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骨髓细胞微核实验 微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法 微核 Micronucleus MCN 是指细胞中主核之外的颗粒 染色与细胞核一致 相当于细胞直径的1 20 1 5 呈圆形或杏仁状 是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂时滞留在细胞核外的遗传物质 实验原理 机理 1有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中2断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动 从而遗留在细胞质中结论 微核试验能检测化学或其他物质因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点 实验原理 无核细胞 红细胞 有核细胞中微核难与正常核分叶及核突出物区别 微核实验 红细胞的分化成熟过程 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成 8 环磷酰胺 CTX 最常用的烷化剂类抗肿瘤药 在体外无抗肿瘤活性 进入体内经转化 分解 生成酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用 副作用明显 有恶心 食欲减退 脱发 白细胞减少 中毒性膀胱炎 肝功能损伤等 具有显著的遗传 生殖毒性 停经或精子缺乏 妊娠初期时给予可致畸胎 用药后24 30小时 骨髓中微核形成达峰 9 结果 示小鼠骨髓嗜多染红细胞中一个微核 示小鼠骨髓正常嗜多染红细胞 10 示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核 11 示小鼠骨髓嗜多染红细胞中多个微核 Giemsa染色 PCE胞质内含有核糖体 染色呈灰蓝色 MCN多数为圆形 嗜色性与核质一致 呈紫红色或蓝紫色NCE的核糖体已消失 被染成淡桔红色 实验目的 用化疗药 环磷酰胺 制备突变模型观察小鼠骨髓嗜多染红细胞 PCE 微核 Animal 小鼠是微核试验的常规动物 通常用7 12周龄 体重18 20g的小鼠 Reagents 小牛血清Giemsa染液环磷酰胺 实验动物及试剂 实验分组和染毒方法 染毒方法 30h两次给药法 两次给受试物间隔24h 第二次给药后6h取材 处死 小鼠颈椎脱臼处死 取股骨 防止出血 取骨髓 小牛血清1滴 推片 30度角 晾干 一定要干 固定 甲醇固定10min 需要晾干 染色 Gimesa染液染色 10 15min 冲洗 蒸馏水冲洗 晾干 阅片 观察微核 染毒后操作步骤 推片方法 观察与计数 低倍镜下选择分布均匀 染色较好的区域油镜下观察计数多染红细胞 PCE 呈灰蓝色 正染红细胞 NCE 呈橘黄色 典型的微核多为单个 圆形 边缘光滑整齐 嗜色性与核质一致 呈紫红色或蓝紫色 计数1000个PCE中含微核的PCE数 并且计数200个细胞中PCE与NCE的比值 实验方法和步骤 实验结果 结果分析与评价 本试验中只计数PCE中微核 微核率以千分率表示 PCE NCE为评价细胞毒性的指标 正常PCE NCE比值约为l 正常范围为0 6 1 2 如PCE NCE 0
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