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实验二十八荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量 一 实验目的1 掌握荧光分光光度法的基本原理2 学会使用F 4500荧光分光光度计 二 方法原理 利用荧光分析方法 测定能产生荧光的物质含量 对不能产生荧光的物质 可以利用某些具有能发生荧光基团的有机试剂 与非荧光物质形成较纯的荧光化合物 然后进行测定 是一种高灵敏度的分析方法 定性依据 激发光光谱荧光光谱 定量依据 当 lc 0 05时 将括号项近似处理后 F 2 3 I0 lc Kc 定量方法 标准曲线法 配制一系列标准浓度试样测定荧光强度 绘制标准曲线 再在相同条件下测量未知试样的荧光强度 在标准曲线上求出浓度 比较法 在线性范围内 测定标样和试样的荧光强度 比较 荧光仪器组成 激发光源 样品池 双单色器系统 检测器 特殊点 有两个单色器 光源与检测器通常成直角 三 实验内容 一 硫酸奎宁激发光谱的绘制用0 05mol L硫酸溶液为参比溶液 用10mg L的硫酸奎宁溶液作为测定液 固定荧光波长为443nm 从300nm到400nm 每间隔10nm测定一次荧光相对强度 以波长为横坐标 荧光相对强度为纵坐标 在坐标纸上绘出激发光谱图 指出最大激发波长 max为345nm 二 硫酸奎宁荧光光谱的绘制用10mg L的硫酸奎宁溶液作为测定液 从380nm到600nm 每隔20nm测定一次荧光相对强度 以波长为横坐标 荧光相对强度为纵坐标 在坐标纸上绘出荧光光谱图 指出最大发射波长 max为445nm 三 直接比较法测定测定硫酸奎宁含量 式中 CX 待测液的浓
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