不同提取方法对柑橘皮总黄酮及其抗氧化活性的影响

收稿日期 基金项目 湖南省教育厅科学研究项目 作者简介 吴梅青 女 教授 硕士 研究方向 天然药物的研究与应用 不同提取方法对柑橘皮总黄酮及其抗氧化活性的影响 吴梅青 陈丹 李俊雅 湘潭医卫职业技术学院 湖南 湘潭 摘 要 研究不同提取方法对柑橘皮总黄酮及抗氧化活性的影响 选用碱溶酸沉 回流 超声 微波和水提等 种 提取方法 测定 种不同的提取液中总黄酮的含量 采用 普鲁士蓝两种方法测定其抗氧化活性 并分析总 黄酮含量和抗氧化活性之间的关系 在对总黄酮的测定中 结果如下 回流提取法 超声提取法 微波提取法 水提法 碱溶酸沉法 回流提取总黄酮含量大于其它几种方法 与其他 种提取方法进行对比 差异非常明显 而与超声提取比较差异不明显 抗氧化的结果显示 种提取方法所得的黄酮提取液均有较强 的抗氧化活性 不同提取方法提取柑橘总黄酮抗氧化性的效果依次为 超声提取法 微波提取法 回流提取法 水提法 碱溶酸沉法 相关性分析发现 总黄酮的含量与抗氧化活性呈一定的正相关 结果表明 不同的提取方 法会对柑橘黄酮含量以及抗氧化活性产生一定的影响 各提取液中黄酮含量和抗氧化活性之间具有正相关的关 系 关键词 柑橘 黄酮 不同提取方法 抗氧化活性 中图分类号 文献标识码 柑橘果实历来是我国传统的中药材 其中的黄 酮类物质含量丰富 其黄酮主要存在于柑橘属植物 果实的外皮中 研究表明 黄酮类化合物有多重生 物学作用 如抗炎抑菌 抗氧化 降血糖 降血脂 抗 第 期 总第 期 中 国 林 副 特 产 年 月 癌 抗肿瘤及增强免疫力等作用 其安全 无毒 已在 医药 食品加工等方面得到广泛应用 近年来国 内外有关柑橘黄酮的报道日渐增多 柑橘黄酮以其 特有的生理活性逐渐引起人们的重视 目前市场上 已有大量以天然黄酮物质作为膳食补充剂制成的各 种保健品和食品 柑橘黄酮作为食品添加剂具有广 阔的发展前景 本研究以湖南产柑橘皮为研究对 象 参考相关文献资料 采用碱溶酸沉法 水提法 回 流提取法 超声提取法 微波提取法等 种提取方法 提取柑橘中总黄酮 分析不同提取方法对柑橘总黄 酮含量及其抗氧化活性的影响 旨在为更加深入研 究柑橘黄酮的作用提供科学依据 材料与仪器 材料 蜜桔 购买于湖南湘潭某农贸市场 产地为常德 石门 芦 丁 对 照 品 中 国 食 品 药 品 检 定 研 究 院 二苯代苦味酰基 自由基 梯 希爱 上海 化成工业发展有限公司 铁氰化钾 广州 化学试剂厂 三氯乙酸 国药集团化学试剂有限公 司 邻苯三酚 上海迈坤化工有限公司 无水乙醇 等为分析纯 超纯水 仪器 双光束紫外分光光度计 上海天美科 学仪器有限公司 分析天平 十万分之一 赛多利斯 多功能粉碎机 永康市小宝电器 有限公司 数控超声波清洗仪 昆山超 声仪器有限公司 方法 原料预处理 将蜜桔洗涤后剥皮 再蜜橘皮放在 烘箱中 烘干至恒重 采用多功能粉碎机进行粉碎 过 目 筛 放干燥器中 备用 芦丁标准曲线的绘制 精密称定芦丁对照品 置 量瓶 中 加一定量 的乙醇溶解 冷却至室温 再加 的乙醇至刻度 得 的芦丁对照 品溶液 精密量取对照品溶液 分别 置 容 量 瓶 中 各 加 乙 醇 补 足 至 各加 亚硝酸 钠 溶 液 摇 匀 静 置 再加 硝酸铝溶液 摇匀 静置 再 氢氧化钠试液 再加 乙醇至刻度 摇匀 静置 以空白试剂作对照液 用双光束 紫外分光光度计在 的波长处测定吸光度 以 对照品质量浓度为横坐标 吸光度为纵坐标得到标 准曲线 如图 所示 图 芦丁标准曲线 供试品溶液的制备 水提取液的制备 精密称定 项下样品 约 置于 圆底烧瓶中 加 水 直 火加热回流提取 放冷至约 抽滤 重复提取 次 过滤 合并滤液 放置过夜 沉淀完全 减压抽 滤 沉淀用蒸馏水洗涤 次 抽干 将沉淀物转移到 表面皿中 于 恒温真空干燥至恒重 用 的 乙醇溶解并定容至 容量瓶中 备用 平行试 验 次 回流提取液的制备 精密称定 项下样 品约 置 的圆底烧瓶中 加 的乙醇 回流提取 次 提取时间分别为 乙醇 用量分别为 合并 次回流提取液 定容 至 的容量瓶中 备用 平行试验 次 碱溶酸沉法液的制备 精密称定 项下 样品约 置于干净的烧杯中 加已煮沸的 硼砂水溶液 加热至沸腾 并在搅拌条件下加 石灰 乳 调 值 在 并 保 持 该 值 煮 沸 趁热用 层纱布过滤 药渣同法再操作 次 合并 次滤液 并用浓 调 值约为 搅 拌 放置过夜使沉淀完全 减压抽滤 沉淀用蒸馏水 洗涤 次 抽干 将沉淀物转移到表面皿中 于 恒温真空干燥至恒重 用 的乙醇溶解并定容 至 容量瓶中 备用 平行试验 次 超声提法液的制备 精密称定 项下样 品约 置于 的三角瓶中 用 的乙醇 在超声功率 及超声温度 的水浴中 提取 同法再操作 次 合并滤液 浓缩后得 提取液 用 的乙醇定容至 容量瓶中 备 用 平行试验 次 年 中 国 林 副 特 产第 期 微波提法液的制备 精密称定 项下样 品约 置于 的三角瓶中 加入 的 乙醇溶液 采用微波辅助提取 微波辐射功率 微波辐射时间 趁热过滤 同法再操 作 次 合并滤液 回收乙醇 用 的乙醇定容至 容量瓶中 备用 平行试验 次 总黄酮含量的测定 精密吸取 上述总黄酮提取液置 容 量瓶中 按 项下方法测定 处的吸光度 对照标准曲线 按照 公式计算柑橘皮中总黄酮 的含量 总黄酮的含量 式中 为提取物总黄酮含量 为总样 品体积 为样品重量 为测定的样品体 积 为稀释倍数 抗氧化活性的测定 不同方法黄酮提取物对 自由基清除 能力的测定 对 自由基抗氧化活性的测定 参照文献 方法并稍做修改 方法如下 精密称取 标准品 用无水乙醇溶解并定容至 配成 自由基溶液 现配 现用 在具塞试管中分别加入 不同提取方 法提 取 的 柑 橘 皮 黄 酮 提 取 液 再 加 入 自由基溶液 摇匀 静置 用 无水乙醇代替样品和用 的 乙醇混合后 用紫外 可见分光光度计在 处 分别测定吸光度值 空白对照组是以 无水乙醇代替样品 用紫外 可见分光光度计在 处分别测定吸光度 自由基的清除 率按 公式计算 清除率 不同方法黄酮提取物对 还原能力的测 定 采用普鲁士兰法测定不同方法黄酮提取物还原 的能力 方法如下 在 具塞试管加入 不同提取方法浓度不同的提取液 后 依次加入 磷酸盐缓冲液 铁 氰化钾 混合均匀后于 浴中 反应 后迅速冷却 然后分别加入 三 氯乙酸 混匀 离心 后 取 上清液 加入 蒸馏水和 三氯化 铁 混匀后于 处测定其吸光值 反应 物吸光度增大说明还原能力增强 结果与分析 不同提取方法提取柑橘皮黄酮的比较 种提取方法中柑橘总黄酮的含量见表 从 表 中可以看出回流提取的总黄酮大于其它几种方 法 含量为 其次为超声提取法 含量为 微 波 法 为 水 提 法 为 碱溶酸沉法最低 为 回流 提取法 与超 声 波 提 取 相比黄酮 含 量 差 异 不 显 著 而与水提和碱溶酸沉提取之间黄酮含 量差异显著 以上数据表明 柑橘黄酮 易溶于乙醇 醇提法有利于柑橘黄酮的溶出 表 种提取方法所得总黄酮含量比较 提取方法 黄酮含量 碱溶酸沉法 水提法 回流提取法 超声波提取法 微波提取法 抗氧化活性的测定 不同方法黄酮提取物对 自由基的清 除能 力 将 种 不 同提取方法的黄酮 提取液按 的方法测定不同方法提取的提取液对对 自由基的清除作用 结果如图 所示 从图 中可以看出 超声提取液中总黄酮对 自由基 清除率最高 为 碱溶酸沉法提取液中总黄 酮对 自由基清除率最低 为 回流提 取液为 微波提取液为 水提取液 为 种提取方法在实验浓度清除效果 超 声提取法 微波提取法 回流提取法 水提法 碱 溶酸沉法 超声提取液 回流提取液和微波提取液 的抗氧化能力与碱溶酸沉提取液和水提液的抗氧化 能力相比有显著差异性 注 碱溶酸沉法 超声提取法 回流提取法 微波 提取法 水提取法 图 不同提取方法对 自由基的清除能力的影响 不同方法黄酮提取物对 还原能力的测 年 吴梅青等 不同提取方法对柑橘皮总黄酮及其抗氧化活性的影响第 期 定 将 种不同提取方法的黄酮提取液按 的 方法测定提取液中总黄酮对 的还原能力 结果 如图 所示 由图 可以看出 超声提取液中总黄 酮对 的还原能力最高 碱溶酸沉法提取液中总 黄酮对 的还原能力最低 种提取方法在实验 浓度对 的还原能力 超声提取法 微波提取法 回流提取法 水提法 碱溶酸沉法 超声提取 液 微波提取液和回流提取液对 的还原能力相 比较 差异性不显著 注 碱溶酸沉法 超声提取法 回流提取法 微波 提取法 水提取法 图 不同提取方法对 还原能力的影响 不同提取方法黄酮含量与抗氧化活性间的 相关关系 采用 做统计分析计算相关系数 总黄酮的含量与对 自由 基 的 清除率 和对 的还原能力有一定的相关性 相关系数分别为 和 而对 自由基的清除率和 对 的还原能力之间有较强的相关性 相关系数 达到 讨论 从测定结果看 不同提取方式柑橘总黄酮的效 率依次为 回流提取法 超声提取法 微波提取法 水提法 碱溶酸沉法 不同提取方式提取柑橘总 黄酮抗氧化性的效果依次为 超声提取法 微波提 取法 回流提取法 水提法 碱溶酸沉法 不同提 取方式总黄酮含量与抗氧化性有一定的相关性 由 于不同提取方法破坏决柑橘皮细胞的程度也不相 同 其有效成分的含量也不同 造成抗氧化性的能力 也不太相同 无论是从有效成分的角度还是抗氧化 能力的角度考虑 回流提取法和超声提取法都是比 较理想的提取方法 种不同方法提取得到的柑橘提取液中 回流 提取法对柑橘总黄酮的提取率最高 但是从抗氧化 能力方面看 超声取液中总黄酮的抗氧化能力最高 可能与超声波浸提过程中低温提取有利于保护有效 成分等优点有关 因此 柑橘黄酮进行提取方法 筛选时 要综合考虑黄酮的提取率及其抗氧化活性 参考文献 吴梅青 刘捷频 陈丹 柑橘黄酮抗氧化和抗肿瘤作用的 研究进展 亚太传统医药 李小勇 霍喜东 杨自勇 等 不同方法提取国槐叶黄酮及 其抗氧化活性研 究 食品工业科技 万利秀 肖更生 徐玉娟 等 柑橘皮黄酮纯化前后抗氧化 性比较研究 食品科学 林瑶 谭冰 韦文荣 等 不同提取法对广金钱草总黄酮抗 氧化活性的影响研究 右江民族医学院学报 张佳赫 韩丽琴 不同提取方式对葛根总黄酮抗氧化反应 的影响 安徽农业科学 櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐 歡迎訂閲 年