自身抗体的应用及研究进展.ppt

自身抗体的应用及研究进展 全自动自身抗体分析仪 自动化检测检测定量化单个项目随时检测多个项目同时检测45 90分钟报告结果原厂质控和校正血清精确温度调控系统五点定标 三重检测 风湿病的实验室诊断 血清学检查自身抗体 特异性非特异的免疫相关指标滑液分析一般的实验室检查项目 常见的自身抗体及其检测方法 1 2 常见的自身抗体及其检测方法 抗Ku抗体 Ku 抗Mi抗体 Mi 2 抗PM Scl抗体 抗JO 1抗体 JO 1 多发性肌炎 皮肌炎 抗线粒体抗体M2型 AMA M2 原发性胆汁性肝硬化 抗nRNP抗体 U1 snRNP 混合性结缔组织病 MCTD 抗Scl 70抗体 Scl 70 抗着丝点B抗体 CENP B 系统性硬化 抗SSB La抗体 抗SSA R052抗体 抗SS A R060抗体 干燥综合征 系统性红斑狼疮 抗核糖体P蛋白 PO 抗增殖细胞核抗原抗体 PCNA 抗Sm抗体 抗组蛋白抗体 抗核小体抗体 抗双链DNA抗体IgG抗体 系统性红斑狼疮 项目名称 疾病 ANA谱17项 免疫印迹法 3 常见的自身抗体及其检测方法 一 类风湿关节炎 RA 类风湿因子 RF 早期诊断的系列指标抗RA33 36抗体抗核周因子 APF 抗角蛋白抗体 AKA 抗Sa抗体抗环瓜氨酸抗体 抗CCP 抗角蛋白抗体 AKA 抗角蛋白抗体 AKA 1979年Young等发现类风湿性关节炎 RA 血清中有一种能与鼠食管角质层反应的抗体 并对类风湿性关节炎 RA 具有特异性 命名为AKA 1989年Vincent等提出应将AKA更名为抗角质层抗体更为恰当 AKA可以在RA发病以前若干年出现 所以有早期诊断价值 AKA检测方法 取6周龄雄性Wistar大鼠食管中下1 3段作为抗原 做冰冻切片 厚4 m 5 m 70 保存备用 加1 20稀释血清 湿盒内37 孵育30分钟 PBS漂洗 吹干 加1 20稀释的荧光素标记羊抗人IgG 37 孵育30分钟 漂洗 吹干 缓冲甘油封片荧光显微镜下观察 判定标准 以角质层出现典型的规则的线状或板层状荧光为阳性 geneFilaggrin 类风湿因子 RF 抗人IgG分子Fc片段上抗原决定簇的特异性抗体 分为IgM G A E型RF在RA中的阳性率为70 是诊断RA的重要标准之一RF含量与病情的活动性和严重性成正比 持续高滴度的RF常提示RA病情活动 骨侵蚀发生率高 常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现 提示预后不良 类风湿因子 RF RF并非RA独有的特异性抗体 对RA的诊断不具特异性SLE30 SS70 90 SSc20 30 MCTD50 60 非风湿性疾病5 以下的正常人RF阳性不等于一定就是RARF阴性也不等于一定就不是RA RF常用检测方法 RF1 40阳性乳胶凝集法 测IgM RF RF256Iu ml双抗夹心ElISA法 测总RF RF IgG110IU ml IgA18IU mlELISA法 IgM200IU ml RA早期诊断的系列指标 敏感性特异性抗RA33 36抗体35 8 99 6 APF40 80 70 90 AKA40 55 85 95 抗Sa抗体40 60 98 6 抗CCP46 70 96 抗环瓜氨酸肽抗体 抗CCP 瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微丝蛋白相关抗体的主要抗原决定簇对RA诊断具有高度特异性 98 可在RA早期出现预测早期关节炎发展为RARA关节侵蚀破坏的早期识别及预测 二 系统性红斑狼疮 SLE 是一种临床表现有多系统损害症状的慢性系统性自身免疫性疾病 其血清有以抗核抗体为主的大量不同的自身抗体自身抗体 1 抗核抗体谱 ANA 抗ds DNA 抗ENA抗体 2 抗磷脂抗体 3 抗组织细胞抗体 抗RBC抗体抗血小板相关抗体抗神经元抗体 4 其它 RF p ANCA 抗核抗体 ANA 定义 以细胞核内物质为抗原的抗体临床意义 SLE的筛查抗体 95 阳性 但滴度与SLE活动性无相关阴性基本可排除SLE 阳性并非SLE特异阳性并非风湿病特异 风湿病 SLE SSc SS RA 非风湿性疾病 感染 慢肝 肺纤维化 肿瘤 服用某些药物 INH 苯妥英钠 肼苯达嗪 普鲁卡因酰胺 抗核抗体 ANA 方法 间接免疫荧光法结果判断 滴度 1 100为阳性 常见核型 5种不同核型的临床意义不同 核膜型与抗ds DNA有关 多见于SLE 特别是有肾炎者 均质型与AHA 抗组蛋白抗体 抗DNA有关 引起LE形成主要见于SLE 药物性狼疮 斑点型与抗ENA有关 应进一步查特异性抗体 核仁型多见于硬皮病 着丝点型多见于CREST综合征 ANA常见五种核型及临床意义 核膜型 与抗ds DNA有关 多见于SLE 特别是有肾炎者均质型 与AHA 抗DNA有关 引起LE形成主要见于SLE 药物性狼疮斑点型 与抗ENA有关 应进一步查特异性抗体核仁型 多见于硬皮病着丝点型 多见于CREST综合征 ANA检测方法 间接免疫荧光法印迹法ELISA法 抗核抗体谱 ANAs 定义 以细胞核内物质为抗原的抗体抗DNA抗体 抗ss DNA抗ds DNA抗组蛋白抗体 H1 H2A H2B H3 H4抗非组蛋白抗体 抗ENA抗体抗着丝点抗体抗核仁抗体其它 线粒体 溶酶体 高尔基体等 抗ds DNA抗体 临床意义 对SLE的诊断有较高特异性 滴度与SLE活动相关 可作为病情监测及疗效观察指标 与SLE肾损害有关检测方法 放免法 Farr 敏感 有利于早期预测检测高亲合力的抗ds DNA 间接免疫荧光法 IF 特异 ELISA 可检测低亲合力的抗ds DNA有助于中枢狼疮的病情监测 金标免疫斑点法 抗ENA抗体 抗RNPMCTD100 阳性 且滴度高双手肿胀 雷诺现象 肌炎 指 趾 端硬化肾脏保护性抗体 抗SmSLE的标记性抗体 阳性率30 有助于早期 不典型及治疗缓解后SLE的回顾性诊断抗Sm阳性一定伴抗RNP阳性 但抗RNP阳性可单独存在抗SSA 原发性SS 60 75 SLE 40 50 与皮损 光过敏 白细胞减少 淋巴结肿大 血管炎 紫癜相关 可造成新生儿狼疮 婴儿心脏传导阻滞抗SSB 原发性SS 40 较抗SSA更特异 其它CTD伴抗SSB者常伴继发性SS 抗ENA抗体 抗Scl 70硬皮病标记性抗体抗Jo 1多肌炎 皮肌炎标记性抗体抗Rib胞浆抗原 核糖体位于胞浆内临床意义 是SLE的又一特异性抗体 阳性率10 20 多见于SLE活动期与抗ds DNA抗体的消长相平行但不会随病情缓解立即消失可持续1 2年后才转阴 抗核小体抗体 AnuA 核小体是细胞染色质中的一种成分 它是由DNA和组蛋白以特殊的方式相连而组成 在SLE的诱导和致病中起重要作用对SLE的早期诊断有重要意义比抗ds DNA 抗组蛋白抗体更早出现阳性率 50 90 特异性 98 三 皮肌炎 多发性肌炎 PM DM 免疫学检查ANAENA 抗Jo 1阳性其它检查 肌酶谱肌酸磷酸激酶 CPK MM 心肌和骨骼肌MB 心肌BB 平滑肌和脑内乳酸脱氢酶 LDH 谷草转氨酶 AST 谷丙转氨酶 ALT 碱性磷酸酶 ALP 四 干燥综合征 SS ANA 阳性率40 70 ENA 抗SSA抗体阳性率70 96 抗SSB抗体阳性率50 87 抗 Fordrin 对于pSS或sSS的诊断有一定意义 但特异性和敏感性并不理想 RF 阳性率75 100 高球蛋白血症WBC下降 五 系统性硬化病 pSS ANA 阳性率50 55 ENA 抗Scl 70阳性率15 40 抗着丝点抗体 ACA 阳性 六 混合性结缔组织病 MCTD ANA阳性ENA 抗RNP高滴度阳性 七 血管炎 抗中性粒细胞胞浆抗体 ANCA ANCA的临床意义 c ANCA和PR3 ANCA对韦格纳肉芽肿有高度特异性 95 敏感性80 与病情活动性相关常作为判断药物疗效和病情复发的指标p ANCA和MPO ANCA不如c ANCA具有诊断特异性阳性者血管炎程度较高 其滴度也与病情活动相关主要与显微镜下多血管炎坏死性新月体肾小球肾炎变应性肉芽肿性血管炎相关 八 抗磷脂抗体综合征 APS 是一种非炎症性自身免疫病 临床上以动 静脉血栓形成 习惯性流产和血小板减少等症状为表现 血清中存在抗磷脂抗体血清学检查抗心磷脂抗体 ACA IgG IgM IgA ELISA 抗 2糖蛋白1抗体 抗 2 GP1 狼疮抗凝物 LA 凝血酶原时间 PT 激活的部分凝血活酶时间 APTT 白陶土凝集时间 KCT 蛇毒试验 RVVT 抗磷脂抗体 抗 2 GP1抗体比LA和ACA在APS患者中更具有特异性 是导致APS的主要抗体抗 2GP1抗体只出现于自身免疫性疾病 而ACA也可出现于一些感染性疾病 如梅毒 AIDS 肝炎 结核等 九 自身免疫性肝病 抗核抗体 ANA 抗肝细胞膜抗体 抗LMA 抗平滑肌抗体 ASMA 抗肝肾微粒体抗体 抗LKM抗体 抗肝 胰抗体 抗LP抗体 抗可溶性肝细胞抗体 抗SLA 抗线粒体抗体 AMA 自身免疫性肝炎 AIH ANA抗平滑肌抗体 SMA 抗肝肾微粒体抗体原发性胆汁性肝硬化 PBC 抗线粒体抗体 AMA M2原发性硬化性胆管炎ANCA阳性 自身免疫性肝病 风湿病的实验室诊断 自身抗体 特异性非特异的免疫相关指标一般的实验室检查项目血常规尿常规肝功能肾功能等 注意事项 选择做哪些检查项目时要重点突出避免 大撒网 解释实验结果时应考虑以下几个问题实验方法本身的敏感性 特异性 可靠性及实验室之间的差异性结合临床应把与之相关的一组实验结果放在一起考虑 全国自身抗体检测质量控制总结 由中华医学会风湿病分会计划参与质控的医院和检测的项目逐年增多 多为三甲医院 自身抗体的检测对于风湿性疾