中药吸入制剂---苏冰鼻吸贴的临床前研究.doc

史上最快最全的网络文档批量下载批量上传，尽在：/item.htm?id=9176907081史上最快最全的网络文档批量下载批量上传，尽在：/item.htm?id=9176907081中药吸入制剂-苏冰鼻吸贴的临床前研究 李孝栋1* 福建省青年人才创新项目(2005J045)和陈可冀院士基金项目(CKJ2007007)，联系人李孝栋: 药学博士, 从事中药新剂型和中药新药的研究, E-mail: 。 吴符火1 张凌燕2 陈燕1 叶蕻芝2 钟红斌3 金玉斌1 （1. 福建中医学院药学系药剂教研室 福州 350108; 2. 福建省中西医结合研究院 福州 3501083. 福建省闽侯仙健药物研究所 福州 350108）摘要：目的 完成中药新剂型-苏冰鼻吸贴的临床前研究；方法 利用GC-MS技术，确定鼻吸贴中挥发性物质的化学成分，并通过体内药动学试验对体内外化学成分进行比较；在此基础上，进行了抗缺氧试验、安全性评价试验以及体外释放度与体内吸收度的相关性研究，为建立合理可行的质量标准奠定基础。结果 体外药物成分含有苄基苯甲酸酯、苄基肉桂酸酯、冰片等，和方中苏合香、冰片成分一致。体内药物研究，冰片以原型药物形式入血产生疗效，其他药物转为代谢产物发挥作用。药效学试验结果表明具有较好的抗缺氧作用，体内外相关性和安全性也较好。结论：苏冰鼻吸贴的临床前研究结果良好，从冰片的血药浓度变化可知该制剂具有较好的速效、长效的作用，治疗心血管疾病的疗效确切，具有诱人的前景。关键词 中药吸入制剂；苏冰鼻吸贴；临床前研究鼻吸贴，又称为鼻吸芳香贴剂，是指挥发性的药物和适宜的基质混合后附着或涂抹于贴剂的一面，当贴剂的另一面贴于鼻子下方“人中”部位时，暴露于空气的药物以气体形式经鼻子吸入肺部发挥局部或全身治疗作用的一种吸入制剂。这里的贴剂与经典贴剂不同，不作为透皮吸收制剂，只利用贴剂粘胶层的粘性起附着作用。鼻吸贴具有明显的优点1，对心血管疾病、肺部疾病和鼻炎等疾病具有良好的治疗效果，本文对治疗心血管疾病的苏冰鼻吸贴进行了临床前研究。一、仪器与试药日本岛津GCMS-QP5050A型气相色谱-质谱联用仪，CLASS-5000数据处理系统；安捷伦Agilent 6890N气相色谱仪；旋转蒸发仪RE-52AA（上海亚荣生化仪器厂），KQ2200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），苏冰鼻吸贴（自制），冰片对照品（中检所），体外释放度装置（自制），XW-80A型漩涡混合器（上海医科大学仪器厂）；80-2型台式高速离心机（上海安亭科学仪器厂）；R200D天平（Sartorius, Germany）；家兔与小鼠（购自福建中医学院动物房），SD大鼠（购自上海斯来克公司，许可证号SCXK（沪）2007-0005，质量合格证号No.0044115），无水乙醇、甲醇等其它试剂均为分析纯。二、体内外化学成分的分析2.1 方法2.1.1 分析条件DB-5MS弹性石英毛细管柱（30m*0.25mm i.d*0.25m）；柱温：80C 5C/min 220C(保持15min)；载气：He，流速：1ml/min；进样口温度：250C；分流进样，分流比10：1。质谱条件：电子轰击（EI）离子源，电子能量：70eV；扫描范围：33u500u；GC-MS接口温度：230C；倍增器电压：1000V；NIST107谱库。按上述色谱分析条件，每次进样5l。2.1.2 体外分析样品的制备 称取0.71g苏冰鼻吸贴样品，摊薄后，加入50ml无水乙醇浸泡10分钟，再超声提取20分钟，过滤，滤液回收乙醇，残留部分用甲醇溶解于10ml量瓶内，甲醇定容，作为分析样品。2.1.3 体内试验过程取家兔3只，雄性，2kg左右，试验前禁食12h，将0.71g苏冰鼻吸贴贴在家兔鼻子下，分别在第0、0.5、1、1.5、2、3、4、5、6小时时间点耳缘静脉取血。血样离心，取上清液，作好标记，备用。2.1.4 体内血浆样品的制备分别取家兔空白血浆和血浆样品1至8号各300l，加入等量乙腈，旋涡混匀5min，超速离心5min（12000r/min），取上清液，再加等量氯仿萃取，旋涡混匀5min，超速离心使分层，取氯仿层，在水浴50条件下，氮气挥干，分别加100l氯仿复溶即得。2.2 结果2.2.1 体外样品中药物成分的分析体外样品经GC-MS测试和图谱验证，在前20个峰中，确定峰面积大、清晰度高的成分有苄基苯甲酸酯、冰片、18-去松香烷、苄基肉桂酸酯等，其中苄基苯甲酸酯、苄基肉桂酸酯和冰片分别为方中苏合香和冰片主要成分，与文献报道一致2。见图1、图2、图3和表1。图1: 鼻吸贴中成分的GC-MS总离子流图图2 冰片的离子流和质谱图图图3 苄基苯甲酸酯的MS图表1 苏冰鼻吸贴体外药物主要挥发性成分和含量CompoundBenzyl benzoateborneol18-NorabietaneBenzyl cinnamateContent(%)5.3782.43.441.482.2.2 体内样品中药物成分的分析 将家兔空白血浆和各自的血浆样品按上述GC-MS条件进行操作, 具体情况见图4、5、6。图4 血浆样品总离子流图图5 血浆空白总离子流图图6 血浆样品与血浆空白图谱在冰片处的放大比较图 通过GC-MS测试和图谱验证，体外众多成分中，在家兔体内除了冰片以原形结构被测出外，其余的化学成分均未能检测到，说明都转化为其它代谢产物了。三、苏冰鼻吸贴抗缺氧作用试验随机挑选10只重量相近的雄性健康小鼠，分给药组和空白组两组，每组各5只。给药组的5只小鼠每天20:00次日8:00放入一个装有药物的干燥器中，8点后再放入饲养笼中，正常饲养。空白组的5只小鼠每天20:00次日8:00放入一个没有药物的干燥器中，8点后再放入饲养笼中，正常饲养。一个月后，分别从给药组和空白组取出小鼠，放入同一个干燥器中，干燥器口用凡士林涂抹均匀，盖上盖，形成密闭的系统。观察并记录给药组和空白组小鼠停止呼吸的时间，结果见表2。表2 给药组和空白组小鼠的死亡时间名称给药组死亡时间（min）空白组死亡时间（min）第1只6439第2只6647第3只7259第4只12079第5只12090整个过程，给药组的活动明显增强，活动频率增多。经统计分析，给药组和空白组小鼠耐缺氧的能力具有显著差异（n0.01）。四、体内外相关性试验4.1 方法4.1.1分析条件：同第二项下1.1内容4.1.2总样溶液的制备：精密称取苏冰鼻吸贴内容物0.71g，将其整个置于25ml容量瓶中，用无水乙醇浸提并加至刻度定容，作为总样溶液。4.1.3冰片标准品溶液的制备：精密称取标准品冰片适量，用氯仿溶解，配得浓度为100g/ml的标准品溶液，备用。4.1.4 体外释放度试验操作 如图7所示，在三角锥形瓶内加入20ml 无水乙醇溶液，泵口朝向锥形瓶方向的插管内放置鼻吸贴，插管一头用具塞封掉，另一头插入液面下，在泵的吹力作用下，鼻吸贴内的药物以气体形式释放出来，顺着插管溶于无水乙醇溶液中。当取样时间到时，泵吹力停掉，迅速取下插管，将20ml无水乙醇溶液装入25ml量瓶内，同时，往锥形瓶内迅速加入新的20ml 无水乙醇溶液，插入插管即可继续试验，依次类推。具体取样时间为第0、10min、20min、30min、40min、50min、1h、2h、3h、4h、5h和6h，无水乙醇定容于25ml量瓶，作为样品进行测试。图8 体外释放度试验装置4.1.5 体内试验操作：同第二项下1.3和1.4内容4.2 结果4.2.1 体外释放度试验体外累积释放曲线结果见图9。图9 6小时体外累积释放度曲线图4.2.2 体内吸收度试验 从家兔各自的血浆样品中求出的冰片血药浓度数据，获得的体内累积吸收曲线见图10。图10 6小时体内累积吸收度曲线图4.2.3 体内外相关性 通过对6小时的体外累积释放率和体内累积吸收率作图，见图11，由图可知，体内外相关性良好，r=0.9973。五、安全性评价试验5.1 动物饲养：随机挑选80只重量相近的雌雄各半六周龄健康大鼠，分低、中、高剂量给药组和空白组，共四组，每组各20只。给药组的大鼠每天20:00次日8:00放入对应装有低、中、高剂量药物的干燥器内（每组4个干燥器，每个干燥器5只，雌雄分开放），同样，空白组的20只大鼠每天20:00次日8:00放入4个没有放药物的干燥器内，8点后将所有大鼠再放入饲养笼中，正常饲养。一个月后，杀死给药组和空白组的大鼠，进行凝血时间、血常规与生化测定、病理研究等项目的检测。5.2 结果 根据试验相关数据的分析，所有给药组的凝血时间、血常规与生化测定和空白组对应的数据无显著性差异。病理结果表明给药组安全性良好。六、结论与讨论GC-MS测试证明体外样品中苏合香的主要成分为苄基苯甲酸酯，冰片仍以原形形式存在。从总离子流图还可知存在较多其它的成分，因此，这些成分可作为体内药物分析的基础。体内空白样品和血浆样品的总离子流图比较，可知冰片仍以原形存在，可作为体内药动学的研究对象。而苄基苯甲酸酯等其它成分没有观察到，代谢为其他产物，具体是何产物，有待进一步试验验证。由三只家兔的体内药时曲线可知冰片浓度在0.5小时达到最大值且在6小时内保持一定的浓度，说明此剂型确实能够产生速效和长效的作用。但从冰片浓度迅速减小，说明冰片在体内消除迅速，不存在体内蓄积现象，与文献报道一致3。药效试验和安全性评价试验表明苏冰鼻吸贴具有较好的抗缺氧作用，安全性高。体内外相关性曲线说明体外累积释放度和体内累积吸收度相关性良好，但累积百分比偏小，有待于对药物基质进行进一步研究以提高体外释放度和体内吸收度。参考文献1 李孝栋, 张理平. 中药鼻吸芳香贴剂的应用前景. 福建中医学院学报, 2007, 17(4): 56-582 孙秀燕，吴建兵，王素娟. 气相色谱-质谱联用分析冠心苏合丸中的挥发性组分. 色谱, 2002, 20(4): 378-380.3 陈群，李士敏，王玮. GC-MS法同时测定小鼠血浆中冰片和丹皮酚浓度. 药物分析杂志, 2006,26(5): 592-594Preclinical studies on Subing nasal respiratory patches, an inhaled preparation of traditional Chinese medicineLi Xiao-dong1 Wu Fu-huo2 Zhang Ling-yan2 Chen Yan1 Ye Hong-zhi2 Zhong Hong-bin3 Jin Yu-bin1(1.The department of pharmaceutics, Fujian college of traditional Chinese medicine; 2.Western integrated medicine institute of Fujian province, Fuzhou, 350108; 3. Minhou xianjian pharmaceutical institute of Fujian province; China, Fuzhou, 350108)Abstract: Aims To have a preclinical studies on Subing nasal respiratory patches, an inhaled preparation of traditional Chinese medicine. Methods Using the method of gas chromatography and mass spectrum, the chemical ingredients of volatile materials in Subing nasal respiratory patches were analyzed and those in vitro and in vivo chemical ingredients were compared with after the pharmacokinetics research was given. Based on these, the studies on enduring lack of oxygen, safety evaluation, and correlativities between in vitro release percentage and in vivo absorptivity were done to found a quality standard. Results The in vitro drug ingredients included benzyl benzoate, benzyl cinnamate and borneol etc, which is in accordance with the ingredients from styrax and borneol. The analysis of the in vivo chemical ingredients showed that original borneol was entered into the rabbit blood to get an effectiveness, the other originals were probably metabolized to metabolites to have an action. The pharmacolog