多囊卵巢综合征患者血管紧张素转换酶基因多态性及血清活性分析.doc

多囊卵巢综合征患者血管紧张素转换酶基因多态性及血清活性分析作者：李清友,刘鹏,徐闽,金伟新单位：066000 河北省秦皇岛市海港医院检验科(李清友、徐闽)，妇产科(金伟新)；河北省秦皇岛市第三医院检验科(刘鹏)【关键词】 多囊卵巢综合征多囊卵巢综合征(PCOS)主要表现为卵子的成熟和排卵障碍。近年来发现PCOS患者有在肾素血管紧张素系统(RAS)功能亢进现象。本文通过测定PCOS患者血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性及血清ACE水平，以进一步探讨ACE基因多态性与RAS的关系。1 资料与方法1.1 一般资料自2002年2月至2007年5月收集在我院产科就诊的PCOS患者102例，年龄1736岁，平均年龄27.9岁；其中未婚16例，已婚86例，不孕年限28年。同时选择月经周期正常的我院健康体检者101例作为对照组，年龄2036岁，平均年龄28.1岁；其中未婚20例，已婚并生育40例，2组年龄差异无统计学意义(P0.05)，既往均无糖尿病、高血压、心脏病及肝肾疾患，无输血、免疫治疗史。1.2 方法1.2.1 ACE引物及PCR扩增：PCR引物由Sangon公司合成。引物1：5’CrGCAGACCACTCCCATCCITTcr3’；引物2：5’GATGTGCCCATCACATICGTCAGAA3’ 。PCR反应体系2.5 μl，DNA2OO ng，Taq酶为Sangon公司生产。PTC100型扩增仪，PCR程序：94 5 min预变性，94 1 min、55 1 min、72 2 min，共30个循环；PCR产物行2Agrose，溴化乙锭染色，紫外灯下判断结果。1.2.2 血清ACE水平测定：在OLYMPUS AU400全自动生化分析仪上用宁波美康生物科技有限公司生产的ACE试剂采用速率法检测。1.3 统计学分析应用基因计数法计算基因频率，等位基因频率的比较采用χ2检验，组间均数比较用t检验，ACE采用t检验，P0.05为差异有统计学意义。2 结果2.1 基因型分布位于ACE基因的第16内含子一般长度为287 bp，插入/缺失(I/D)使ACE基因有3种基因型：II，ID和DD型，它的插入片段相当于一个Alu重复顺序，约287bp。若只扩增出90bp的片段为DD型，只扩增出490bp的片段为II型，若同时扩增出490bp和190bp二个片段则为ID型。2组ACE基因缺失多态性检测结果及等位基因出现频率2组比较，PCOS组DD型频率显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05),PCOS组型频率显著低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，ID型频率2组比较无统计学意义(P>0.05)。PCOS组型等位基因频率为0.39，D型等位基因频率为0.61，对照组分别为0.70、0.30，2组比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。2.2 血清ACE水平PCOS患者血清ACE活性平均值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。表1 2组ACE基因型及基因频率比较例(略)注：与对照组比较，P0.05，P0.013 讨论Rigat等1首先观察到ACE基因多态性与血清血管紧张素转换酶之间的关系。RAS是全身心血管活动的一种重要体液调节系统，人卵巢组织内也含有RAS，ACE是这一系统的关键酶，它使血管紧张素I(AngI)转换为Ang，Ang可能通过调节卵泡雌激素的浓度而参与卵巢功能的调节2，ACE受控于ACE基因，ACE基因位于人染色体17q23，其第16内含子中存在一段长度为287bp的插入片段，由于此片段的插入和缺失。产生(插入型)、DD(缺失型)及DI(杂合子)三种基因型。结果表明，D等位基因频率PCOS组显著高于对照组，与国内报道一致3；血清ACE水平明显高于对照组。由于D等位基因的存在与RAS功能亢进有关, 而RAS功能亢进，使血清血管紧张素转换酶水平增高,促进血管紧张素转化为Ang,较高的Ang 水平诱导卵泡过早成熟、增殖，形成过多的雄烯二酮，表现为睾酮增加，雌二醇下降，即促进高雄激素血症形成，引起卵泡发育障碍,从而导致卵泡在各阶段闭锁，成为多囊卵巢，因此患者RAS功能亢进参与多囊卵巢的病理形成过程。因此肾素血管紧张素系统中各指标的测定有望作为诊断的新依据，通过对ACE基因的检测，了解PCOS患者是否存在RAS功能亢进，可为临床选择ACE抑制剂进行治疗提供理论依据。该系统可能通过升高游【参考文献】 1 Rigat B，Hubert C，AlhensGelas F,et alAn irmertion/deletionpolymorphism in the angioterminIconverting enzyme gene accouting for half the variance of serum enzyme levelsJ Clin Invest，1990，86：13431349.2 Shuttleworth G，Pipkin FB，Hunter MGInvitro development of pigpreantral follicles cultured in a serumfree medium and the efect ofangiotensin .Reproduction，2002，123：807