2,6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量.doc

成 都 医 学 院 教 案 首 页2012-2013年第2学期2010级预防医学本科专业 任课教师：杨威特课程卫生学检测技术题目2，6二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量学时讲授实验5练习行课时间2013 年6 月7日 第 1 至5节课次第8次教 材自编教材教 具电子课件教 学目 的要 求掌握：定量测定维生素C的原理和方法熟悉：微量滴定法的基本操作技术教学重点难点及其解决方案重点：定量测定维生素C的原理和方法难点：滴定终点的判断解决方案：通过实验让学生了解定量测定维生素C的原理和方法，并能采取过滤等方法排除影响判断滴定终点的干扰因素。参 考资 料人民卫生出版社出版，梁康主编卫生理化检验技术华中科技大学出版社出版，运珞珈、朱业湘主编卫生理化检验与微生物学检验实 施情 况小 结教研室主任签名： 2013 年 月 日成 都 医 学 院 教 案 续 页教学过程、内容及时间分配教学方法与手段2，6二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量一、目的1学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法。2掌握微量滴定法的基本操作技术。二、原理维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。维生素C是具有L系糖构型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。维生素C（抗坏血酸）具有很强的还原性，能将染料2，6一二氯酚靛酚还原成无色，而抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸。氧化型2，6一二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，当用此染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸未全部氧化前，则滴下染料立即被还原成无色，一旦溶液中的抗坏血酸全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时为滴定终点，即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被氧化完全，从滴定时2，6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。三、材料、试剂与器具（一）新鲜的水果（二）试剂 1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。 2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。4、0.01% 2,6 一二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6一二氯酚靛于300毫升含有104克 NaHCO3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。（4约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。（三）器具1、锥形瓶（50100毫升）2、移液管（1毫升，10毫升）3、容量瓶（100毫升）4、微量滴定管（3毫升或5毫升）四、操作步骤（一）提取水洗净新鲜的水果，用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎，加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤，弃去最初几毫升滤液。（二）滴定1、标定2，6一二氯酚靛酚溶液的浓度：量取标准维生素C溶液1ml,加9ml 1%草酸加入50ml锥形瓶中，同时量取10ml草酸加入另一个50ml锥形瓶中作空白对照，用已标定的2，6一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。记录所用的毫升数，计算每毫升2，6一二氯酚靛酚所能氧化维生素C的毫克数（K）。2、样品的测定：取50ml锥形瓶2个，分别加入滤液10ml，用已标定的2，6一二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min，空白滴定方法同前，记录两次滴定所得的结果，求平均值。（三）结果计算根据实验数据计算出每100g样品的维生素C含量：维生素C（mg/100g样品）=100式中：V1为滴定样品液所用去染料体积（ml）; V2为滴定空白所用去染料体积（ml）; V3为样品测定时所用滤液体积（10ml）; V为样品提取液的总体积； K为1毫升染料能氧化维生素C的量（mg）; W为称取样品重量(g )。五、注意事项1.滴定时速度要尽可能快，因样品内一般都含有一些能将2，6一二氯酚靛酚还原的其它物质，尽管它们还原比染料的能力一般较维生素C弱。2.滴定所用染料要在14ml 之间，否则须增减样品量或将提取液适当稀释。3.抗坏血酸易溶于水，也极易被氯化，故提取抗坏血酸时，须抑制组织中氧化酶活性。2%草酸可抑制该酶，1%草酸则不能，三氯醋酸、偏磷酸、盐酸有同样功效。Fe2+能还原二氯酚靛酚，如用醋酸（8%即可）则Fe2+不会很快与染料起作用。4.样品提取液应避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化。5.在生物组织内和组织提取物内，抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。它们同样地具有维生素C的生理作用，但不能将2，6一二氯酚靛酚还原脱色。6.在生物组织提取物中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成困难。应加入适量白陶土乳液进行脱色过滤后再滴定。六、实验报告保留每次测定的有效数据，计算样品维生素