我国六城市性病高危人群生殖支原体感染状况的分子流行病学研究.docx

我国六城市性病高危人群生殖支原体感染状况的分子流行病学研究我国六城市性病高危人群生殖支原体感染状况的分子流行病学研究中华皮肤科杂志 1999年第3期第32卷 论著作者：骆丹梁国钧胡春梅黄澍杰谢瑞亭孙郎炎朱文元徐文严单位：骆丹朱文元谢瑞亭210029南京医科大学第一附属医院皮肤科；梁国钧徐文严中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所；胡春梅广东省东莞市慢性病防治院；黄澍杰广东省江门市皮肤病防治所；孙郎炎常州市人民医院皮肤科关键词：生殖支原体感染流行病学【摘要】目的对我国部分地区不同类型的性病人群进行生殖支原体(Mg)感染状况检测分析，以明确Mg感染在非淋菌性尿道炎中的可能致病作用。方法采用两对引物的聚合酶链反应技术，根据Mg粘附蛋白基因及支原体种属内核糖体基因序列设计引物，收集广东、昆明、上海、南京、常州等地性病门诊和(或)性罪错者的泌尿生殖道分泌物标本。结果性病高危人群的Mg?DNA检出率明显高于正常体检组(2=7.822,P0.01)，其中广东性病门诊及昆明性罪错人群的Mg?DNA检出率明显高于南京、上海、常州等地两种人群的检出率(2=8.536,P%26lt;0.01及2=5.885,P%26lt;0.05)。未查到其他相关病原体者亦可查及Mg?DNA；有Mg感染者亦可同时感染其他微生物，如衣原体、解脲支原体等；有尿道炎症状病例中Mg?DNA的检出率高于无尿道炎症状者(2=11.667,P%26lt;0.01)。结论性病高危人群中存在生殖支原体的感染，在不同地区不同类型人群组中Mg感染率有一定差异。Molecular Epidemiologic Study of Mycoplasma Genitalium Infection in High Risk Populations of STDs from Six Cities in ChinaLUO Dan, LIANG Guojun, HU Chunmei, et al.Department of Dermatology, First Affiliated Hospital, Nanjing Medical University, Nanjing 210029【 Abstract】Objective To detect Mycoplasma genitalium (Mg) infection in high risk populations of STDs from six cities in China and try to clarify the possible role of Mg in the pathogenesis of non? gonococcal urethritis.Methods Polymerase chain reaction (PCR) technique based on 2 pairs of primer for Mg? Pa(adhesion protein) and 16S? rRNA (Mycoplasma genera) was used to detect Mg infection. Urogenital specimens of different high risk populations or urethritis patients of STDs were collected from Guangdong, Kunming, Shanghai, Nanjing, and Changzhou areas.Results The positive detection rate of Mg? DNA in high risk populations of STDs was significantly higher than that of normal group(2=7.822, P0.01). The positive detection rates in STD clinics from Guangdong and promiscuous persons from Kunming were higher than those detected from Shanghai, Nanjing and Changzhou areas(2=8.536, P 0.01 and 2=5.885,P%26lt; 0.05). Mg? DNA could be detected in those patients without other relevant pathogens. Some patients simultaneously infected both Mg and other microbes, such as Chlamydia trachomatis and/or Ureaplasma urealyticum. The positive Mg? DNA detection rate in patients with urethritis symptoms was higher than that without the symptoms (2=11.667, P 0.01). Conclusion Mg infection exists in high risk populations of STDs in China, and Mg infection rate is different among different high risk groups.【 Key words】 Mycoplasma genitalium Infection EpidemiologyTully于1981年首次从2例非淋菌性尿道炎(NGU)患者泌尿生殖道分泌物中分离出2株生殖支原体(Mg)，后经有关学者发现此支原体是与人类尿道炎、宫颈炎、盆腔炎感染相关的一种新型支原体。Mg的培养非常困难，直至建立分子生物学技术后才使有关疾病的诊治以及流行病学研究成为可能。本研究在获得Mg分离培养成功以及采用多对引物扩增MgDNA的基础上，开始对国内部分地区不同类型的性病高危人群进行Mg感染状况的检测分析，以期探讨Mg的可能致病作用以及与其他微生物的感染有无相互关系。现将结果报道如下。材料与方法(一)标本来源：性病门诊患者511例，其中男274例，女237例，年龄1358岁，平均年龄29.4岁。性罪错者共235例，其中男130例，女105例，年龄1555岁，平均23.5岁。性伴数17人不等。标本分别来自广东、上海、南京、昆明、常州。其中淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体均阴性的标本数共182份。南京及江门两地有症状NGU标本116份，无症状的NGU标本64份。正常体检对照56例，男30例，女26例，年龄1735岁。(二)方法：取材方法及PCR方法见文献。(三)统计学方法：采用2检验进行统计学处理。结果1.性病高危人群中Mg?DNA的检测：表1显示性病门诊患者与性罪错者间Mg感染率经卡方检验差异无显著性(2=0.49,P0.05)，但与正常人群比较，STD高危人群Mg感染率明显升高，差异具有高度显著性(2=7.822,P0.01)。对广东、南京、常州等地性病门诊标本的Mg?DNA进行检测发现，广东地区阳性检出率达20.69(54/261)，与其它地区相比，差异具有高度显著性(2=8.536,P%26lt;0.01)；南京、上海、常州地区的阳性检出率间差异无显著性，分别为11.46(11/96)、10.71(9/84)及11.43(8/70)。对昆明、上海两地性罪错者的泌尿生殖道分泌物进行检测发现，昆明地区Mg?DNA检出阳性率为19.2(24/125)，明显高于上海地区的阳性检出率8.18(9/110)，其差异具有高度显著性(2=5.88,P%26lt;P0.05)。2.不同性别的高危人群Mg?DNA检测：表2显示两种性别间Mg?DNA的检测结果，性病门诊标本及性罪错组的Mg?DNA阳性检出率在两性别间差异无显著性(2=0.06,P0.05)。经卡方检验表明这组高危人群两性别间Mg?DNA检出率差异亦无显著性(2=0.12,P0.05)。3.淋球菌(NG)、衣原体(Ct)、解脲支原体(Uu)阴性时的Mg?DNA检测：182份来自南京、常州、东莞、江门性病门诊标本，其他病原体如Ct、NG及Uu均为阴性，此时检出Mg?DNA32例，阳性检出率为17.58，经卡方检验，长江以南某些地区与广东某些地区的Mg感染率无差异(2=1.98,P0.05)(表3)。对东莞地区性病门诊中合并或未合并NG、Ct、Uu感染者检出后发现，NG、Ct或Uu阴性的几组标本中，Mg?DNA检出率虽然分别高于NG、Ct或Uu阳性者，但经统计学处理差异亦无显著性。4.有无尿道炎症状对Mg?DNA检出率的影响：表4显示南京、江门地区性病门诊中有尿道炎表现与无尿道炎表现患者分泌物标本的Mg?DNA检出率，结果显示有症状者Mg检出率明显高于无症状者(南京2=5.17,江门2=5.31,P均0.05)。将116例有TABLEBORDER检测对象受检例数阳性数阳性率()STD门诊患者5118216.05性罪错者2353314.04正常人对照组5611.79合计80211614.46表1性病高危人群与正常人对照组生殖支原体感染率的比较检测对象受检例数据阳性数阳性率（）STD门诊患者5118216.05性罪错者2353314.04正常人对照组5611.79合计80211614.46表2不同性别高危人群生殖支原体DNA的检测检测对象检查例数阳性数阳性率()STD门诊患者男2744516.42女2373715.61性罪错者男1301914.62女1051413.33合计男4046415.84女3425114.91表3淋球菌、衣原体、解脲支原体均阴性的性病门诊标本生殖支原体DNA检测地区标本数阳性数阳性率()南京44613.64常州32412.50东莞621219.35江门441022.73合计1823217.58表4性病门诊有无尿道炎症状的患者生殖支原体DNA检测比较地区分组例数阳性数阳性率()2P南京有症状无症状503410120.02.975.170.05江门有症状无症状663318227.276.675.310.05症状与67例无症状的Mg检测结果合计进行统计比较证明，差异具有高度显著性(2=11.68,P0.01)。讨论Mg的分离培养非常困难，故自1981年Tully首次从2例男性NGU中分离出2株Mg后，至今很少报道，直至建立核酸探针及PCR技术后，才使有关Mg的流行病学研究、致病性研究及临床治疗等研究得以进一步发展。我们虽有分离培养成功的报告，但深切体会到该种支原体在复苏传代过程中极易丢失或死亡，且培养时间需30120d左右，因此单以培养法作为Mg感染诊断的唯一指标很难满足临床明确病因诊断及随访治疗的需要，因而不能有效控制Mg的感染及传播。本文检测了511份STD门诊标本，阳性率达16.05，性罪错人群235例，阳性率为14.04，均在国内外报道范围(527)之内。根据赵季文等培养结果，高危人群的总分离率仅为3.52，而PCR检测结果显示感染率可高达15.42，提示仅用培养法作为筛检Mg感染的实验诊断手段，可能将低估了Mg在国内的流行率。为此本研究亦初步探索PCR技术在Mg?DNA检测及诊断中的应用价值。Mg?Pa(粘附蛋白)为Mg的结构及功能蛋白，与该支原体粘附宿主生殖上皮细胞有关，甚至可能与其致病性有关；根据Mg?Pa基因序列设计的引物可在Mg标准株及临床标本中扩增出相应的DNA片段，在Mg种支原体中相对特异而稳定。Jensen提供的16S?rRNA引物为原核生物中高度保守的基因序列，因此在支原体属中亦相对稳定，两者的特异性试验表明引物特异性较高，从而保证了临床应用中的可靠性及准确性。就Mg感染的地区分布而言，广东及昆明两地仍较其他地区明显增高，分别为20.69及19.20，这可能与我国整个性病的地区分布有关，如按1995年报道，以中南地区为最高，广东省的发病率为128.19/10万，而河北省发病率仅为2.34/10万，此结果提示在性病高发地区可能亦有Mg支原体的流行。将东莞地区性病门诊NG、Ct、Uu分别为阳性及阴性的Mg?DNA检测结果对比起来，可以看出虽然Mg?DNA的检测率在NG、Ct及Uu3组中较NG、Ct及Uu者为高，但经2检验分析，此差异无统计学意义，此结果可能与检测样本数量较小有关，也可能表明Mg的感染及检出并不受其他病原微生物存在与否的影响，此与Horner及Jensen的报道与观点相符。再结合表3的结果还可说明，高危人群不仅可同时感染Mg和其他微生物，并且Mg还可单独存在于STD高危人群的泌尿生殖道内。表4的结果进一步说明Mg可能与尿道炎有关，因为南京及江门两地有症状患者标本的Mg检出率均明显高于无症状者。此两地的标本多来自于辗转求医、反复治疗过的性病门诊就诊者，说明Mg可能引起慢性、持续性或复发性NGU的临床表现。本研究结果反映了以下几点：Mg在我国高危人群的检出率比正常体检组为高；NG、Ct、Uu阳性与阴性者的标本均可检出Mg，说明Mg存在可能与其他微生物存在与否无关，而且也可能是很多淋病后尿道炎的病因之一；Mg在NG、Ct、Uu均阴性者有一定的检出率以及Mg在有症状的尿道炎标本内检出率较高，亦可说明Mg不仅在NGU，而且在非特异性尿道炎中可能具有一定的相关作用。参考文献1 Tully JG, Tylor? Roinson D, Lol RM. A newly discovered Mycoplasma in the human urogenital tract. Lancet, 1981,1288? 12912 Taylor? Robinson D, Gilroy CB, Hay PE. Occurrence of M.genitalium in different population and its clinical significance. Clin Infect Dis, 1993,17(Suppl 1):66 68.3赵季文，骆丹，王婉云，等.高危人群生殖支原体分离培养的初步报告.中华皮肤科杂志，1998，31：147149.4骆丹，胡春梅，梁国钧，等.聚合酶链反应技术检测支原体感染.临床皮肤科杂志，1998，27：216218.5 Hooton