实验性结肠炎小鼠血清中IL一1和IL一4活性研究.pdf

l 2 2 长江大学学报 自科版 2 0 0 5 年 6 月 第 2 卷 第 6 期 医学卷 第 1 8 卷 第2期 J o u r n a l o f Y a n g t z e U n i v e r s i t y N a t S c i E d i t J u n 2 0 0 5 V o l 2 N o 6 Me d i c i n e V V o l 1 8 N o 2 实验性 结肠 炎小 鼠血清 中 I L一1和 I L一4活性研 究 余万桂 张恒文 晏年春 长江大学 医 学院 湖北荆州4 3 4 0 0 0 摘要 目的 建立小 鼠实验 性结肠炎模型 观察血 清 中 白介素一 l I L 1 白介素一 4 I L 一 4 活性 的变化 方法 3 0只小鼠随机分为实验 组和 对照组 3 3 2 4 一 二硝基 氯苯 DN C B 涂腹致敏 实验组 以0 4 D N C B灌肠 每天 1次 连 续 4 d 采用 双抗体夹心 E L I S A法测定血清 I L l I L 一 4值 观察疾 病活动指数 结肠 大体和镜 下 改变 结果 实验组 与对 照组相 比 疾 病活动指数 组织病理学评分 以及 I L l活性 均有显著 升高 而 I L 一 4活 性 显著 降低 结 论 I L l I L 一 4参 与溃 疡性结肠炎 的病理过程 关键 词 溃 疡性结肠炎 I L l I L 4 2 4 一 二 硝基 氯苯 小 鼠 中图分类号 R 3 9 2 1 1 4 文献标识码 A 文章 编号 l 6 7 3 1 4 0 9 2 0 0 5 0 6 0 1 2 2 0 3 溃疡 性结 肠 炎 u l c e r a t i v e c o l i t i s UC 是一 种 至今 尚无根 治 办法 的炎 症性 肠病 严 重影 响人 类健 康 但 病 因及发 病机 制迄 今 尚不 明确 目前 大 多数学 者认 为 溃疡性 结 肠炎 与免 疫 系统 和细 胞 因子 的关 系密 切 特 别是促 炎症 细 胞 因子 和抗 炎症 细胞 因子 的失衡 在 溃疡性 结肠 炎 的发 生 中起重 要作 用 我们 以 2 4 一 二 硝 基氯 苯 DNC B 诱 发 小 鼠肠迟 发 过 敏 反应 及 结 肠 溃 疡模 型 旨在 探 讨 此 结肠 炎过 程 中促 炎 因 子 自介 素一 l I L 1 抗 炎 因子 自介 素一 4 I L 一 4 活性 的 变化及 意 义 1 材料 与方法 1 1 材 料 1 动物健康雄性 B AL B c 小鼠 3 o只 7 9周龄 体重 1 8 2 l g 由北 大医学部 实验动物科学部提 供 2 药物 与试 剂 D NC B涂 腹 液制 备 称 取 D NC B 北 京化 学试 剂公 司 3 3 0 mg 溶 于丙 酮 橄 榄 油 1 1 混合 液 l 0 mL 中 成 为终 浓 度 3 3 封 好瓶 口 低温 保存 备用 DNC B灌肠 液 称取 D NC B 4 0 mg溶于 6 O 乙醇 中 分 别配 成浓 度 为 0 4 D NCB溶液 瓶 好 封 口 低 温 保存 备 用 I L l I L 一 4 E I I S A 试 剂 盒 北 京 邦定 泰克 生物 有 限公 司 3 仪 器MK 3型 酶标 仪 L a b s y s t e m D r a g o n公 司 S HZ 8 2型水浴箱 江苏省太仓 医疗器 械厂 1 2 方 法 1 UC模 型 的 建立 3 O只 B AL B C小 鼠 随机 分 为对 照 组 1 5只 和实 验组 1 5只 小 鼠腹 部 剪 毛 不 要损 伤皮 肤 约 2 0 c m 1 5 c m 以 3 3 DNC B涂腹 液 涂腹 每 天 1次 每 次 5 O l 连续4 d 第 5天开 始 以 0 4 o 4 D NC B灌肠 每 天 1次 每次 2 A g 连 续 4 d 对 照组 灌 以相应 体 积 的 6 O 乙醇 方法 是将 直径 l mm 的 硅胶 管插 入小 鼠结 肠 插 管 尖端 距 肛 门约 3 3 5 c m 4 3 2 动物 观察 及评 价 疾 病 活 动指 数 D AI 5 J 每 日观 察 小 鼠体 重 和 大 便性 状 并对 动 物状 态进 行 评 分 体重 体重 不变 为 0分 体重 比正 常 下降 l 5 为 1 分 l O 为 2分 l 5 为 3分 大 于 l 5 为 4分 大便 黏稠 度 正 常 为 0分 松 散 的大便 为 2分 腹 泻 为 4分 大便 出 血 正 常 为 0分 显性 出血 为 2 分 大体 形 态和镜 下 病理 学 评分 所 有 小 鼠均 于第 9天用 颈椎 脱 臼法 处死 打 开腹 腔 分离 大肠 沿肠 系 膜 附 着 部 纵 行 剪 开 肠 壁 观 察 大 体 形 态 改 变 并 自 病 变 严 重 部 位 取 组 织 标 本 置 l O 甲 醛 液 中 固 定 常 规 石 蜡 包 埋 切 片 5 p t m HE染 色 镜 下 观 察 结 肠 的 病 理 学 改 变 大 体 形 态 收稿日期 2 0 0 5 0 3 1 9 作者简介 余万桂 1 9 7 0一 女 副教 授 主要从事生理学教学与研究工作 维普资讯 医学卷 第 l 8卷 第 2期 余万桂等 实验 性结肠炎小鼠血清中 I L一1和 l L一 4活性研究 1 2 3 评分的方法基本参考文献E 6 3 并稍微改进 结肠无粘连 结肠与其他组织剥离较易 无溃疡无炎症为 分 结肠 轻度 粘连 局 部充 血 为 1分 结 肠 重度 粘 连并 发现 1 处 溃疡 1 c m 为 2分 1 处 以上 溃疡 1 c m 伴 炎症 为 4分 镜 下 病 理学 评 分 的方 法 是 在 高倍 视 野 2 0 0 下 分 组 对每 只小 鼠的切 片进行 观 察 正 常结 肠黏 膜 为 0级 隐 窝缺 损 1 3为 1级 隐 窝 缺损 z 3为 2级 固有 层 覆盖 单层 上皮 伴轻 度 炎性 细胞 浸润 为 3级 黏 膜糜 烂 溃疡伴 显 著 的炎性 细胞 浸 润为 4级 I L 一 1 I I 一 4的 检 测 各组小 鼠断头取 血 分 离 出血 清 双 抗 体夹 心 E L 1 S A 法 测定 血 清 l L 一 1 l L 一 4值 具 体操 作 均按 试 剂 盒说 明 1 3统计 学 处理 实验 数据 用 均值 标 准差 表示 各组 间 比较行 t 检验 P 0 0 5为 差异 有统 计学 意义 2 结 果 2 1 疾病 活 动指 数 D AI 结肠 大体 形 态改 变和 病理 学评 分 灌肠 2 4 h后 实验 组小 鼠腹 泻 百分 率达 5 9 体 重 明显 减 轻 并 有 2 0 死 亡 各 组 D AI评 分 见 表 1 灌 肠 第 5 d处 死 小 鼠 打 开腹 腔 对 照 组 小 鼠结 肠无 粘连 粘膜 轻 度 充 血 无 溃 疡 形 成 镜 下组 织 结 构 可见 腺体 排 列 基 本 整 齐 实 验 组 小 鼠可 见较 广 泛 的结肠 粘连 近 端肠 腔扩 张及 少 量 白色渗 出物 结 肠粘 膜充 血 坏 死 多处 溃 疡 形 成 镜 下 隐 窝缺 损 明 显 组 织 结构紊 乱 粘膜 糜 烂 出血 坏 死和 大 面积深 层溃 疡 各 组病 理学 评分 结 果见 表 1 HE染 色镜 下 可 见 实 验 组 小 鼠 肠 组 织 损 伤 的 程 度 明 显 加 重 见图 1 表 1 小 鼠疾病 活动指数 大体 形态 显微病理评 分 注 与 对 照组 比 较 P O 0 5 表 2小 鼠血清中 I L 一 1 I L 4测定结果n g L 注 与对照组比较 P 0 0 5 P O 0 1 如文0 t I t 一 童 蠢 a 为对照组 镜下组织 结构可见 腺体排列基本 整齐 b 和 c 为实验组 隐窝缺损 明显 组织结构紊乱 粘膜糜烂 出血 坏死和大 面积深层 溃疡 图 1各 组 小 鼠肠 组 织 切 片 HE 染 色 X2 0 0图 1 a 和 图 1 b X 4 0 0图 1 c 2 2血清 I L 1 I L 4水 平 各 组小 鼠血 清 I L 一 1 I L 一 4水平 见 表 2 实验 组组 小 鼠血 清 I L 一 1与对 照组 比较 差 异 有 极显 著 性 P 0 0 1 I L 一 4水 平下 降 P 0 0 5 维普资讯 l 2 4 长江大 学学报 自科版 2 0 0 5 年 6 月 3 讨 论 二 硝基 氯苯 是 一种 小分 子 化合 物 可 做 为半抗 原 与组织 蛋 白结 合 成 完全 抗 原 激 发 T 细胞 介 导 的免 疫 反 应 本 实验 观察 到 致敏 原 2 4 一 二硝 基 氯 苯 DNC B 能 够 诱 发 小 鼠肠 迟 发 过 敏 反 应 乃 至 出现 结 肠 溃 疡 用 D NC B作 为致 炎 剂 被普遍 认 为主要 是 激 活了 T 细胞 其诱 导 的 UC 动物 模 型 在 很 大 程度 上 接 近 于 人类 的 UC E 在溃 疡性 结肠 炎 发生 过 程 中 免 疫 因 素 是 重 要 的 因 素 之 一 细 胞 因子 在 调 节 肠 道 免 疫 中扮 演 重 要角 色 有诱导炎症和抗炎作用 根据现有资料 较多的细胞因子都是从溃疡性结肠炎患者测得 由 D NC B肠 炎诱 导释 放 的细胞 因子仅 见 TNF a I L 一 1是一 种具 有 多种 生 物 活性 并 能 作 用 于 体 内 多 种组 织 和 器 官 的 细胞 因子 它 在炎 症 及 免 疫 反 应 中 起 重 要 作 用 本 实 验 表 明 模 型组 的 I I 一 1水 平 较 对 照 组 升 高 P 0 0 1 I L 一 1 可 以产 生对 中性 粒细 胞等 炎症 细 胞 的趋 化 作 用 吸引 其 进 入肠 道病 变部 位 从 而 引 起 一 系列 的肠 道病 变 如结 肠 上皮 的损 伤 小血 管 炎 隐窝 脓 肿等 最终 造成 UC的 发病 8 I L 4是 T细 胞来 源 的细 胞 因子 具 有 多 种 生 物学 功 能 最 令 人 关 注 的 是其 抑 制 炎 症 的 特性 9 本 实 验表明 模型组 I L 一 4水平较对照组降低 差异有显著性 P 0 0 5 大量研究资料证实 I I 一 4能抑制单核 巨噬细胞产生 I L 一 1 口和 TN F a 能下调活化的单核 巨噬细胞分泌氧 自由基的能力 而且存在剂量一 效应关 系 1 I L 一 4还 能抑 制 前列 腺素 E 2和 I L 8的产生 实验 中我们 观 察 到 在 DNC B致 实验 性 结肠 炎 小 鼠血 清 中促 炎 因子 I L 一 1活 性升 高 而 抗炎 因子 I L 一 4 活性 降低 表 明促炎 细胞 因子 I L 一 1和抗 炎细 胞 因子 I L 一 4失衡 可能 参与 溃 疡性 结肠 炎 的发病 过 程 参考 文献 1 Re n ma U X D Di s t i n c t p r o d u c t i o n o f a u t o a n t i b o d i e s t o n u c l e a r c o mp o n e n t s i n u l c e r a t i v e c o l i t i s a n d i n Cr o h n S d i s e a s e J C l i n I mmu n o l I mmun op a t h o l 1 9 9 5 7 7 3 3 4 9 3 5 8 z 官恩聪 细胞因子 与溃疡性结肠炎 J 临床内科杂志 1 9 9 7 1 4 6 2 9 7 3 0 0 3 S a r t o r R B P a t h o g e n e s i s a n d i mmu n e me c h a n i s ms o f c h r o n ic i n f l a mma t o r y b o we l d i s e a s e s J Am J Ga s t r o e n t e r o l 1 9 9 7 9 2 s u p p 1 5 1 2 4 Wa n Gu i Yu P i n g L i n L i n Me i e t a 1 P a t h o p h y s i o l o g i c a l s i g n i f i c a n c e o f fl r e a c t i o n i n mo u s e g a s t r o i n t e s t i n a l t r a c t a s s o c i a t e d wi t h d e l a y e d t y p e h y p e r s e n s i t i v i t y J Wo r l d J o u r n a l o f Ga s t r o e n t e r o l o g y 2 0 0 4 1 0 1 5 2 2 5 4 2 2 5 9 5 Ra b i n B S R o g e r s S J A c e l l me d i a t e d i mmu n e mo d e l o f i n f l a mma t o r y b o we l d i s e a s e i n t h e r a b b i t J Ga s t r o e n t e r o l o g y 1 9 7 8 7 5 1 2 9 4 1 6 3陈维雄 陈金联 陈尼维 等 P选择素单抗对小 鼠溃 疡性结肠 炎治疗的研究 J 中华消化杂志 2 0 0 1 2 1 1 0 6 2 9 6 3 1 7 F u s s I J Ne u r a t h M B o i r i v a n t M e t a 1 Di s p a r a t e CD 4 l a mi n a p r o p r i a L t l y mp h o k i n e s e c r e t i o n p r o f i l e s i n i n f l a mma t o r y b o we l d i s e as e Cr oh n S d i s e a s