甲状腺乳头状癌微血管密度与VEGF, PD2ECGF 表达的研究.pdf

肿瘤防治研究 2 0 0 3 年第 3 0卷第 5 期 3 8 5 甲状腺 乳头状 癌微 血管密度 与 VEGF P D EC GF表 达 的研 究 张矛 l 吴 凯 南2 S t u dy o n m i c r ov e s s e l d e ns i t y a nd e x pr e s s i ng o f VEGF PD ECGF o f pa pi l l a r y t hy r o i d c a r c i no m a ZH AN G M a o W U Ka i na n T h e Fi r s t Ho s p i t a l o f C h o n g q i n g Me d i c a l Un i v e r s i t y Wu h a n 4 3 0 0 3 0 C h i n a A b s t r a c t Ob j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e a n g i o g e n e s i s a n d e x p r e s s i o n o f VE G F P D E C GF o f P T C a n d d i s c u s s t h e c l i I l i c a l s i g n i f i c a n c e M e t h o d s De t e c t i o n t h e MVD an d e x p r e s s i o n o f VE GF PD E C GF i n 4 3 PTC 1 0 t h y r o i d a d e n o ma and 1 0 n o r ma l t h y r o i d t i s s u e b y i mmu n o h i s t o c h e mi s t r y R e s u l t s M D and e x p r e s s i o n o f VE G F P D E C GF o f P T Cwe r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h an t h o s e o f n o r ma l t h y r o i d t i ssu e P 0 0 5 MVD and e x p r e s s i o n o f VE GFand o f P TC w e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h an t h o s e o f t h y r o i d a d e n o ma P 0 0 5 MVD an d e x p r e s s i o n o f VEGF P D EC GF o f t h y r o i d a d e n o ma we r e s i g n i f i c a n t l y hig h e r t h an t h o 6 e o f n o r ma l t h y r o i d t i ssu e P 0 0 5 l y mp h B o d e me t a s t a s i s o f P T C we r e p o s i t i v d y e o r r da t i v e t h MVD and e x p r e s s i o n o f VE G F P 0 0 5 C o n c l u s i o n An g i o g e n e s i s p l a y s a n i mp o r t ant r o l e i n t h e d e v e l o p me n t o f P TC Ke y wo r d s P r C An g i o g e n e s i s M V D vEGF PD ECGF 摘要 目的研 究甲状腺乳头状癌 gr c 的血管生成及 VE GF P D E C GF的表达 并探讨其 临床意义 方法运用免疫组化 方法检 测 4 3例 P TC 1 0例 甲状腺 腺 瘤和 1 0例 正 常 甲状腺 组 织的 MV D 值和 VE GF P D E C GF的表达 结果 P T C的 MV D值和 VE GF P D E C GF的表达明显高于正常甲状腺组 织 P 0 0 5 P T C的 MVD值和 VE GF的表达明显 高于甲状腺腺瘤 P 0 0 5 甲状腺腺瘤的 MVD值 和 VE GF P D E C A 3 F的表达明显 高于正常甲状腺组 织 P 0 0 5 P T C的淋 巴结转移状 况与 MVD 值及 VE GF的表达成正相 关 P 0 0 5 结论血管生成在 P T C的发生 发展 中占有重要的地位 关 键词 P TC 血 管 生成 M VE GF P D E C A 3 F 中图分 类 号 I 3 6 1 文献 标 识码 A 文 章编 号 1 0 0 0 8 5 7 8 2 0 0 3 0 5 0 3 8 5 0 3 0引 言 甲状腺 乳头状癌 P TC 是最常见 的 甲状 腺恶性 肿瘤 血管生成对 于肿 瘤 的 发生 和发 展有 重要 的作 用 目前对 于 P T C血 管 生成 的研 究 尚少 本 实验 运用免疫组 化方 法 检测 了 P TC组织 的微 血管 密度 M 以及 血管 内皮生 长因子 VEGF 血小板源 性 内皮细胞生 长因子 P D EC GF 的表 达 并 对 它们 与 P TC生物学行 为的相关性及 临床意义进行探讨 1材 料 和 方 法 1 1 研究对 象 全 组 4 3例 均 系 我 院 普 外 科 1 9 8 4年 1月 至 1 9 9 1年 3月收治 的经手 术切 除治疗 病 理确诊 的初 发 P TC患者 男女 比例 为 1 4 4 年龄 中位数 3 7岁 1 7 6 9岁 选择 同期伴 有乳 头状增 生 的甲状腺 腺 收 稿 日期 2 0 0 2 1 1 2 8 修 回 日期 2 0 0 3 0 2 1 7 作者单位 1 4 0 0 0 1 6重庆 医科 大学附属 第一 医院外科 内分泌外科 2 重庆 医科 大学附属第一 医院内分泌外科 瘤和瘤旁正常甲状腺组织各 1 0例 1 2 试 剂 免疫组化 S P试 剂盒 抗 C D3 4单克 隆抗体 和抗 P D EC G F 单 克 隆 抗 体 购 自福 州 迈 新 公 司 抗 V E G F单克隆抗体和 D A B显色剂购 自北京中山生 物制 品公 司 1 3方法 将所 入组 的 P TC 甲状 腺腺 瘤 和正 常 甲状 腺组 织经 甲醛 固定 石蜡 包埋 5 厚 度进 行连 续切 片 分别行 HE和免 疫组 化染 色 HE染 色 行组 织学 分 级 J 免 疫组化采用 S P法 按 照 S P试 剂 盒说 明书 进行 MV D人工计数方法 由两位实验者分别在 Ol y mp u s 镜下 4 0 0倍 每 张 切 片选 择 3个 血 管 着色密集 区进 行计 数 单 个或 呈簇 状 棕黄 染 色定 为 一 条 血管 除外 血管腔 内有 8个 以上 红细 胞 者 并 求 出均 数 MVD n 1 n 2 n 3 3 结 果 取 整 数 VEGF P D E C GF参 照 Kl e 和 D 判 断标准 阳性细胞染成 棕黄 色 作 半定 量评 分 a 根 据染 色 维普资讯 CDD CDD CDD CDD 肿瘤防治研究 2 0 0 3年 第 3 0卷第 5期 的甲状腺 细胞所 占百分 比评 分 整 个 甲状腺 细 胞无 染色评 0分 染色的细胞 6 0 评 3分 b 根据 甲状 腺 细胞 染 色 的强度评分 无染 色评 0分 轻度 染 色评 1分 中度 染色评 2分 强染 色评 3分 最后评 分 a b 取 已知 VEGF P D E C GF阳性 的大肠 癌组织 作 阳性 对照 P B S代 替一抗作 阴性 对照 1 4统计学处理 定量 资料 M 两 组 间 比较 时用 t检验 多组 间比较 时 用 方 差 分 析 半 定 量 资 料 VE GF P D EC GF 两组 间 比较 时用 Ma n n Wh i t n e y秩 和检 验 多组 间比较 时用 Kr u s k N Wa l l i s 秩和检验 2结 果 2 1 C D 3 4 染色结果 C D 3 4 阳性 表 达 位 于 内皮细 胞 所有 标 本均 有 着 色 但染 色密度 不均匀 乳 头状结 构分枝 多 的区域染 色密度 较大 图略 癌组 以平均 值6 2 8 8 作 为分 界 M 6 2为低微血管密度组 MV D 6 2为高微血 管 密度组 各组 M 值显示 P 1 甲状 腺瘤 和正 常 甲状腺组织之 间 MVD值差 异有 显著性 P 0 0 5 P I E明显 高 于 甲状 腺 瘤 和 正 常 甲 状 腺 组 织 P 0 0 5 甲状腺 瘤 明显 高 于正 常 甲状 腺组 织 P 0 0 1 见表 1 不 同临床病理情况 P I E组织 MV D值 显示 有淋 巴结 转移 的 P 1 明显 高于 无淋 巴结转 移 者 P 0 o 1 男性 P I E的 MVD明显高于女性 P 0 0 5 其余临床病理情况无统计 学差异 见表 2 2 2 VEGF免疫组化结果 VE GF阳性表达位 于肿 瘤细胞及 间质细胞 的细 胞浆 和细 胞 膜 图略 各 组 VE GF的 表 达 显 示 P TC 甲状腺瘤和正 常 甲状腺组织之 间 VE GF的表 达 有显著性差 异 P 0 0 5 P TC明显 高 于 甲状腺 瘤和正常甲状腺组织 P 0 0 1 甲状腺瘤明显高 于正常 甲状腺 组织 P 0 0 5 见 表 1 不 同 临床 病理情况 P TC组织 VEGF的表达显 示 有淋 巴结转 移的 P T C明显高于无淋 巴结转移者 P 0 0 5 高 微血管密度组 P TC明显 高于低 微血 管密 度组 P 0 0 2 5 其余临床病理情 况无统计学差 异 见表 2 2 3 P D EC GF免疫组化 结果 P E CG F阳性表 达位 于肿 瘤 细胞 及 间 质细 胞 的细胞浆或细胞核 或同时出现 图略 各组 P D EC G F的表达 显 示 P 1 1 C 甲状 腺 瘤 和正 常 甲状 腺 组织 之 间 P EC GF 的 表 达 有 显 著 性 差 异 P 0 0 5 f r r C和 甲状 腺瘤 明显高 于正 常 甲状 腺组 织 P0 0 5 见 表 1 不 同 临床 病 理情 况 P TC组织 P D E C GF的表达显 示 高微 血 管 密 度组 P TC明显 高于低微血 管密 度组 P 0 0 5 其余 临床 病理情 况无统计学 差异 见表 2 3讨 论 Mv D是反 映肿 瘤诱 导血 管 生成 能力 的 主要指 标 对肿 瘤 的发 生 发 展 转 移 和 预后 有 重要 价 值 恶性 肿瘤 MVD 明显 高于 正 常组 织 5 I 本实 验 发 现 P 1 1 C中的 MV D 明显 高于正 常 甲状 腺组 织 P 0 0 1 反映了 P TC有 很强 的诱 导血管生成能力 表 1 各组 MVD值和 VE GF P D E C G F表达的比较 匿 越耄 蓬 壶 甄 维普资讯 CDD CDD CDD CDD 肿瘤防治研究 2 0 0 3 年第 3 0卷第 5期 3 8 7 以同期伴 有 局 部 乳头 状 增 生 的 甲状 腺 腺 瘤 作 为对 照 其乳头状结 构 与 P TC非 常 相似 即一 根 中心性 的纤维血管 蒂 外覆 肿 瘤 上皮 细胞 结 果 显示 P TC 的 MVD 明显高 于 甲状 腺腺 瘤 反映 了血 管生 成 在 良 恶性肿瘤 中 的不 同地位 VEG F又称血 管 通透 性 因子 vP F 是 已知 最 有力的促血管 生成 的 因子 提 高血 管 内皮 细胞 的通 透性 有利于血 管 内皮 细胞 的迁 移 和肿瘤 细胞 的转 移 大多数肿瘤细胞均表达高水平的 V E G F 其表 达量与肿瘤 的恶性程 度呈 正相 关 2 本 实验结 果 与 S o h等 6的发 现一 致 提示 VE GF对 P TC的形成 和维持 有重要作用 P D E CGF又称 为 胸 苷磷 酸化 酶 TP 能 催 化 胸苷降解成 胸腺 嘧啶和 l 一 磷 酸 脱 氧核糖 因为 胸苷 能抑制 内皮 细胞 生长 而 脱 氧核糖 具 有促 血 管生成 活 性 所 以 P D E C GF通过 减 少 胸苷 浓 度 和 增 加 脱 氧核糖浓度来 促进 血 管生 成 在多 种恶 性肿 瘤 中 P D E C GF的表达 及 活性 明 显 强 于周 围非 瘤 组 织 Us u k i 等 7 j 发 现 培 养 的 甲状 腺 癌 细 胞 株 可 产 生 P D E C GF 而后者能促 进 内皮 细胞有 丝分 裂 Dh a r 等 8 j 曾报道 P D E C GF在分 化型 甲状 腺癌 中有增 强 的表达 本实验 结 果提示 P D E C GF在 甲状 腺 肿瘤 的形成 和维持 中有重 要作用 如上所述 MVD的明显增 高 VEGF P D E C GF 的过度表达 反 映 了 P 1 有 强 烈 的血 管生 成 活动 提示血管生成 对 P TC有重要作用 S a i t o等 9发 现 进 展 期 胃癌 的 VE GF 表 达 与 MVD有关 Dh a r 等 8 j 曾指 出高 分化 甲状 腺癌 P D EC G F的表达 与 MVD明显相关 本实验 发现 P 1 中 的 MVD与 VE GF的表达 明显相关 P 0 0 2 5 与 P D E C GF的 表达 也 有 相 关性 P 0 0 5 提 示 P TC中 VE GF是较重要 的血管生成 因子 P D E C GF 也参 与 P TC 的 血 管 生 成 但 Us u k i 7 J 指 出 P D EC G F可能 在血管 生成 的早期 对重塑微 血管有 重要 作 用 此 后 其 它血管生成 因子的作用才可能表 现得 更 显著 P r r C的颈 淋 巴结 转 移 率 很 高 有 时 原 发 灶 很 小 但颈部淋 巴结 已广泛转 移 甚 至可成 为本病 的第 一 临 床 症 状 本 组 病 例 的 颈 淋 巴 结 转 移 率 为 7 2 1 这一 生物 学行 为 的机 理仍 未 阐明 目前认 为 肿瘤 细胞 的淋 巴结转 移可能有两 条途径 通过 血液循环进入 淋 巴管 肿瘤 的血管生 成可能 促进淋 巴结 转 移 1 0 J 通过 肿 瘤 对 淋 巴 管 的 直接 入 侵 肿瘤 在血 管生成 的同时 可 能伴随着 淋 巴管生成 新生 的淋 巴管 可 成 为 肿 瘤 淋 巴结 转 移 的途 径 加 在乳腺癌 食管癌 膀胱癌等恶性肿瘤中 MVD与 淋 巴结转 移有密 切关 系 本实 验研 究 发现 有淋 巴 结转移 P T C的 MV D明显高于无淋 巴结转移者 其 差别 的 意 义非 常 显著 提 示 MVD 的增 加 在 P 1 的淋 巴结 转移诊 断 中有 重 要 的意义 Oh t a等u 0 j 通 过实验发现 有淋 巴结 转移 的肺癌 VE GF mR NA 表 达 水 平 较 无 淋 巴 结 转 移 的 肺 癌 明 显 增 高 提 示 VE GF有可 能作 用 于淋 巴 内皮 细胞 导致 淋 巴管生 成 Kl e i n等 2 报 道 有淋 巴结 骨 肺转 移的分化 型 甲状腺 癌 VE GF表达 高于 无转 移 的 甲状 腺癌 并 建 议把 VEGF高 水 平 表达 作 为 分 化 型 甲状腺 癌 有 转 移危险性 的标 志 本实 验结 果 显示 伴 淋 巴结 转移 P 1 的 VE GF有 明显增强 的表达 提示 VEGF可 能 促进 P 1 的淋 巴结转移 本实验 对 P D E C GF与 甲 状腺癌 淋 巴结转 移 的关 系进行 了分析 未发 现二 者 有 明 确 的 相 关 性 综 上 所 述 P 1 的 MVD 和 VEG F表达都 与淋 巴结转 移 密切 相关 提示 血 管 生 成 可能促进 P TC淋 巴结转移 针对血管生成 的抗肿瘤 治疗正成 为 国际上 研究 的热点 有 的已开始 应 用于 临床 血 管 生成 在 P T C 的形成和淋 巴结转移中有重要作用 抗血 管生成的治 疗手段有希望 成为治疗 P 1 的一种新 的有效方法 参 考文献 1 刘科 曾镕 李树玲 甲状腺乳头状癌病理组织学亚型及其临床 意义 J 中国肿瘤临床 1 9 9 4 2 1 1 3 7 3 9 2 K l e inM P i c a r d E Vig n a u d J M e t a1 V a s c u l a r e n d o t h e l i a l g r o wt h f a c t o rg e ne a n d p r o t e i n s t r o n g e xp r e s s i o n i n t h y r o i d i t i s a n d t h y r o i d c a c i mm a J J E n d o e r i n o l 1 9 9 9 1 6 1 1 4 1 4 9 3 D h a r D l Ku b o t a H K o t o h T e t a1 T u m o r v a s c u l a r i t y p r e d i c t s r e c u r r e n o in d i f f e r e n t i a t e d t h y r o i d c a r c i n o ma J A m J S u r g 1 9 9 8 1 7 6 5 4 4 2 4 4 7 4 A k s l e nL A L i v o l s i V A I n c r e a s e d a n g i o g e n e s i s in p a p i l la r yt h y r o i d c a r c i n o m a b u t l a c k o f p r o g n o s t i c i mp o r t a n c e J H u r n P a t l L 2 0 0 0 3 1 4 4 3 9 4 4 2 5 G o l d e n b e r gJ D P o r t u g a l L G We n i gB L e t a1 We l l dif f e r e n t i a t ed t h y r o i d c a r c i n o ma s p 5 3 m u t a t i o n s t a t us a n d m i e m v e s s e l d e n t y J H e a d N e c k 1 9 9 8 2 0 2 1 5 2 1 5 8 6 S o b E Y D u h Q Y S o b h i S A e t a 1 V a s c u l a r e n d o t h e l i al g r o wt h f a c mr e x p r e s s i o n i s h i g he r i n dif f e r e nt ia t ed t h y r o i d c a n c e r t h a n in n o r m a l o r b e n i g n t h y r o i d J J C l i n E n d o c r i n o l Me t a b 1 9 9 7 8 2 1 1 3 7 4 1 3 7 4 7 7 Us u k i K H d d i n N E Mi y a n mo K e t a1 P r o d u c t i o n o f p h t d e t de r i v ed e ndo t he l i al c e U g r o wt h f a c t o r b y n o r ma l a nd t r a n s f o r me d h t r n a n c e l l s in c d t u r e J P r o c N a t