实验8-9 脯氨酸含量、电导率的测定.ppt

抗性生理 植物对胁迫的响应机制 渗透调节 脯氨酸 甘氨酸甜菜碱 可溶性糖 活性氧代谢 抗氧化酶 抗氧化小分子 胁迫蛋白 热激蛋白 抗冻蛋白等 离子平衡和区域化 盐胁迫 水通道蛋白 盐胁迫 类黄酮 苯丙氨酸 紫外胁迫 脯氨酸含量的测定 前言 逆境条件下 干旱 盐碱 热 冷害 冻害 植物体内脯氨酸 proline Pro 含量会显著增加 并且积累指数与植物的抗逆性有关 因此脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标 酸性条件下 茚三酮和脯氨酸反应生成稳定的红色化合物 产物在520nm波长下具有最大吸收峰 用磺基水杨酸提取植物样品时 脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中 然后用酸性茚三酮加热处理后 溶液即成红色 再用甲苯萃取 则色素全部转移至甲苯中 颜色的深浅即表示脯氨酸含量的高低 实验原理 材料 仪器及试剂 一 实验材料小麦幼苗 对照 100mM 200mMNaCl处理48h 5 15 PEG 6000处理48h 二 仪器设备天平 烧杯 分光光度计 研钵 容量瓶 具塞试管 移液管 胶头滴管 水浴锅 主要试剂 1 3 磺基水杨酸 2 冰醋酸 3 甲苯 4 2 5 酸性茚三酮溶液 60ml冰醋酸 16 4ml磷酸加蒸馏水定容至100ml 再加入2 5g茚三酮 溶解后避光保存 5 脯氨酸标准母液 精确称取25mg脯氨酸 倒入小烧杯内 用少量蒸馏水溶解 然后倒入500ml容量瓶中 加蒸馏水定容至刻度 此标准液中脯氨酸浓度50 g ml 方法及步骤 一 样品的测定1 称取不同处理的小麦叶片各0 5g 于2 5ml3 磺基水杨酸试管中 沸水浴中提取10min 2 吸取1ml上清于另一试管中 加入1ml水 1ml冰乙酸 2ml2 5 的酸性茚三酮 混合液于沸水中显色30min 3 冷却后加入4ml甲苯 摇荡30S 萃取完全后用吸管轻轻吸取上层红色甲苯溶液于比色杯中 以甲苯为空白对照 在520nm比色 4 用0 5 5 g mlL 脯氨酸作标准曲线 二 标准曲线的绘制 1 标准液中脯氨酸浓度50 g ml 2 取6个50ml容量瓶 分别加入脯氨酸原液0 5 1 0 1 5 2 0 2 5 3 0ml 用蒸馏水定容至刻度并摇匀 各瓶的脯氨酸浓度分别为0 5 1 0 1 5 2 0 2 5 3 0 g ml 3 分别吸取1ml系列标准浓度的脯氨酸溶液于6个试管中 加入1ml水 1ml冰乙酸 2ml2 5 的酸性茚三酮 于沸水浴中加热30min 4 冷却后准确加入4ml甲苯 振荡30S 静置片刻 使色素全部转至甲苯溶液 5 轻轻吸取各管上层甲苯溶液至比色杯中 以甲苯为空白对照 于520nm进行比色 五 结果计算 根据标准曲线计算出脯氨酸的浓度 然后换算出样品中脯氨酸的含量 g脯氨酸 gFW 脯氨酸含量 g g 1 c v a wC为由标准曲线查得脯氨酸含量 g V为提取液总体积ml a为测定液体积ml W为样品质量g 逆境胁迫对植物质膜透性的影响电导率法 原理 植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用 在正常情况下 细胞膜对物质具有选择透性能力 当植物受到逆境影响时 如高温或低温 干旱 盐渍 病原菌侵染后 细胞膜遭到破坏 膜透性增大 从而使细胞内的电解质外渗 电导率增大 膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关 也与植物抗逆性的强弱有关 实验步骤 1 取0 2g对照和盐或PEG6000处理的小麦叶片 切成约1cm小段 2 用双蒸水冲洗3遍以除去表面粘附的电解质 3 加10ml双蒸水 25 振荡温育1小时 期间经常摇动 测定此时的电导率为C1 4 将盛有根的试管100 煮沸15min 冷却