实验一维生素C对布洛芬在家兔体内药物动力学影响.doc

实验一 维生素C对布洛芬在家兔体内药物动力学影响一、实验目的通过实验初步掌握兔体内血药浓度测定方法。掌握血药浓度法计算药物动力学参数。二、实验原理药物的血管外给药是临床上的主要给药方式。血管外给药的吸收过程和消除过程在正常计量下一般均属于一级动力学过程。一级吸收药物动力学参数的求算，可以采用计算机拟合的方法求得。若药物按表观一级吸收过程进入体内，又按表观一级过程消除，且在体内按单室模型分布，药物的表观一级消除速度常数k和一级吸收速度常数ka可以借助于血要浓度时间数据用线性回归法和残数法求得。用线性回归法和残数法借助于血要浓度时间数据求k和ka值的过程如下： 依据简化的N室线性乳突模型吸收隔室A尿室中央隔室C 可以求得描述体内药量X随时间t的变化率的微分方程，即速率方程： 借助于Laplace变换，可以求得单隔室口服给药的体内药物动力学模型： (1) 表观一级吸收速度常数， 吸收部位的药量， 表观一级消除速度常数这是一个二项指数式，若两项有足够的差异，即或，当t足够大时，指数项绝对值较大的一项首先趋向于零。本实验所用的扑热息痛在家兔体内动力学特征刚好符合情况，因此，可以首先采用线性回归法求得值。具体方法如下： 因为： ka k，所以：t 时， 0 ， (1) 式变为： (2) (2)式对数形式为： （3）以lnC 对 t 作图得二项指数曲线，其末端为一直线，其斜率为 ，可求得k值，见图线。式（）减去式（）得外推线上血药浓度与实际血药浓度之差的浓度（）与时间的关系。lnC (4)kkat线线式（）两边取对数得 (5)以 对t作图可得直线（见图线），其直线斜率为 ，由此可求得值。并且通过 图 残数法求下列 布洛芬(Ibuprofen，Brufen)是一种新型非菌体消炎镇痛药，广泛用于风湿和类风湿性关节炎。尽管布洛芬的镇痛、消炎作用机制尚未完全阐明，但初步研究认为布洛芬可能作用于炎症组织局部，通过抑制前列腺素或其他递质的合成而起作用，由于白细胞活动及溶酶体酶释放被抑制，使组织局部的痛觉冲动减少，痛觉受体的敏感性降低。治疗痛风是通过消炎、镇痛、并不能纠正高尿酸血症。治疗痛经的作用机理可能是前列腺素合成受到抑制使子宫内压力下降、宫缩减少。布洛芬在肝内代谢, 6090%经肾由尿排出，100%于24小时内排出，其中约1为原形物，一部分随粪便排出。由于布洛芬是临床上常用的药物，所以难免与一些常用的药物合并使用，因此研究布洛芬与一些常用的药物，包括一些内源性物质共存于体内时其药物动力学的变化是十分必要的。为了了解维生素C对布洛芬的体内药物动力学过程的影响，给家兔口服维生素C和布洛芬，测定布洛芬血药浓度，并计算药物动力学参数。三、实验内容1实验方法取体重3kg左右健康家兔，随机分为A,B,C三组，A组按150mg/kg剂量取布洛芬片同时加服125mg的维生素C片，放入小烧杯中，加少量蒸馏水溶解，给家兔口腔灌胃给药溶液。B组按150mg/kg剂量取布洛芬片灌胃给药，给药半小时后再灌胃给予125mg维生素C片。C组按125mg 剂量取维生素C片灌胃给药，给药半小时后再灌胃给予150mg/kg布洛芬片剂。A，B，C三组给药后均于0.5，1，1.5，2，3，4.5，7 小时分别从耳缘静脉采血约ml，置于含肝素钠的小试管中（8g/ml血）。然后按标准曲线制备项下测定血药浓度。2血药浓度测定I.分光光度法1） 标准溶液的制备及标准曲线的制备布洛芬标准储备液:精密称取布洛芬精制品0.1g，置l000ml容量瓶中，加无水乙醇溶解，定容。使成100mg/L的储备液。标准曲线的制备：取一组带塞离心管，分别加布洛芬标准储备液0.00、0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、l.00ml，与兔血清0.5ml混合后，加无水乙醇至5ml，置振荡器上振摇30s，然后离心(4000r/min)20min，吸取上清液，在测定波长222nm依次测定吸光度。以吸光度对浓度回归，求得回归方程，y=20.2606x+0.8386(n=7，r=0.9995)。维生素C标准溶液的制备：以兔血清为溶剂, 制备含维生素C200g/ml的标准溶液。（） 样品的测定将采取的血样于4000r/min转速下离心5min,吸取血浆500l，加1无水乙醇6.0ml, 置振荡器上振摇30s，然后离心(4000r/min)20min，吸取上清液，在测定波长222nm以空白为对照依次测定吸光度。II.高效液相色谱法色谱条件：岛津LC一10A高效液相色谱仪。紫外检测波长为225nm，0.0lAUFS。分析柱为waters symmetry ODS柱;流动相为甲醇乙睛一0.02mol/L醋酸钠、醋酸溶液(47: 23:30)v/v;流量0.8ml/min。在本色谱条件下布洛芬的保留时间为9.6min.血浆中布洛芬的提取、分离和测定：取单剂量口服300mg布洛芬片的健康家兔待测血浆100l，加人300l甲醇，混匀后离心(10000r/min)l0min，取上清液直接进样20l，以峰面积外标法定量。混合空白血浆中内源性杂质不干扰布洛芬的测定。布洛芬标准曲线及最低检测限：精密称取布洛芬对照品配制成浓度为323g/ml贮备液，置冰箱备用。取该贮备液用混合空白血浆配制成浓度为0.11，0.56，1.12，2.24，6.73，13.46，26.97，53.93g/ml标准溶液，用上述血样提取方法处理后进样l，以峰面积(A)为纵座标，浓度(C)为横座标作标准曲线，其直线回归方程为:C=0.19十5.599X10一5A，y=0.9999。用本法测定血浆中布洛芬最低浓度0.1g/ml。四、记录与参数计算表 实验测定记录兔血药浓度g/ml空白0.511.5234.56AC(g/ml)数据整理及参数计算:以血药浓度为纵坐标，以时间为横坐标做血药浓度时间曲线