rL-H5补充说明.doc

疫苗内包装标签及使用说明一、禽流感新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）使用说明书【兽药名称】通用名 禽流感新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）商品名 无英文名 Avian Influenza， Newcastle Disease Recombinant Vaccine，Live（rL-H5 Strain）汉语拼音 Qinliugan Xinchengyi Chongzu Erlian Huoyimiao（rL-H5 Zhu）【主要成分与含量】 含禽流感重组新城疫病毒rL-H5株至少106.0EID50/羽。【性状】 微黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。【作用与用途】 用于预防鸡的H5亚型禽流感和新城疫。【用法与用量】 点眼、滴鼻、肌肉注射或饮水免疫。首免建议用点眼、滴鼻或肌肉注射，按瓶签注明的羽份，用生理盐水或其他稀释液适当稀释。每只点眼、滴鼻接种0.1ml（含1羽份）或腿部肌肉注射0.2ml（含1羽份）。二免后加强免疫如采用饮水免疫途径，剂量应加倍。推荐的免疫程序为：新城疫HI母源抗体降至4log2以下或23周龄时首免（肉雏鸡可提前至1014天），首免3周后加强免疫（肉鸡间隔可缩短至2周）。以后每间隔810周或新城疫HI抗体滴度降至4Log2左右，肌肉注射、点眼或饮水加强免疫一次。【不良反应】 一般无可见不良反应。【注意事项】 （1） 保存与运输时应低温、避光；疫苗稀释后，放冷暗处，应在2小时内用完，且不能与任何消毒剂接触；剩余的稀释疫苗消毒后废弃。（2） 点眼、滴鼻免疫时应确保足够1羽份疫苗液被吸收；肌肉注射免疫应采用7号以下规格针头，以免回针时液体流出；饮水免疫时，忌用金属容器，饮用前应至少停水4小时。（3） 被免疫雏鸡应处于健康状态。如不能确保上呼吸道及消化道粘膜无其他病原感染或炎症反应，应在点眼或滴鼻免疫同时采用肌肉注射免疫，每只鸡接种总量为1羽份。（4） 本疫苗接种之前及接种后2周内，应绝对避免其他任何形式新城疫疫苗的使用；与鸡传染性法氏囊病、传染性支气管炎等其他活疫苗的使用应相隔57天，以免影响免疫效果。（5） 应在当地兽医正确指导下使用。【规格】 500羽份/瓶【包装】 10瓶/盒【贮藏】 -20以下保存，有效期暂定为18个月。【批准文号】 【生产企业】哈尔滨维科生物技术开发公司 地址：黑龙江省哈尔滨市南岗区马端街427号邮编：150001电话：045182734102 82554294传真：045182761926仅在兽医指导下使用二、禽流感新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）内包装标签禽流感新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）500羽/瓶 生产批准文号：兽药生字（2005）090012112 批 号： 生产日期：【作用与用途】 用于预防鸡的H5亚型禽流感和新城疫。【用法与用量】 点眼、滴鼻、肌肉注射或饮水免疫。【贮藏】 -20以下保存，有效期暂定为18个月。【生产企业】哈尔滨维科生物技术开发公司关于禽流感新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）的补充说明一、重组二联活疫苗（rL-H5株）的研制背景世界动物卫生组织（OIE）规定的A类传染病中，只包括两种禽类烈性传染病，分别为高致病性禽流感和新城疫。高致病性禽流感同时具有极其重要的公共卫生意义，H5亚型高致病性禽流感的防控已经成为国际社会面临的巨大挑战。禽流感新城疫重组二联活疫苗株rL-H5系采用我国自行选育、免疫效果良好的一株新城疫病毒La Sota弱毒疫苗为载体，采用国际先进的负链RNA病毒反向基因操作技术，研制的新型重组新城疫病毒活载体弱毒疫苗，用于H5亚型高致病力禽流感和新城疫的免疫预防。重组新城疫病毒是2001年后国际上逐渐发展起来的新型疫苗载体技术。新型双价弱毒疫苗是国际上率先推向生产实际的负链RNA病毒活载体疫苗。新型疫苗研发过程涉及的疫苗株毒株、基因等所有材料全部来自国内，疫苗载体平台的建立完全独立完成，拥有全部独立知识产权。新型疫苗与现有疫苗相比具有巨大优越性。活毒疫苗可同时诱导体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫，是所有疫苗形式中最为理想的免疫方式。新型疫苗真正实现一种疫苗免疫预防两种重大疫病。我国新城疫疫情复杂，发病死亡率高，对养禽业造成的损失巨大，新生雏鸡都要进行新城疫免疫，每年使用羽份在一百亿以上。新型疫苗推广使用后，可以使高致病性禽流感和新城疫的免疫一次完成，收到一种疫苗预防两种重大禽病的效果。新型双价疫苗与现有禽流感疫苗相比，安全性更高、使用更方便，对新生雏鸡副反应小；不仅可以通过注射方式使用，还可通过饮水、喷雾、滴鼻、点眼等多种方式免疫，使免疫工作大为简单、方便、快捷，大幅度提高免疫效率，提高免疫密度，提高免疫质量。新型疫苗更适用于肉禽的免疫，对肉质不会产生任何影响。新型高致病性禽流感疫苗生产成本低廉，可以有效节约防疫经费；可冻干保存，有效保存期长达两年以上，疫苗产品占用空间与灭活疫苗相比大大减少。二、重组二联活疫苗株rLH5构建及其生物学特性重组新城疫病毒疫苗株rLH5的外源H5亚型禽流感病毒HA抗原基因源自中国大陆分离鉴定的H5N1亚型高致病力禽流感病毒分离株，并且人工删除了裂解位点4个连续的碱性氨基酸。HA基因在LaSota新城疫病毒基因组中的插入位点为基因组中P基因和M基因之间的非编码区，并引入了额外的转录终止（GE）和转录起始（GS）信号序列，重组后的基因组核苷酸仍然保持6的倍数。重组新城疫病毒rLH5接种910日龄SPF鸡胚，平均滴度介于每ml 109.2 EID50 109.5EID50。重组新城疫病毒疫苗株rLH5按照OIE推荐标准进行了致病性的评估。rLH5的鸡胚传代F1代次的SPF鸡胚平均致死时间（MDT）大于120小时、对6周龄SPF鸡经脉内致病指数（IVPI）及F蛋白裂解位点相邻氨基酸（核苷酸）序列与野生型亲本LaSota疫苗株完全一致，而对新生雏鸡的脑内致病指数（ICPI）由亲本LaSota的0.360.4下降为0，说明病毒重组后被进一步致弱，完全符合新城疫弱毒疫苗株缓发型低致病力特征，对新生雏鸡高度安全；将重组病毒rLH5小剂量剂量接种910日龄SPF鸡胚，连续传代18代次，MDT、IVPI、ICPI及及F蛋白裂解位点相邻氨基酸（核苷酸）序列仍保持不变。重组新城疫病毒疫苗株rLH5在SPF鸡胚传代20代次，仍然保持外源HA抗原蛋白的稳定表达及免疫原性基本不变。根据回归感染和同居感染及其病毒分离和滴定结果，重组新城疫病毒疫苗株rLH5感染SPF雏鸡后，其复制主要局限在呼吸道、肺脏和消化道低水平一过性复制，并且水平传播能力很低。重组新城疫病毒rLH5在野外的抵抗力或生存能力与新城疫LaSota弱毒株相似。三、重组二联活疫苗株rLH5对SPF鸡的免疫原性重组新城疫病毒疫苗株rLH5按1106EID50最小推荐剂量，滴鼻、点眼途径一次免疫1周龄SPF雏鸡，新城疫特异HI抗体滴度在免疫后23周达到高峰，平均水平介于3264，HI抗体平均水平大于16至少保持12周以上；免疫后第2周和第12周，分别采用新城疫标准强毒北京株（F48E9）104ELD50剂量肌肉注射进行致死攻击，免疫鸡均获得完全保护，不发病，不死亡。H5亚型禽流感特异HI抗体滴度在推荐剂量免疫后34周达到高峰，平均水平介于3264.，HI抗体平均水平大于16至少保持12周以上；免疫后第3周和第12周，以H5高致病力禽流感按102LD50剂量鼻腔感染进行致死攻击，免疫鸡均获得完全保护，不发病、不死亡、攻毒后第3、5、7天喉头及泄殖腔拭子病毒分离检测均为阴性。禽流感H5亚型重组新城疫病毒载体双价活疫苗rLH5以106EID50推荐免疫剂量经点眼滴鼻途径免疫1周龄SPF雏鸡，分别于免疫后第1和第2周，以104ELD50的新城疫强毒北京株F48E9（肌注）及100LD50的H5亚型高致病力禽流感病毒（鼻腔）进行致死攻击。结果，免疫后1周雏鸡在新城疫和H5亚型禽流感攻击后均为部分雏鸡存活；免疫后2周，新城疫和H5亚型禽流感强毒攻击后则全部健康存活。因此，推荐免疫剂量下，SPF雏鸡对新城疫及H5亚型禽流感的有效保护免疫形成时间均为2周。初次免疫后第1314周相同剂量途径进行二次免疫，可产生显著的加强免疫效应，二次免疫后2周，新城疫HI抗体和H5禽流感HI抗体平均水平分别达到128512左右，远远高于初次免疫后抗体反应高峰水平。四、重组二联活疫苗株rLH5推荐免疫剂量重组二联活疫苗rLH5分别以102EID50、103EID50、104EID50、105EID50及106EID50不同免疫剂量经点眼滴鼻或肌肉注射途径免疫2周龄SPF雏鸡，免疫后2周，采用100 LD50剂量新城疫F48E9强毒株经肌肉注射进行致死攻击，结果103EID50、104EID50、105EID50及106EID50免疫鸡全部健康存活；免疫后3周，采用100 LD50剂量H5亚型高致病力禽流感病毒经鼻腔途径感染进行致死攻击，结果104EID50、105EID50及106EID50免疫鸡全部健康存活。根据试验结果，并参照我国现有新城疫La Sota弱毒疫苗质量标准，确定禽流感H5亚型重组新城疫病毒载体双价活疫苗推荐使用剂量为106EID50。五、现地商品雏鸡推荐免疫程序及其免疫效果评估商品雏鸡普遍存在新城疫母源抗体，可对禽流感H5亚型重组新城疫病毒载体双价活疫苗的免疫效果产生干扰。为此，选择新城疫及H5禽流感HI母源抗体平均水平分别为32和8的12日龄商品蛋雏鸡、新城疫及H5禽流感HI母源抗体平均水平分别为16和1的商品蛋雏鸡的19日龄商品蛋雏鸡, 经点眼滴鼻途径首免rLH5，剂量为1x106EID50，并分别于免疫后1周、2周和3周加强免疫（每组1520羽），同时每周检测新城疫及H5禽流感特异HI抗体。根据抗体水平检测结果，19日龄初免效果优于12日龄初免；加强免疫可有效提高商品鸡抗体反应水平，间隔3周加强免疫效果显著优于间隔1周和2周。加强免疫后34周，随着雏鸡免疫系统的发育完善，再次加强免疫可显著提高抗体应答水平。根据试验结果，商品蛋雏鸡推荐新城疫母源抗体HI滴度降至16以下或23周龄期间，实施初免，初免后间隔3周实施加强免疫；鉴于商品肉雏鸡母源抗体衰减速率快于商品蛋雏鸡，暂定初免时间可适当提前至1014日龄，暂定加强免疫间隔为2周左右。高水平的新城疫母源抗体、疫苗免疫或自然感染反应形成的循环抗体可对rLH5免疫效果产生明显的干扰影响，而H5亚型禽流感HI抗体的存在，对疫苗加强免疫效果不产生明显干或影响。免疫过rLH5的鸡群，当新城疫HI抗体水平降至1632以下时，rLH5再次免疫可发挥显著的加强免疫作用。鸡群经过rLH5活毒疫苗12次免疫后，一般可形成确实的免疫记忆。当鸡群存在高水平新城疫循环抗体（如平均HI滴度在64以上时），采用现有H5亚型禽流感重组禽痘病毒或载体疫苗或H5N1灭活疫苗（Re1），均可产生极其显著的加强免疫效应，诱导高水平的H5禽流感HI抗体反应。采用rLH5、H5N1重组禽痘疫苗或灭活疫苗加强免疫，无论新城疫还是H5亚型禽流感HI抗体反应水平，育成鸡和成年鸡均显著高于低日龄雏鸡。肉雏鸡由于遗传特性及其免疫系统发育尚未完善，H5禽流感疫苗免疫后一般难以诱导较高水平的HI抗体反应。六、现地商品雏鸡免疫效果评估初次免疫后23周，新城疫和H5亚型禽流感HI抗体应出现部分转阳；间隔3周一次加强免疫后2周，新城疫HI抗体应达到较高水平，禽流感HI抗体应大部转阳；二次加强免疫后12周，免疫鸡群新城疫HI抗体和禽流感HI抗体平均水平应分别达到32和16以上。 重组二联活毒疫苗rLH5与灭活疫苗相比的优势在于可诱导全面的粘膜免疫和细胞免疫反应。商品鸡群对活毒疫苗免疫反应的个体差异远远大于灭活疫苗免疫。单纯检测HI抗体反应不能全面反应其免疫保护效果。鸡群经过rLH5确实的初次免疫和加强免疫，免疫后的一段时间内，鸡群中部分个体尽管HI抗体水平较低，但对H5亚型高致病力禽流感攻击仍然可提供有效的免疫保护。七、免疫方法及途径重组二联活疫苗rLH5接种途径可以是滴鼻、点眼或肌肉注射。可采用无菌生理盐水或新鲜冷开水稀释冻干疫苗至适当体积。初次免疫及二次免疫应尽可能采用滴鼻、点眼途径，以确保有效的粘膜免疫形成；二次免疫后的加强免疫，为加快免疫速度，方便操作，可选用肌肉注射途径；滴鼻、点眼免疫时操作应缓慢，同时每羽雏鸡或成鸡吸收的疫苗稀释液应不少于0.1ml，以确保疫苗液体接触到足够的呼吸道粘膜面积。八、弱毒疫苗与禽流感野毒株的鉴别诊断方法血清学监测。目前现地大量血清样品的主要采用基于重组表达禽流感病毒N蛋白抗原的AGP方法及基于灭活H5禽流感病毒的HI试验。rLH5免疫后可以产生针对H5禽流感HA抗原的