CD44v9基因在恶性卵巢肿瘤中的表达及其临床意义＊.doc

CD44v9基因在恶性卵巢肿瘤中的表达及其临床意义中国肿瘤临床1999年第26卷第7期姚德生李力唐步坚张洁清古明华陈心秋摘要目的：探讨恶性卵巢肿瘤组织中CD44v9基因表达及其临床意义。方法：用RTPCR方法检测了41例恶性卵巢肿瘤、20例良性卵巢肿瘤和21例正常卵巢组织中CD44v9基因表达情况并分析相关的临床病理因素。结果：1)CD44v9基因表达阳性率恶性组明显高于良性组和正常组，良性组高于正常组；2)CD44v9基因表达在有转移者阳性率显著高于无转移者，转移灶阳性率高于原发灶；3)CD44v9阳性表达率与临床期别有一定关系，但与病理类型、组织学级别、预后无关。结论：1)CD44v9基因与肿瘤的发生、发展相关；2)CD44v9与卵巢恶性肿瘤的浸润和转移相关，可以作为预测肿瘤转移潜能指标。 关键词：CD44PCR卵巢肿瘤基因表达肿瘤转移CD44是一种细胞表面跨膜糖蛋白，有标准型（CD44s）和变异型（CD44v）二种，CD44v有10个亚型，分别用CD44v1CD44v10表示，有研究表明CD44v3、CD44v6参与了多种肿瘤的侵袭和转移13，CD44v9与肿瘤侵袭和转移的关系研究较少。本研究利用逆转录PCR(RTPCR)方法，研究了41例卵巢恶性肿瘤中CD44v9基因表达情况，并探讨其临床意义。 1材料与方法1.1研究对象分为三组：1)恶性卵巢肿瘤组41例；年龄1472岁，平均40岁，其中上皮性肿瘤33例（粘液性癌10例，浆液性癌11例，子宫内膜样癌2例，低分化腺癌10例）；非上皮性肿瘤8例（内胚窦瘤3例、无性细胞瘤2例、颗粒细胞瘤、未成熟畸胎瘤、睾丸母细胞瘤各1例），按FIGO1985年标准，临床期12例、期4例、期22例、期3例；2)良性卵巢肿瘤20例，其中粘液性瘤6例、浆液性瘤8例、畸胎瘤6例；3)正常卵巢组织21例，均来自子宫肌瘤同时行卵巢切除，病理证实无异常者。1.2标本的采集与贮存全部组织标本均在手术切除肿瘤10分钟内收集，分别取肿瘤原发病灶、转移灶各1g，分装于1.5mlEppendorff管后立即放入液氮中保存直至提取总RNA，同时取相应部位组织用10福尔马林固定以作常规病理检查。1.3疗效判断及随访按WHO1988年的四级评定标准，随访6个月20个月，没有失访及意外死亡。1.4RTPCR法组织总RNA的提取采用酸性异硫氰酸胍酚氯仿一步法4。cDNA合成采用美国Promega公司提供的逆转录cDNA合成试剂盒，按厂家操作规程合成，PCR扩增引物按文献57设计，由中科院上海生物工程研究中心合成，序列为上游引物：5GCAGAGTAATTCTCAGAGCTTCTCTACAT3；下游引物：5TTGATGTCAGAGTAGAAGTTGTTGGATGG3。TaqDNA聚合酶、dNTP购自上海Promega公司、分子量参照物pGEM7zf()HaeMarkers购自华美生物工程公司。每次反应均设计对照3个：1)空白对照：反应体系只加水；2)阴性对照：不加样品，余相同；3)质控对照：不加引物，余相同。PCR扩增用三步PCR法：90变性60秒，62复性30秒，72延伸30秒，30循环。PCR产物电泳用8PAG电泳，用银染方法染色。与Makers对照，以出现与目的基因碱基数（86bp）相同的区带为阳性。1.6数据处理率的比较用2检验。2结果2.1恶性、良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织中CD44v9基因表达(表1)表1恶性、良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织中CD44v9mRNA阳性表达情况类别总例数阳性例数P值恶性412048.8-良性20420.00.03正常21000.001P为恶性组与该组比较，良性组与正常组比较P=0.0478从表1可以看出CD44v9mRNA基因阳性表达率恶性组高于良性组（P=0.03）和正常组（P=0.001），良性组高于正常组（P=0.0478）。2.2CD44v9基因表达与临床、病理特征、预后关系CD44v9基因阳性表达率在有转移或侵袭者（期）显著高于无转移者（期）（P=0.008），转移灶显著高于原发灶（P=0.02），而CD44v9与病理类型、组织学级别、残留病灶大小无关（P0.05）见表2。CD44v9基因表达与近期疗效（CRPR）无关（P=0.25），见表3。表2CD44v9基因表达与临床、病理特征的关系类别总例数阳性例数P值临床期别期12216.7期291862.10.008病理类别上皮性331545.5非表皮性85(5/8)0.64组织学级别141227123107残留病灶(cm)2261038.52151066.70.08病灶原发灶412048.8 转移灶 23 18 78.3 0.02表3CD44v9基因阳性表达与近期疗效的关系类别nCRPRP值RTPCR()201365.0()211780.90.253 讨论 CD44基因蛋白是一种分布极广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，属于粘附分子，主要参与细胞细胞、细胞基质之间的特异性粘连过程，近年来的研究表明，在许多类型的肿瘤中CD44参与了肿瘤的侵袭和转移13。3.1CD44v9与卵巢肿瘤良、恶性的关系RTPCR结果显示CD44v9基因在恶性卵巢肿瘤中阳性表达率（48.4）显著高于良性组（20.0，P=0.03）和正常组（0，P=0.001），良性组高于正常组（P=0.0478），即肿瘤组高于正常组，提示CD44v9基因表达可能与卵巢肿瘤发生、发展、恶性行为有关，这与Dall对乳腺癌研究的结果相似7。3.2CD44v9与临床期别、病理组织学类型、预后的关系将临床期（无侵袭和转移）与期（有侵袭和转移）比较，CD44v9在有侵袭转移组表达阳性率均比无侵袭组高（P0.05），表明肿瘤细胞中的 cD44v9的出现与肿瘤的侵袭和转移有关，即有基因表达者更易发生侵袭和转移，更能加速病程的发展。CD44v9表达在不同的病理类型和组织学级别之间均无显著性差异，阳性表达率与残留病灶大小、近期疗效无关，这与文献79报道相符。3.3CD44v9与侵袭和转移的关系RTPCR显示有转移组的CD44v9表达阳性率均明显高于无转移组（P=0.008），转移灶的表达阳性率显著高于原发病灶（P=0.02），说明CD44v9与卵巢肿瘤发生侵袭转移有关，有表达者较无表达者更易发生侵袭和转移，这与文献报道的其它系统肿瘤情况相符79。其机理目前普遍认为是变异型CD44作为一种透明质酸的受体，能与细胞外间质及基底膜的透明质酸结合，调节细胞的运动及形态，同时“锚”定在宿主细胞外间质及基底膜上，CD44阳性细胞更易与毛细血管后小静脉中的高柱状内皮细胞结合，使肿瘤更易进入淋巴系统和循环系统，同时透明质酸降解产物还能启动血管的发生，为侵袭转移奠定基础，这些因素均能使CD44v9阳性肿瘤细胞获得更强的侵袭和转移能力7,8,10,11。本文课题受国家自然科学基金资助(编号39560081)作者单位：广西医科大学肿瘤医院（南宁市530021）参考文献1Wielenga VJ,Heider KH,Offerhaus GJA,et al.Expression of CD44 variant protiens in human colorectal cancer related to tumor progression.Cancer res,1993;53:47542Mayer B,Jauch KW,Gunthert U,et al.De novo expression of CD44 and survival in gastric cancer.Lancet,1993;342:10193Joensuu H,Klenip J,Toikkanen S,et al.Glycoprotein CD44 ex-pression and its association with survival in breast cancer.AmJPathol,1993;143:8674Chomczynski P,Saechif N.Singl-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.Anal Biochem,1987;162:1565Stamenkovic I,Amiot M,Pesando JM,et al.A lymphocyte molecule implicated in lymph node homing is a member of the cartilage link protein family.Cell,1989;56:10576Hofmann M,Rudy W,Zoller M,et al.CD44 splice variants confer metastatic behavior in rats:Homologous sequences are expressed in human tumor cell line.Cancer Res,1991;51:52927Dall P,Heider KH,Sinn HP,et al.Comparison of immunohisto-chemistry and RTPCR for detection of CD44-expression:a new prognostic factor in human breast cancer.IntJ Cancer,1995;60:4718Roye GD,Myers RB,Brown D,et al.CD44 expression in dys-plastic epithelium and squamous cell carcinoma of the esophagus.IntJ Cancer,1996;69:2549Streit M,Schmidt R,Hilgenfeld RU,et al.Adhesion receptor in malignant transformation and dissemination of gastrointestinal tu-mor.JMol Med,1996;74:25310Haynes BF,Telen MJ,