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化验知识培训 粗蛋白测定 要点一 盐酸的配制 标定1 配制 0 1M mol L 取分析纯HCL8 5mL加蒸馏水使成1000ml 摇匀即可 半微量发需要根据所用定滴管的量程来确定盐酸的量 2 标定 精密称取无水碳酸钠基准物 在270 300 灼烧至恒重 0 1克左右 准至0 1毫克 加入蒸馏水50ml使之溶解 加混合指示剂10滴 用盐酸标准溶液滴定至暗红色 微沸2分钟 冷却至室温 一般用水冷 继续滴定至溶液呈暗红色 需做5 6个平行 相对误差 同时做空白试验 3 计算 盐酸标准溶液浓度V1 HCL液用量 V2 空白试验HCL液用量 m 无水Na2CO3的重量 M 无水碳酸钠的摩尔质量数 单位是克每摩尔 M 1 2NaCO3 52 994 推荐盐酸与碳酸钠的对照表 4 能否用无水硫酸铵做标定 无水硫酸铵 加热280 分解 只能检验不能标定 作为基准物应具备哪些条件 1 纯度高 在99 9 以上 2 组成和化学式完全相符 3 稳定性好 不易吸水 不易被空气氧化 遇热不易分解 4 摩尔质量较大 称量多 称量误差可减小 二 滴定管的使用1 清洗 标准 管内充满水再放出时 内壁全部被均匀润湿而不挂水珠 无明显油污的滴定管 可直接用自来水冲洗 若有油污 则用铬酸洗液洗涤 也可用KOH乙醇溶液洗涤 2 检漏与涂凡士林将滴定管内装满自来水 排出滴定管出口管内的气泡 关闭旋塞 夹在滴定管架上 直立静置约2min 若无水滴漏下 再将旋塞旋转180 静置检查 若前后两次均无水渗出 旋塞转动也灵活 即可使用 若发现漏水更换新的滴定管 推荐使用天波滴定管 涂凡士林的方法 取下旋塞小端的橡皮圈 取出旋塞 用滤纸擦干 同时也将旋塞套内擦干 随后 用手指将油脂涂在旋塞的两头 除旋塞孔一圈不涂外 在整个曲面上涂一均匀薄层 然后将旋塞插入旋塞套中 向同一方向不断旋转旋塞 直到旋塞全部呈透明状 最后 抵住旋塞柄 在小端套上橡皮圈 堵了如何处理 3 如何处理半滴微开旋塞 使液滴悬挂在管尖 关闭旋塞 用锥形瓶颈内壁接触液滴引下 再用少许蒸馏水吹洗锥形瓶内壁 使附着的溶液全部流下 4 读数 1 装入或放出溶液后 必须等1 2min 待附着在管壁上的溶液充分流下后再读数 2 读数时 滴定管可以夹在滴定管架子上 也可以取下 用手的前三指持管子上端无刻度处进行读数 但均应注意使滴定管保持垂直 3 对于无色或浅色溶液 读数时 应读取弯月面下缘实线最低点相切处的刻度 对于深色溶液 看不清弯月面下缘时 可读视线与液面两侧的最高点呈水平处的刻度 注 每次读数前要检查管内壁是否挂水珠 管尖是否有气泡 管出口尖嘴处是否悬有液滴 三 空白1 空白需要经常做2 放在样品之前做 把细节处理好是一件很困难的事情 小结 仪器的标定 一 电子天平校准因存放时间较长 位置移动 环境变化或为获得精确测量 天平在使用前 一般都应进行校准操作 先把天平调水平 开机预热30min 轻按CAL显示器出现CAL 200 闪烁 此时 把200g校准砝码放上称盘 显示器出现 等待状态 经几秒名钟后显示器出现200 0000g 拿去校准砝码 显示器应出现0 0000g 如若显示不为零 则再清零 再重复以上校准操作 注意 为了得到准确的校准结果最好反复以上校准操作二次 二 酸度计校准测pH值时1开机预热30分钟 将 选择 钮拨至pH档 斜率 旋钮顺时针旋到底 温度 旋钮旋至溶液的温度值 2把用蒸馏水清洗过的电极插入pH 6 86pH 25 时的值 的标准缓冲溶液中 待读数稳定后调节 定位 旋钮至该溶液在当时温度下的pH值 当时温度下的pH值可查附录 3用蒸馏水清洗电极然后将电极插入pH 4 00或pH 9 18的标准缓冲溶液中 根据被测溶液的酸碱性确定选择那一种缓冲溶液 如果被测溶液呈酸性则选pH 4 00缓冲溶液 如果被测溶液呈碱性则选pH 9 18的缓冲溶液 待读数稳定后调节 斜率 旋钮至该溶液在当时温度下的pH值 当时温度下的pH值可查附录 记录 4重复步骤2和3直到不需要再调节二旋钮为止 5标定结束 一般情况下 在24h内仪器不需要再标定 测氟离子浓度时1将 选择 钮拨至电位档 2连接好参比电极和测量电极 并将电极放入旋转的蒸馏水中3更换蒸馏水3 4次 待电位值稳定在 370 时开始测标准和样品 维护 化验工作是一个动手能力很强的工作 最重要的是实验结果的准确度和重复性 小结 几个检测项目中可能出现的问题 问题一 酸度的影响 原理 用中性柠檬酸铵溶液提取枸溶磷 在酸性介质中 磷酸根与钼酸喹啉反应形成磷钼酸喹啉沉淀 用重量法测定枸溶磷含量 一 重量法测枸溶磷过程中的几个问题 中性柠檬酸铵溶液 溶解74g柠檬酸于300毫升水中 加69毫升氨水 在酸度计上用氨水调节PH值为7 0 用比重计测其比重为1 09 20 将溶液贮存于密闭的瓶中冰箱中冷藏备用 如长期使用 用前校正其酸度 问题二 用滤纸过滤 玻璃砂坩埚 孔径为5 15微米 以G来区分 滤纸快速 孔径为80 120微米中速 孔径为30 50微米慢速 孔径为1 3微米 问题三玻璃砂坩埚的清洗 氨水或者氨水溶液 二 粗纤维测定过程中的几个问题 一 原理 用浓度准确的酸和碱 在特定条件下消煮样品 再用有机溶剂除去可溶物 经高温灼烧扣除矿物质的量 所余量为粗纤维 它不是一个确切的化学实体 只是在公认强制规定的条件下测出的概略成分 其中以纤维素为主 还有少量半纤维素和木质素 问题一 溶液标定硫酸溶液 0 128 0 005 mol L 用无水碳酸钠标准溶液标定 有些地方使用的是氢氧化钠 氢氧化钠溶液 0 313 0 005 mol L 用邻苯二甲酸氢钾法标定 问题二 消煮器 有冷凝球的600mL高型烧杯或有冷凝管的锥形瓶 如果没有冷凝球 称取1g 2g试样 放入高型烧杯 加浓度准确且已沸腾的硫酸溶液200mL和1滴正辛醇 立即加热 使其在2min内沸腾 调整加热器 使溶液保持微沸 且连续微沸30min 注意保持硫酸浓度不变 加烧开的蒸馏水 保持硫酸溶液体积200mL 问题三 可否用滤纸 抽滤装置 抽真空装置 吸滤瓶和漏斗 滤器使用200目或260目不锈钢网或尼龙滤布 三 胃蛋白酶消化率测定过程中几个问题 一 原理脱过脂的试样 用温热的胃蛋白酶溶液 在恒温 持续不断地搅拌下消化16h 过滤分离不溶性残渣 洗涤 干燥 测定残渣的粗蛋白含量 同时 测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白含量 问题一 胃蛋白酶浓度 0 2 胃蛋白酶溶液 将6 1mL浓盐酸稀释至1000mL水中 溶液pHl 2 加热至42 45 加入2g活性为1 10000生化级胃蛋白酶 若活性不是1 10000 可使用活性1 3000生化级胃蛋白酶 不可使用非生化级胃蛋白酶 应注意胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶浓度应为每毫升20IU 并缓慢搅拌直至溶解 勿在加热板上加热胃蛋白酶溶液或配制时过热 临用前配制 问题二 脱脂 含脂肪小于1 可不脱脂 含脂肪1 10 建议脱脂 含脂肪大于10 则必须脱脂 问题三 丙酮的作用 当上层液体通过滤纸后 于瓶中加人15mL丙酮 震荡 丙酮和残渣流到滤纸上 再用一份15ml的丙酮进行洗涤 照上法振摇和倒出 检查瓶子 并用丙酮再次洗涤 当全部液体通过滤器后 用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次 并抽干 问题四 结果计算 X W1 W2 100 W1式中 X 一试样的胃蛋白酶消化率 W1 脱脂未酶解的原样品中粗蛋白的平均含量 W2 脱脂酶解后残渣中粗蛋白的平均含量 问题五 标准 鱼粉 85 肉骨粉 85 羽毛粉70 85 问题五 标准品的保存 丙二醛标准溶液易变质 需低温保存 有条件的可放在冰箱4 保存 没有条件的放在阴冷的地方 避免接触阳光或者存放在高温的地方 问题一 电位值的正负问题 有些酸度计显示正电位值有些显示负电位值 不影响结果 问题二 标准曲线的绘制和浓度计算公式 五 氟离子检测过程中的几个问题 问题三 氟离子选择电极和参比电极使用注意事项氟离子选择电极 1 氟离子选择电极在测定样品和标准溶液时 温度相同 磁力搅拌器转速相同 2 氟离子选择电极在使用时在去离子水中与饱和甘汞电极组成电池 电动势达 320后方能正常使用 3 在测量时 电极用蒸馏水清洗后 用滤纸擦干后再进行测量 4 氟电极用后建议用去离子水清洗至 320后干放 可以延长电极寿命 参比电极 1 参比电极在使用时电极上端小孔橡皮塞拔去 以防止产生扩散电位变化影响测试结果 2 电极内氯化钾溶液不能有气泡 以防止断路 溶液内应保留少许氯化钾晶体 以保证氯化钾溶液的饱和 3 当电极外部附有氯化钾晶体时 及时除去 六 氯离子检测过程中的几个问题 莫尔法滴定原理 指示剂K2CrO4滴定剂AgNO3 沉淀反应 测定的对象直接法 Cl Br 返滴定法 Ag Ag aq AgCl s 白色 2Ag aq Ag2CrO4 s 砖红色 问题一 酸度的影响 实际要求溶液的pH值6 5 10 5之间 2 发扬司法也需要调节溶液酸度 成品 有些原料颜色不好判断 七 挥发性盐基氮检测过程中的几个问题 问题一 碱液用1 氧化镁混悬液 挥发性盐基氮是指肉蛋白质在