年产50万株栀子植物组培实验方案设计.doc

年产50万株栀子植物组培实验方案的设计设计单位：四川农业大学都江堰校区 08级应用化工技术1班设计人员：李雪俊 徐小敏 林茜 王莉 杨靖宇 杨叶 何吕学 蒋川 张世洋设计时间：2010年7月1日目录：第一章 概述一、组织培养的定义二、组织培养发展简史及应用前景三、栀子简介第二章 功能说明一、整个工程的功能整二、栀子组织培养实验室说明第三章 土建工程一、组培实验室平面图二、工程平面图第四章 组培方案第五章 主要设备第六章 资金预算第七章 市场前景一、栀子的市场展望二、中国栀子市场现状及具分析三、效益分析第一章 概述一、组织培养的定义 植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。器官或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。植物组织培养概念（狭义）指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。二、组织培养发展简史及应用前景（一）发展简史 1、探索阶段（1） 德国Haherlandt得出了高等植物的器官和组织可以不断分割，直到单细胞的观点，并做了相关的培养实验。 （2） 1904年Hanning在无机盐和蔗糖溶液中培养萝卜和辣根菜的坯，使坯在离体条件下长到成熟。 （3） 1922年，美国报道Robbins离体培养根尖获得某些成功 。2、奠基阶段： （1）1934年，美国Wite番茄根的离体培养实验获得真正的成功，1937年他发现了B族维生素的作用。 （2） 1934年，Cautheret在山毛柳形成层组织中发现只有在培养基中加入B族维生素和IAA后，形成层组织的生长才能显著增加。 （3）1939年，Nobecourt建立了形成层的连续组织培养物。Wite、Cautheret、Nobecourt三人被称为植物组织培养奠基人。 （4）1944年，Skoog等发现了嘌呤类物质能够控制药草髓愈伤组织的生长和芽的形成。 （5）1955年，Miller等由鲱鱼精子DNA中分离出一种首次为人所知的细胞分裂素。 （6）1958到1959年，Reinert和Steward在胡萝卜愈伤组织培养中形成了体细胞胚。3、迅速发展阶段 （1） 原生质体培养获得重大突破1960年，Cocking等人用真菌纤维素E分离植物原生质体获得成功。1971年，Takebe在烟草上由原生质体获得了再生植物。 （2） 花药培养获得显著的成绩 1967年，Bourgin和Nitsch通过花药培养获得了完整的烟草植株。 （3） 微繁技术的广泛应用 1960年，Morel离体无性繁殖兰花的方法。我国学者的贡献:1、1933年，李继侗，银杏胚组织培养。2、1935到1942年，罗宗洛，玉米等植物的离体根夹培养。3、罗玮，幼胚和茎尖培养。4、李正理，离体胚培养中形成态发生及离体茎夹培养5、王伏雄，幼胚培养（二）应用前景1、快速繁殖某些稀有植物或有较大经济价值的植物 依靠自然条件在较短时间内繁殖稀有植物和经济价值较高的植物，受到地理环境和季节的限制，很难达到快速、高效的目的；特别对于在短时期内需要达到一定数量，才能创造应有价值的植物，时间就是效益，只有通过组织培养的方法才能满足这一要求。 用组织培养法繁殖植物，这是组织培养应用于生产的主要的和成效最大的实例。首先是在兰花上的成功应用。自Morel在1960年得到兰花组织培养苗后，很快应用于生产，形成了组织培养法繁殖兰花工业。 由于组织培养法繁殖植物的明显特点是快速，每年可以数以百万倍速度繁殖，因此对一些繁殖系数低，不能用种子繁殖的名特优植物品种的繁殖，尤为意义重大。 2、脱毒 植物中有很多都带有病毒，严重影响植物的产量和品质，给农业带来灾害。特别是无性繁殖植物，如马铃薯、草莓、大蒜、康乃馨等，由于病毒是通过维管束传导的，因此利用这些植物营养器官繁殖，就会把病毒带到新的植物个体上而发生病害。但是也证明感病植株并不是每个部位都带有病毒，如茎尖生长点尚未分化成维管束的部分，可能不带病毒。若利用组织培养法进行茎尖培养，再生的植株有可能不带病毒，从而获得脱病毒的苗，再用这种苗进行繁殖，则种植的植物就不会或极少发生病毒病。 所获得的脱毒苗一定要经过鉴定，确认不带病毒才能使用。使用组织培养法获得脱毒苗已经在草莓、葡萄、康乃馨等获得成功，产生明显的经济效应。 3、植物种质资源的保存、挽救濒于灭绝的植物 长期以来人们想了很多方法来保存植物，如储存果实，储存种子，储存块根、块茎、种球、鳞茎；用常温、低温、变温、低氧、充惰性气体等，这些方法在一定程度上收到了好的或比较好的效果，但仍存在许多问题。主要问题是付出的代价高，占的空间大，保存时间短，而且易受环境条件的限制。植物组织培养结合超低温保存技术，可以给植物种质保存带来一次大的飞跃。因为保存一个细胞就相当与保存一粒种子，但所占的空间仅为原来的几万分之一，而且在-193度的液氮中可以长时间保存，不像种子那样需要年年更新或经常更新。环境的不断变化使许多种类的植物面临着灭绝的危险，而且许多种植物已经灭绝，留给人类的只是一种遗憾。如何挽救这些植物，还有许许多多的动物，已成为世人关注的问题。实践证明，通过组织培养的方法可以使一部分濒危的植物种类得到延续和保存；如果在结合超低温保存技术，就可以使这些植物得到较为永久性的保存。其实，对大多数普通植物来说，用组织培养的方法保存其种质材料，也具有十分重要的意义。因为，人们现在无法预知哪些植物会面临灭顶之灾，或许今天看似繁茂的植物，明天就可能被沙漠、洪水、大火或战争吞没。 4、通过花药和花粉培养获得单倍体植株、缩短育种年限 通过花药和花粉组织培养可以获得单倍体植物，大大缩短了育种时间。使新品种的培育过程大大简化。 5、胚胎培养的应用 在远源杂交中，杂交后形成的胚珠往往在未成熟状态时，就停止生长，不能形成有生活力的种子，因而杂交不孕，这给远缘杂交造成极大困难。十九世纪二十年代末，Laibach用胚培养技术培养亚麻种间杂种胚，第一个获得了杂种植物，这一成功为在远缘时克服杂交不亲和的障碍提供了一项有用的技术。 这项技术发展至今，已经相当成熟，可以说多数植物的成熟或未成熟胚通过培养都可获得成功。幼胚培养已经可使5个细胞大小的极幼龄的胚状结构培养成植株。但胚珠培养的研究不多，单个胚珠培养尚存在许多问题，需作深化研究。 远缘杂交中，由于生理上和遗传上的障碍而不能杂交成功，可采用试管受精加以克服，即将母本胚珠离体培养，使异种花粉在胚珠上萌发受精，产生的杂种胚在试管中发育成完整植株。 用胚乳培养可获得三倍体植株，为诱导形成三倍体植物开辟了一条新途径。三倍体加倍后得到六倍体，可育成多倍体品种。 6、细胞融合 通过原生质体融合，可部分克服有性杂交不亲和性，而获得体细胞杂种，从而创造新种货育成优良品种。 7、培养细胞突变体的应用 培养细胞处在不断分生状态，它就容易受培养条件和外加压力（如射线、化学物质）的影响而产生诱变，从中可以筛选出有用的突变体，从而育成新品种。目前用这种方法已经筛选到抗病、抗盐、高蛋白、高产等突变体，有些已经用于生产。 8、用于遗传学、分子生物学、细胞生物学、组织学、胚胎学、基因工程、生物工程等 要揭开生命活动的秘密，需要多科学、多技术的相互配合，其中植物组织培养技术是不可缺少的，它为遗传学、分子生物学、细胞生物学、生物工程等提供了一种有效、快速的方法。因为要揭示生命的奥秘，首先要研究单个基因的作用，研究它在细胞内是如何组装的，如何与其它基因发生联系，如何表达和调控等。分离单个基因，对它DNA进行测序，再对其中的某些碱基实行突变，然后还需要将基因送到受体细胞当中，看表达情况，以确定其功能。接受基因的受体细胞要产生再生植株，就需要通过组织培养的方法才能实现。 9、利用组织培养的材料作为植物生物反应器 中国的中草药是一份人类宝贵的财富，但很多种中草药资源匮乏，产量不足，甚至濒于灭绝。如果能利用组织和细胞培养的方法在实验室内生产，不再依附于自然环境，不仅可以解决现有困难，而且可以通过筛选高产有效成分的细胞系，来提高其药用价值。比如用培养的人参悬浮细胞，来生产人参皂苷，已在日本等国家形成规模。利用培养的植物细胞和组织细胞作为生物反应器，也可以生产某些蛋白质、氨基酸、抗生素、疫苗等，如用生食蔬菜生产乙肝疫苗正在实验中。 10、用于其它未知科学的研究 现代科学发展非常迅速，很多现在预想不到的事情都有可能发生，新发明、新发现、新创造层出不穷，今天认为不可能的东西明天就可能变成现实。植物组织培养也同样具有许多尚未发掘出的潜力，说不定有一天人们会在三角瓶内种出大南瓜。 总之，现在的植物组织培养仍然处于发展阶段，远远没有达到它的高峰期，很多机理人们还没有搞清楚，它的潜力还远远没有发挥出来。相信在今后的几十年内，组织培养在我国将会有更大的发展，在农业、制药业、加工业等方面将会发挥更大的作用，创造出更大的经济效益。三、栀子花简介（一）栀子的功效与作用栀子花根的【功能主治】清热，凉血，解毒。治感冒高热，黄疸型肝炎，吐血，鼻衄，菌痢，淋病，肾炎水肿，疮痈肿毒。分类草药性：治妇女气血不和。广西中药志：治牙痛。四川中药志：开心窍，解心热，通小便。治黄疸，吐血，痢血，五淋，跌打。广州部队常用中草药手册：清热解毒，凉血泻火。治黄疸型肝炎，蚕豆黄，感冒高热，菌痢，肾炎水肿，鼻衄，口舌生疮，乳腺炎，疮疡肿毒。栀子花叶【功能主治】活血消肿；清热解毒。主跌打损伤；疔毒；痔疮；下疳 化学成分研究1.1 黄酮类化合物 栀子属植物中含有大量色素成分，如栀子素，现已分离得到栀子素A、B、C、D、E2。栀子素多黄酮类，极性小。1991年我国梁惠玲等从大黄栀子花中分得4，7-二羟基黄酮。1.2 环烯醚萜类 从栀子果实的醇提物中水溶性成分经活性炭和硅藻土除杂处理后，上硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇系统进行梯度洗脱，可将此类成分按极性大小依次洗下。Inouye等3从栀子中得到栀子苷即京尼平苷，羟异栀子苷，山栀子苷，栀子酮苷，鸡矢藤次苷甲酯，去乙酰基车叶草苷酸甲酯及栀子苷酸等多种化合物。王崇云等又从栀子的种子中分得京尼平-1-口-D葡萄糖苷。1.3 三萜类 秦国伟等3从栀子花的乙醇乙酯提取物中分得一种抗早孕作用的新三萜酸即栀子花乙酸，而后又分离到另一种新三萜酸即栀子花甲酸。1.4 有机酸酯类 20世纪90年代，国内外学者先后从栀子中分离出绿原酸、3，4-二咖啡酰-5-奎尼酸、3，4-二氧-咖啡酰奎尼酸、脂环酸苦藏红花酸、3-氧-咖啡酰-4-氧-芥子酰奎尼酸。1999年我国王钢力等5从大黄栀子果实中分离到双分子奎尼内酯。1.5 挥发油 用气相色谱-质谱联用法从栀子属植物的花、果实、叶中提取到的挥发性成分鉴定出85个化合物如乙酸苄酯、苯甲酸甲酯、橙花叔醇、反-2，4-癸二烯醛、棕榈酸、丹皮酚、反，顺-2，4-癸二烯醛、3，5，5-三甲基-2环乙烯-1-酮、亚油酸甲酯、菲、-芹子烯、2-十一烯酸、汕酸、2-戊基呋喃、顺-癸烯醛等6。1.6 其他成分 从栀子中分离得到多糖Gps3和Gps、4-甘露醇、-谷甾醇、29-烷、胆酸、熊果酸及各种微量元素，如Cr、Mn、Fe、Ni、Zn、Cu、Ca、Sb、Pb、Sn、Bi、Ba、Be等。药理研究2.1 对消化系统的作用 利用去氧胆酸钠胰管内注射，诱发大鼠急性胰腺炎，以琥珀酸脱氢酶(SDH)、酸性磷酸酶、细胞色素P450分别作为线粒体，溶酶体和微粒体内的标志检测急性胰腺炎时胰腺细胞器的功能变化及栀子的影响，并就组织学的变化做了同步观察。结果显示：急性胰腺炎时动物胰腺细胞内SDH明显下降，ACP释放率明显升高。栀子治疗组与正常接近，ACP释放率明显降低，P450增高。线粒体是细胞进行有氧代谢生成能量的场所，但急性胰腺炎后，胰腺细胞中线粒体功能发生障碍，用栀子治疗后，线粒体有氧代谢保持或恢复正常。胰腺自身化均是因溶酶体内大量酶释放而引起的，用栀子治疗后溶酶体释放减少，酶流动性接近正常。用栀子治疗后胰腺细胞P450含量增加，提示使细胞的合成、灭活和生物转化功能加强，表明栀子增强了胰腺炎时胰腺细胞的抗病能力7。此外，栀子还有明显的胆囊收缩作用，其果实中所含环烯醚萜苷类成分具有利胆作用。果实的醇提物和藏红花酸、藏红花苷可使胆汁分泌量增加，对大鼠于十二指肠给予京尼平苷，2 h后对胆汁分泌呈显著持续性促进作用。2.2 对心血管系统的作用 降压作用：栀子属植物果实的提取物不论口服、腹腔或静注给药均有降血压作用，且作用部位在大脑中枢。肌注藏红花酸0.01 mg/kg能减少喂饲胆固醇兔动脉硬化发生率，表明藏红花有防治动脉粥样硬化的作用。2.3 对中枢神经系统的影响2.3.1 解热作用 在以15%鲜酵母混悬液为致热剂，皮下注射大鼠颈背部所致的发热实验中，栀子生品解热作用最强，炒黄、炒焦品仍有较好的解热作用，但较生品明显降低，而炒炭、姜制品则较差。说明加热炮制可使栀子的解热作用明显降低，与目前临床常用生栀子治疗温热病高热症候的用药经验相吻合8。2.3.2 镇静作用 栀子生品及各种炮制品均有一定的镇静作用,可明显延长异戊巴比妥钠对小鼠的睡眠时间,且经炒焦、炒炭炮制后,镇静作用明显增强,在200 以下,有随温度升高作用增强的趋势9。此外,去羟栀子苷能抑制小鼠由醋酸等化学物质所引起的扭体反应,具有明显的镇痛作用10。2.4 抗过敏反应 在小鼠2，4-二硝基氟苯变应性接触性皮炎为迟发型超敏实验反应的模型中，以栀子的高、中、低剂量于致敏期及诱发期给药，通过观察鼠耳肿胀，耳部组织重量，显示能明显抑制ACD,且呈现出一定的量效关系11。2.5 抗菌和抗炎作用 栀子水浸液在体外抑制各种皮肤真菌;水煎液在体外则能杀死钩端螺旋体及血吸虫，并具有抗埃可病毒的作用。栀子生品的抗炎作用最强，可明显抑制巴豆油所致的小鼠耳壳炎症，降低醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性，但经不同方法炮制后，其作用逐渐降低，当温度超过175 时，抗炎作用消失9。其机制主要与栀子苷受热破坏分解，尤其是与京尼平苷的损失增大有关。此外，京尼平苷还有一定的治疗软组织损伤的作用2.6 毒副作用 京尼平苷及栀子水提物对小鼠和大鼠的急性毒性很弱，大剂量的山栀或其去羟栀子苷可能会诱发以P450丢失为损伤的肝损伤6。第二章 功能说明一、整个工程的功能整个工程的功能是要能够在预定的时间里培养出一定数目的苗子（100万），达到目标，实现市场化的要求。二、栀子组织培养实验室说明在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来没计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。实验室组成：化学实验室、洗涤菌室、无菌操作室（接种室）、培养室、细胞学实验室、其他小型仪器设备。（一）基本实验室 基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间，是组织培养实验所必须具备的基本条件。1、准备室（化学实验室）功能：又叫化学实验室，进行一切与实验有关的准备工作：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。要求：有20M2。要宽敞明亮、以便于放置多个实验台和相关设备，方便多人同时工作；同时要求通风条件好，便于气体交换；实验室地面应便于清洁，并应进行防滑处理。分类：分体式-研究性质实验室，分开的若干房间将准备室分解为药品贮藏室、培养基配制与洗涤室和灭菌室等，功能明确，便于管理，但不适于大规模生产。通间式-规模化实验室，准备室一般设计成大的通间，使试验操作的各个环节在同一房间内按程序完成。准备试验的过程在同一空间进行，便于程序化操作与管理，试验中减少各环节间的衔接时间，从而提高工作效率。此外还便于培养基配制、分装和灭菌的自动化操作程序设计，从而减少规模化生产的人工劳动，更便于无菌条件的控制和标准化操作体系的建立。设备：准备室应具备实验台、药品柜、水池、仪器、药品、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器等。 2、洗涤灭菌室功能：完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。要求：洗涤灭菌室根据工作量的大小决定其大小，本实验室面积控制在40M2。在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。准备1-2个洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿，地面应耐湿并排水良好。设备：水池、落水架、中央实验台、高压灭菌锅、超声波清洗器、干燥灭菌器（如烘箱）等。3、缓冲间功能：是进入无菌室前的一个缓冲场地，减少人体从外界带入的尘埃等污染物。工作人员在此换上工作服、拖鞋，戴上口罩，才能进入无菌室和培养室。进入无菌操作室前在此更衣换鞋，以减少进出时带入接种室杂菌。要求：缓冲间需5M2，可建在准备室外或无菌操作室外，应保持清洁无菌；备有鞋架和衣帽挂钩，并有清洁的实验用拖鞋、已灭菌过的工作服；墙顶用1-2盏紫外灯定时照射，对衣物进行灭菌。缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。设备：1-2盏紫外灯、水槽、实验台、鞋帽架、柜子、灭菌后的工作服、拖鞋、口罩。4、无菌操作室（接种室）功能：也叫接种室，主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序，是植物离体培养研究或生产中最关键的一步。要求：接种室宜小不宜大，一般78平米（10-20平米）即可，本实验室定为15 M2。其规模根据实验需要和环境控制的难易程度而定。要求封闭性好，干爽安静，清洁明亮，能较长时间保持无菌，因此不易设在容易受潮的地方；地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒；配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动；为便于消毒处理，地面及内墙壁都应采用防水和耐腐蚀材料；为了保持清洁，无菌室应防止空气对流。接种室要求在适当位置吊装12盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。 一般新建实验室的无菌室在使用之前应进行灭菌处理，处理方法是甲醛和高锰酸钾熏蒸，并需定期灭菌处理，还可用紫外线照射1-2h/周，或每次使用前照射10-30min。设备：紫外灯、空调、解剖镜、消毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针），实验台、和搁架，还有超净工作台和整套灭菌接种仪器、药品等。5、培养室功能：对接种到培养瓶等器皿中的植物离体材料进行控制条件下的培养，无论是研究性实验室还是生产性实验材料进行培养的场所。要求：约需10-20平方米左右，培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定，其设计以充分利用空间和节省能源为原则。本实验室定为20M2基本要求是能够控制光照和温度，并保持相对的无菌环境，因此，培养室应保持清洁和适度干燥；为满足植物培养材料生长对气体的需要，还应安装排风窗和换气扇等培养室的换气装置；为节省能源和空间，应配置适宜的培养架，并安装日光灯照明。研究用实验室，通常可根据光照时间设置成长日照、中日照、短日照培养室，也可以根据温度设置成高温和低温培养室，每一个培养室的空间不宜过大，便于对条件的均匀控制。进行精细培养类型如细胞培养和原生质体培养，可采用光照培养箱或人工气候箱代替培养室。 为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖铺设，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成，一般设5层，最低一层离地高约lOcm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高17m左右。培养架长度都是根据日光灯的长度而设计，如采用40W日光灯，则长I3m，30W的长lm，宽度一般为60cm。日光灯一般用40W，固定在培养架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯，距离在20cm，光照强度为2000-3000lx。 培养室最重要的因子是温度，一般保持在2027左右，具备产热装置，并安装窗式或立式空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70%80%为好，可安装加湿器。控制光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照10-16h，也有的需要连续照明。短日照植物需要短日照条件，长日照植物需要长日照条件。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源，这样不但可以节省能源，而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。在阴雨天可用灯光作补充。设备：培养架（控温控光控湿）、摇床、转床、自动控时器、紫外灯、光照培养箱或人工气候箱、生化培养箱、边台实验台用于拍摄培养物生长状况，除湿机、显微镜、温湿度计、空调等。 （二）辅助实验室 根据研究或生产的需要而配套设置的专门实验室，主要用于细胞学观察和生理生化分析等。 1、细胞学实验室 功能：用于对培养物的观察分析与培养物的计数，对培养材料进行细胞学鉴定和研究，由制片室和显微观察室组成。制片是获取显微观察数据的基础，配备有切片机、磨刀机、温箱及样品处理和切片染色的设备。应有通风柜和废液处理设施。显微观察室主要是显微镜和图像拍摄、处理设备。要求：明亮、清洁、干燥、防止潮湿和灰尘污染。设备：双筒实体显微镜、显微镜、倒置显微镜等。 2、生化分析实验室 功能：培养细胞产物为主要目的的实验室，应建立相应的分析化验实验室，随时对培养物成分进行取样检查。大型次生代谢物生产，还需有效分离实验室。第三章 土建工程一、组培实验室平面图水槽天平冰箱仪器药品柜工作台培养瓶架烘箱 化学实验室20M2培养室20M2 缓冲间5M2超净工作台培养架推拉门灭菌待用培养瓶架培养架培养架 无菌室15M2二、工程平面图（总面积40亩）保安室小花园办公大楼停车场花园园运动场小花园宿舍大楼大楼大门展览大厅组培大楼大门组培总仓库二楼化学室室无菌操作室缓冲室培 养 室一楼洗涤及灭菌室室组培基地驯化室温 室苗圃圃驯化室面积100，里面配有空调、加湿器、恒温恒湿控制仪、喷雾器、通风口、必要的杀虫剂等温室：面积200，有温度控制装置、通风口、杀虫工具及药剂。温室采用钢架塑料薄膜形式，薄膜每年更换一次。 第4章 组培方案方案一: 取一、二年生的幼芽，用自来水冲洗，在无菌条件下，先用75酒精浸泡30秒钟，然后置于01升汞溶液中处理10一14分钟，最后用无菌水冲洗56次。把经过消毒灭菌后的外殖体用无菌吸水纸吸干水分，将叶片一层层剥掉，露出芽点，接种到Ms+6一BA2 mgL+NAAO2 mgL(单位下同)的培养基上，pH值为60，培养温度2227，每天光照12小时，光照强度1 5002 000Ix，15天后芽点开始萌动并生长，35天左右茎段芽点诱导成0210 cm丛生芽数个。将诱导的丛生芽切下，接种于MS+6一BA30+NAAO2的培养基中，经过约30天的培养，腋芽基部开始形成35个丛生状的不定芽，而愈伤组织则形成长满大量不定芽的芽块，这些芽块可用于大量增殖。将30天左右，高约30 em的增殖芽从芽块上切下，转人生根培养基MS+6一BA20+NAA01培养15天左右，产生1030 cm长而粗壮的根，此时便可进行移栽，而且极易成活。 方案二: 取长度1012厘米一年生枝条，留叶24片。 将枝条先端削成马耳形，并将其浸入0.1%高锰酸钾溶液46小时后，取出插入清水中，入水为插条总长的1/3，用棕色瓶作容器，每隔12天换水1次；也可在木板或泡沫板上钻小孔，将插进洞孔，而后浮于水面，其中插穗长度的2/3需留在浮体上方，1/3插入水中。待长出新根以后，从较黑处移到亮处，根长到1.52厘米，单株根量有67根时，便可移栽盆内或地栽。 移栽 移栽基质选用3：1蛭石与干净湔沙搅拌均匀，将基质装人苗盘或做成苗床后，适量浇水，洗净苗根部的培养基，浅植于苗盘或苗床内2周内不需要喷雾和施肥适度遮光(遮光率约为25)，基质中的含水量控制在50左右。2周后小苗在基质中长出新的须根，可施01一05的氮磷复合肥，每4周1次，过4周后可定植，进入正常管理。方案三:外植体的采集、灭菌： 从田间或盆栽取回整株栀子，用自来水冲洗干净外表泥土。剥去植株外层叶片及叶鞘，切掉植株根部和大部分叶片。用75酒精浸泡15秒钟，再用01%升汞消毒15分钟，最后用无菌水冲洗45次。把材料纵切成两小块，用于接种。培养基和培养方法： 采用MS为培养基，附加蔗糖3、琼脂05以及不同种类和浓度的激素，PH58，培养温度281，光强2000Lux,每天光照1012小时。将前面的材料小块，接种在MS6BA35毫克升十NAAO2毫克升的初代培养基上，培养15天后，顶芽开始生长。为减少褐色分泌物的影响，20天后转移到同样的新鲜培养基上，57天后肢芽萌动生长。20天后每个外植体可长出34个小芽。小芽长至12厘米时切成单芽，转入继代培养基MS6BA4毫克升十IBAO3毫克升。30天后形成丛生芽，每丛有68个小芽。以后可多次分割继代增殖。将长约23厘米的单芽，转人生根培养基12MSNAA2毫克升十O3活性碳，15天后即可生根。30天后，组培苗株高710厘米，叶片35张，叶色浓绿，有粗牡白根46条，根长25厘米。炼苗一周后可移栽。移栽和栽培管理： 移栽前3天，打开瓶盖，让组培苗逐渐适应外界气候。小心地把苗从培养瓶中取出，洗净基部培养基，移栽于塑料筛或沙床中。栽培基质按塘泥、腐殖上、河砂、椰糖（或珍珠岩）2111混合配制。掌握移栽深度“深不埋心，浅不露根”，保持空气温度7080，移栽成活率达80以上，小苗移栽成活后即可上盆种植或大田栽植。栀子的大田种植宜选择阳光充足、排水良好、肥沃疏松的砂壤土地块。多施农家肥，防止清水。第五章 主要设备设备：（实验设备；无菌操作设备；灭菌设备；培养设备；接种工具等5个方面。也就是说，与一般的化学实验室相比，需要加上无菌和组织培专用的设备。）组培室最基本的实验设备指实验台、晾干架、药品柜、冰箱、烘箱、温箱、搅拌器、离心机、电炉、蒸馏器、天平、ph计、高压消毒锅、培养基分装器、软木塞打孔器，以及各种玻璃器皿，如烧杯、培养皿、三角瓶、量筒、滴管、移液管、针筒、定容瓶等。此外，还应当有培养与接种方面的设备与用具，如温湿度调节设备、日光灯、培养架、摇床或转床（供悬浮培养用）、各种类型的培养箱（可调节温度、湿度、光照等）、各种规格的三角瓶、圆瓶、方瓶、试管、镊子、剪刀、解剖刀、接种针、酒精灯等。第六章 资金预算对年产50万栀子组培苗的工厂化育苗其成本预算、成本构成进行了分析和计算，总计预算金额：为150万，除了固定的资金外，其余作为流动资金。第七章 市场前景一、栀子的前景由于栀子蓝色素与其他红黄品系的天然色素调和后能产生一系列蓝绿变化的色调，可以开发出多种颜色的实用色素。在制取栀子蓝的过程中，控制不同的反应条件还可生产出栀子红色素。由栀子黄、蓝、红三元色，可以调制出如栀子棣、紫等其他的颜色。因此，开发栀子色素资源具有广阔的前景。用栀子花采用浸提法可生产栀子花浸膏（浸膏得率），栀子花浸膏可广泛用于化妆品香料和食品香料。采用水蒸气蒸馏法可生产