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文档简介

题目 蛋白质沉淀反应 一 实验目的 掌握几种使蛋白质沉淀的方法 掌握蛋白质可逆沉淀与不可逆沉淀的区别 理解蛋白质变性和沉淀的关系 二 原理 蛋白质是亲水胶体 正常状态下 蛋白质分子表面具有水化膜和电荷层 能保持其胶体溶液的稳定性 在一定因素的影响下 蛋白质会失去电荷和脱水沉淀 蛋白质的变性与沉淀之间没有必然联系 蛋白质沉淀反应 一 蛋白质的盐析作用 二 乙醇沉淀蛋白质 三 重金属盐类沉淀蛋白质 四 生物碱试剂沉淀蛋白质 一 蛋白质的盐析作用 加盐类如硫酸铵 硫酸钠 氯化钠等可以破坏蛋白质胶体周围的水膜 同时又中和了蛋白质分子的电荷 因此使蛋白质产生沉淀 这种加盐使蛋白质沉淀析出的现象称盐析 盐溶现象为低盐浓度可使蛋白质的溶解度增加 实验时要加足够量的盐 蛋白质的盐析作用是可逆过程 用盐析方法沉淀蛋白质时 较少引起蛋白质变性 经透析或用水稀释时又可溶解 二 乙醇沉淀蛋白质 有机溶剂如酒精 丙酮等可使蛋白质产生沉淀 这是由于这些有机溶剂和水有较强的作用 破坏了蛋白质分子周围的水膜 因此发生沉淀作用 若及时将蛋白质沉淀与丙酮或乙醇分离 蛋白质沉淀则可重新溶解于水中 三 重金属盐类沉淀蛋白质 溶液pH在蛋白质等电点以上时 重金属盐类 如Pb2 Cu2 Hg2 及Ag 等 易与蛋白质结合成不溶性盐而沉淀 重金属盐类沉淀蛋白质通常比较完全 故常用重金属盐除去液体中的蛋白质 但应注意 在使用某些重金属盐 如硫酸铜或醋酸铅 沉淀蛋白质时 不可过量 否则将引起沉淀再溶解 此时的溶解为生成憎水胶体的缘故 四 生物碱试剂沉淀蛋白质 生物碱是植物中具有显著生理作用的 类含氮的碱性物质 凡能使生物碱沉淀 或能与生物碱作用产生颜色反应的物质 称为生物碱试剂 如鞣酸 苦味酸和磷钨酸等 当蛋白质溶液pH值低于其等电点时 蛋白质为阳离子 能与生物碱试剂的阴离子结合成性盐而沉淀 溶液中的蛋白亦能被有机酸沉淀 其中以三氯醋酸的作用最为灵敏而且特异 因此被用于蛋白质的首选沉淀剂 只能沉淀蛋白质 不能沉淀其水解产物 加热可除去 三 实验材料 实验材料 鸡卵清蛋白液 吸管 1mlx4 2mlx4 0 5mlx1 5mlx2 试管 1 5x15cmx14 水浴锅 滴管 电炉实验试剂 苯酚 0 5 硫酸铜 1 硫酸铵固体 95 乙醇 NaCl 醋酸铅 鞣酸 苦味酸
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