，可参考相关的操作员概述与维护手册及预防及控制LC及LC/MS系统中的污染 所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水和缓冲液一般使用不得超过二天。缓冲盐一定要是可挥发的，一般浓度不超过10mM。常用的缓冲盐有：甲酸，乙酸，甲酸铵，乙酸铵，氨水等。使用所能得到的最高等级的缓冲盐。准备样品 所有样品都要用0.22um的膜过滤。启动系统1. start up system-灌注系统在Masslynx 主界面，单击MS Console,进入UPLC交互显示界面，点击control start up system选择QSM选择A,B,C,D，seal wash, 时间设为3分钟，选择SM选择 wash solvent 为20s, purge solvent 为5 单击 Start 开始灌注. 3. 设定流速，平衡液相在Masslynx主界面，单击Inlet Method 图标，打开液相方法编辑窗口单击status 单击ACQUITY Additional Status ，进入质谱交互控制台注意：如在上述界面出现红灯，表示有错误产生。将光标移到红灯，会出现关于该故障的详细描述。下拉Tools菜单，按Reset Communication, 一般问题即可解决，全部显示为绿灯。单击A 或B或 设定流速的位置，出现流速、比例设定对话框设定液相流速与比例，单击对勾，如果后面要做调谐，可设定流速0.2-0.5ml/min（与液相方法流速一致）,有机相与水相的比例为50:50(注:此时如果质谱氮气未打开，可先将质谱阀流路切到废液，再开液相流速。)四准备质谱1. 计算化合物单同位素质量数在进行实验前，如有必要，可先根据化合物的分子式计算出分子量。在质谱实验中，一般需要用到的分子量为单同位素分子量，但试剂说明书等许多地方给出的是平均分子量，请注意差别。Masslynx主界面 单击Tools Molecular Weight Calculator输入化合物的分子式（大写-注意Cl、Br等正确的输入方法）注意选单同位素MonoisoIon Mode:离子化模式，+ve 正离子，-ve 负离子单击Calculate，带不同电荷的离子的质荷比出现在左下窗口。2. 用Intellistart 开始调谐a. 在Masslynx 主界面单击MS Tune图标，打开调谐窗口b. 单击 API Gas 图标 打开氮气，c. Ion Mode Electraspray+（ES+） 或 Electrospray-（ES-）c. 单击 打开高压d. 设定液相流速如：0.2ml/min, A1： B1（水：乙腈）比例为50:50e.选择MS Mode 图标 f. 把调谐液放入A（或B）号位（注: 调谐液需要较高浓度，视化合物响应，起始浓度可在50-300ppb左右，响应值在e6-e8之间左右较好，浓度过高会导致系统严重污染)g. 选择Fluidics，单击Purge 图标，purge A 瓶中的调谐液 Start infusing 开始进样 Refill the syringe 重新灌满注射器 Purge syringe 灌注注射器Purge 结束，选择Valve Position 为 Combined 模式h. 点击进样，开始进样设定Function 为MS1 scan， Mass 为计算出的质量数，span 为5， ，直到离子的响应比较稳定i. 保存调谐文件：File Save Asj.在Masslynx主界面，选择Ms Console Xevo TQD MS Detector k.选择IntelliStartl. 选择 Sample Tune and Develop Method ，ES+ 或 ES-m. 单击 Start 图标，出现Intellistart 自动调谐编辑窗口，选择 化合物名称化合物的分子量或分子式电离方式调用保存的调谐文件输入MRM方法的文件名自动调谐报告的文件名锥孔电压范围碰撞能量范围用combine模式蠕动泵流速瓶位置单击Start，开始自动调谐调谐成功，会有绿勾出现查看intellistart 报告3. 查看intellistart 中自动生成的质谱方法：从MassLynx 主窗口，单击 MS Method出现MS Method 编辑对话框选择File open选择Intellistart 中保存的质谱方法的文件, 单击open打开双击方法，打开双击打开方法，选择Auto Dwell, 单击OK， File Save As, 保存质谱方法文件五. 建立液相方法在液相方法编辑窗口（Inlet Method），单击InletSolvent:输入流动相名称Pressure:系统压力限Seal Wash：泵密封垫清洗间隔时间Gradient：梯度单击 Autosampler 图标 打开自动进样器编辑窗口Sample loop option：进样方式的选择Wash solvent：洗针液名称和体积：弱洗通常为强洗体积的三倍Column:柱温箱温度，范围：比室温高5度-90度，常用30-50度Sample:样品室温度，范围：4C-室温单击OK, 选择File Save As 保存方法。单击 Load Method ，平衡液相系统。六 建立样品列表1. 在Masslynx 主窗口，选择 File New 建立一个空白的样品表Sample list或打开一个已有的SAMPLE LIST。Sample list的使用与Windows EXCEL表格类似。2. File Name栏：输入文件名， 如training 001.建议以3位数字结尾。3. File Text栏：输入样品信息，如送样单位名称，样品编号，或其他信息。 4. MS File 栏：选择质谱方法5. Inlet File栏： 选择液相方法6. Bottle栏：输入样品瓶的位置 7. Inject Volume栏：输入进样体积8. 可右键 Add, 增加样品表的行数9. 保存样品表：File Save As，输入样品表名称，将样品表保存在项目的sampledb文件夹下，建议使用有规律的命名， 如检测项目或操作人加年月。如Melamine201212 01七数据采集和处理1. 选中要采集的样品，单击Run Start ,选择Acquire Sample Data only, 2. 单击OK 开始进样并采集在采集过程中，可查看色谱图3. 在采集过程中，可查看色谱图，点击 Chromatogram 窗口 ，点击 Real-time Update icon. 如果不能见整个TIC图，单击 Default Range 图标 如果方法中包括多个通道，可通过Display Mass 查看如果方法中包括多个检测器或多个Function,可通过Display TIC 查看处理多个Function的数据如果质谱方法中有多个Function，如下图，有三个Function如想看第二个Function，MS Scan 的数据1. 在色谱图窗口，点击 Display TIC，选中 MS Scan 3. 选择 Add trace ，单击 OK. 4. 选择 Process Combine spectra. 5. 分别用右键输入信号和本底噪音. 6. 单击 OK. 得到 Daughter Scan的质谱图单击 Process Smooth ，单击 OK. 八Targetlynx step by step外标法在Masslynx 主页面单击Targetlynx/Edit method，出现定量方法编辑对话框单击新建方法图标，新建一个定量方法单击Add new compound (添加新的化合物)图标，添加一个新的化合物， 单击菜单栏update,选中Quantitation Ion 和Compound Name（前面打勾）在Masslynx 主页面，打开中等偏下低浓度标准品的色谱图，Display/Mass选出要定量的化合物的离子对，一般强度高的用来做为定量离子，如在此图中，我们选142.1 94作为定量离子，同一个化合物的另一个离子对（142.1124.9）则作为确证离子. 离子强度用鼠标右键在定量离子对色谱图上从预期的积分开始位置拉到预期的积分结束位置，则compound name, Acquisition Function Number, Quantification Trace,Predicted Retention Time和Retention Time window 将自动输入到定量方法中。注意：在色谱图上拉的时候，一般拉的位置要以色谱峰的峰尖左右对称，拉的宽度要超过峰的起点和终点，如下图所示单击工作曲线列表，到工作曲线设置页面，填入Concentration Units:浓度单位，例如ng/ml, ug/kg，ppb, ppm等Concentration of Standard: Level Level：根据样品表中的指定选择，一般为Conc.APolynomial Type 选择 Linear. （可根据自己行业的规定）Calibration Origin_可选项为：exclude(排除原点)，include(包含原点)，force(强制过原点)Weighting Function(权重)_1/x （根据自己行业规定）Propagate Calibration Parameters_如果所有的化合物均用相同的工作曲线的参数，选Yes打开积分参数列表， 选中Apex Track Enabled （打勾，YES），Integration Window Extent 输入2，选中Propagate Integration Parameters (打勾)，如果色谱峰并不是很对称的色谱图，可先在色谱图上先设定参数，积分，好积分参数满意之后，process/integrate/copy ,在Targetlynx 方法中Edit/Past 就可将其粘贴到Targetlynx 方法中建议用Apex Track 积分方法，Smooth 方法建议用smooth iteration 1,smooth width 2用同样的方法依次输入其他化合物的信息：保存方法：File/Save As, 保存到当前项目的MethDB 文件夹中正确的samplelist 表格模板，除了前面进样时的选项之外，还要有sample type,ConA. 选中要处理的行，单击Process Samples，出现下图的对话框，确保选中Integrate sample calibrate Standard Quantify Sample,选择刚才编辑的Targetlynx 方法，单击OK出现定量结果对话框可根据自己的需要，用鼠标右键，Chang Column Order 来增加或减少Summary中的选项。附件：建立质谱方法在质谱方法中，除了最常用的MRM，可能还需要建立类型的质谱方法建立MS Scan的方法1. 在Masslynx主窗口中，单击MS Method 图标，打开质谱方法编辑对话框点击Functions MS Scan 或直接点击 MS Scan 按钮，设定各个参数 Mass(m/z)输入扫描质量范围Time输入时间窗口Ionization Mode选择电离模式Data质谱数据模式,一般选择Continnum轮廓图或Centroid棒状图Scan Time为扫描设定质量范围的扫描时间.通常使用5000Da/s的速度,结合扫描范围设定扫描时间.Cone Voltage通常设定为20-30V2. 单击OK，确保MS SCAN 已经加入到质谱方法中建立Daughter Scan的方法1. 选择 Functions Daughter Scan 打开Daughter Scan编辑对话框2. 单击OK，确保Daughter Scan 加入到质谱方法中3. 保存质谱方法：File Save As液相检测器的方法编辑ACQUITY TUV DetectorACQUITY PDA DetectorACQUITY FLR DetectorACQUITY ELS Detector开机次序：有关的开关机次序可参考相关的操作手册及在线帮助文件。开机前要确保环境温度湿度供电符合要求。- 完整开机顺序：- 确定MS及其它仪器电源电缆已连接打开计算机电源 等待windows完成正常启动 打开UPLC自动进样器电源 打开UPLC泵电源打开UPLC检测器电源（如果需要） 打开质谱电源 等待约3-5min 打开Masslynx软件 在masslynx主界面 Mass Tune Vacuum pump 查看真空状态 1.xe-4备注：根据关机时间的长短不同，仪器到达真空的时间会有差异。如关机时间较长，一般建议抽真空4小时以上，以全面保障仪器的性能。- 日常开机顺序：液相：灌注流动相和洗针液质谱：开气（开氮气）、电（开高压 operate）、流动相（设置流动相流速和比例）关机程序-日常关机： 完成实验后，应根据色谱柱的使用说明或维护指南，对色谱柱进行冲洗保存。一般如果流动相中有缓冲盐必须先将缓冲盐用高水相冲洗掉，再从高水相过渡到高有机相（如95%以上乙腈），冲洗10倍以上柱体积，停流速。 关质谱：关高压（STANDBY） 等待去溶剂气温度降低至100度以下 关氮气。- 彻底关机 先完成日常关机 泄真空: tune page vacuum vent 当涡轮分子泵转速降到40以下时， 仪器会自动关闭机械泵电源。 退出软件，计算机关机。 关质谱电源 关所有UPLC电源。 如果有UPS，可关闭UPS电源。 -使用 ELSD检测器的注意事项 漂移管温度：通常全水50度，如果有不好挥发的样品