《流式细胞术讲义》PPT课件.ppt

流式细胞术的血液学应用 北京协和医院血液科汪玄 流式细胞术的概念 流式细胞术 Flowcytometry FCM 是集计算机技术 激光技术 电子技术 流体力学 细胞化学 细胞免疫学等多门高新技术与方法为一体的现代细胞分析技术 它以流式细胞仪 Flowcytometer 为工具 在单细胞水平上对大量细胞进行高速 每秒计数可达1000 10000个细胞 准确 多参数的定量分析或分选 纯度可达99 以上 已成为现代骨髓血细胞学研究中最先进的分析技术 流式细胞术与PNH的诊断 原理 阵发性睡眠性血红蛋白尿症 PNH 是一种获得性基因突变所致的克隆性疾病 其异常的血细胞膜糖化肌醇磷脂 锚 GPI anchor 连接蛋白如CD59 CD55等表达明显减低或缺乏 导致对补体的敏感性增强而产生溶血性贫血 样本要求 EDTA抗凝血或骨髓3ml每天上午送检收费 CD55 CD59280元CD59140元 临床诊断值 CD59阳性的红细胞大于等于95 CD59阳性的中性粒细胞大于90 流式细胞术与白血病免疫分型 免疫分型原理 流式细胞术 FCM 白血病免疫分型是利用荧光染料标记的单克隆抗体 McAb 检测相应抗原 经过多参数分析 测定白血病细胞的细胞膜 细胞浆和细胞核的免疫表型 由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度 FCM分析白血病免疫表型时测量细胞数量一般是在10000 50000个细胞之间 而且快速 特异 准确 重复性好 能区分细胞的系列 划分其分化 发育阶段等 对白血病的诊断与分型 治疗方案选择与预后判断 发病机制研究等有重要价值 样本要求 肝素抗凝骨髓3ml 或外周血 每天上午送检收费 70元 每个单抗 临床常规检测12个单抗 干 祖细胞标志 CD34 CA133髓系标志 CD33 CD13 CD11b CD15 MPOB细胞相关标志 CD10 CD19 CD20 CD22 CD23 CD79a CyIg SmIgT细胞相关标志 CD2 CD3 CD5 CD7 CD4 CD8 常用白血病免疫分型荧光素标记单克隆抗体组合及其意义 AML免疫分型 T ALL免疫分型 B ALL免疫分型 FCM IM诊断混合型白血病 流式细胞术测定发现的双系列或多系列表达的结果较多 但双表型白血病不一定就是混合型 理由如下 混合型白血病诊断 应根据形态 免疫 遗传 分子生物学等综合判断 属双系列 双克隆 双表型 单克隆 系列转换型 需考虑到抗原 单抗的多向性 CD4 CD7 CD10 CD38 CD56正常血细胞随分化成熟 各系列血细胞的免疫标志特性逐步规律化 白血病细胞的分化发育却丧失严格的规律性 lineageinfidelity 与免疫表型的阶段性 differentiationasynchrony 因而出现异常抗原表达 或过高或过低或不表达或交叉系列表达 设门方案 采用CD45 SSC设门法 优于FSC SSC设门法 CD45其表达程度在不同细胞各异 淋巴细胞 单核细胞 成熟粒细胞 原 幼细胞 而红细胞不表达 SSC在成熟粒细胞 单核细胞 原 幼细胞 淋巴细胞 红细胞 临床原 幼细胞群定量 按照新的WHO分型标准 对初发病者 原 幼细胞占总细胞数20 以上即可判为白血病 对于临床原 幼细胞群定量应以原 幼细胞群的细胞数为分母 对于临床原 幼细胞群定性比定量更重要 白血病免疫分型病例分析 病例1梁丽琴女性24岁异常表型中 CD10 CD34 CD22 CD38 CD19 HLA DR 结论 表型符合Pre B ALL 白血病免疫分型病例分析 病例2王丙午男性68岁异常表型中 CD33 CD13 CD15 CD11b HLA DR CD34 CD19 结论 表型符合AML M2 白血病免疫分型病例分析 病例3冯亮男性33岁异常表型中 CD34 CD10 CD22 CD19 CD33 CD13 CD15 HLA DR 结论 表型符合双表型白血病 流式细胞术与造血干 祖细胞计数 原理 造血干 祖细胞存在于骨髓和外周血中 形态与淋巴细胞相似 用普通形态学方法难于识别 但根据造血干 祖细胞的特征 可用FCM多参数分析血液 骨髓和浓缩白细胞悬液中造血干 祖细胞的数量 对血液病 恶