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文档简介
总黄酮含量测定一 样品溶液的制备 70%乙醇溶液,料液比18 ,80度下回流2h。 取10g样品放入圆底烧 瓶中加入80ml 70%乙醇溶液回流2h,抽滤定容至100ml备用。使用时先 离心再用70%乙醇稀释10倍做样品溶液。二 芦丁标准品的配置 精密称取芦丁2mg,加无水乙醇定容至10ml。制得浓度为0.2mg/ml芦 丁标准品溶液。三 显色方法的确定1 扫描原液 分别取芦丁溶液和样品溶液各1ml,加无水乙醇定容至 25ml,空白对照,全波扫描。 2 硝酸铝显色法 分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml,加5%亚硝酸钠 溶液(1.25g亚硝酸溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml, 摇匀,放置6min,加10%硝酸铝溶液(4,4014g硝酸铝.九水溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml, 摇匀,放置6min,加4%氢氧化钠试液(2g氢氧化钠溶于无水乙醇中定容到50ml容量瓶中)10ml, 再加无水乙醇定容至25ml,摇匀,放置15min, 空白对照,全波扫描 bb 。 3 氯化铝显色法 分别取芦丁对照溶液和样品溶液各5ml ,加1%的氯化铝溶液(1g氯化铝溶于无水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml,摇匀放置10min,空白对照,全波扫描。 4 氢氧化钾显色法 分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml,加3ml10%氢氧化钾溶液(2.5g氢氧化钾溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中),充分摇匀显色5min后,用无水乙醇定容至25ml, 摇匀,空白对照,全波扫描。四 显色条件的确定 五 标准曲线的绘制 分别取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml芦丁对照品溶液,按所选的显色方法测定 吸光度,绘制标准曲线。六 精密度实验 按标准曲线绘制方法,分别准确量取1.0ml芦丁标准液5份,按所选显色 剂和所确定的最优显色条件在所选波长下测定吸光度。次数12345吸光度平均值相对标准偏差RSD(%)七 重现性实验取火棘果样品5份各10g,按提取步骤制得样品液,按制备标准曲线方法显 色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。次数12345总黄酮含量(%)平均值(%)相对标准偏差RSD(%)八 稳定性试验 取制备好的同一样品溶液,将其显色后每10min测定一次,共测定7次, 记录吸光度并计算总黄酮含量。比色时间(min)0102030405060总黄酮含量(%)平均值相对标准偏差RSD(%)九 回收率实验 分别准确量取已知总黄酮含量为 mg/ml的1ml提取液5份,分别 加入一定量芦丁标准品,按上述方法进,测定吸光度,计算黄酮含量,根 据回收率公式计算出加样回收率。 回收率=(混合后测得量样品中总黄酮含量)/芦丁标准品加入量 *100 样品号样品中总黄酮含量(mg)芦丁加入量(mg)测定量(mg)回收率(%)平均回收率(%)相对标准偏
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