液体菌种培训教材(四)液体菌种的制作过程及方法.doc

液体菌种培训教材(节选四)2010年4月10日三、液体菌种的制作过程及方法（一）试管种的生产：液体菌种对试管的纯度要求很高。所以要自己会做试管种。试管种的制作其实很简单，在我们要用种的前三个月，到市场上去看哪个菇符合要求，就买回来（也可以用自己保存的试管种均可）。在接种箱内进行常规气雾（最好是高锰酸钾和甲醛）消毒，30分钟后，开始分离。分离时先将用具消毒，然后用手把菇体分开，用镊子夹一小块菇肉（不同的菇取种位置不同），放到试管里。塞上棉塞就行了。这样的成功率一般在80%以上。在菌丝生长阶段，要经常观察菌丝的生长情况。对菌丝生长不整齐的，有污染的，全部淘汰。只留下没什么问题的，长满试管后，再取特定部位进行转管（见实操）。菌丝长到*cm时，从菌丝生长的尖端提取一小块，一般地认为，取*大小就可以了，不过从试验上看，提得*效果越好。平菇一般提二次就可以了，提到五次，基本上与脱毒菌种效果差不多。别的品种要多些，最多不超过五次，都可以达到提纯的目的。（二）三角瓶专用母种生产：专用母种分固体和液体两种。从生产技术上看，液体专用母种要难一些，是用电磁搅拌器或摇瓶机进行生产。整个过程要4-7天时间，生产的液体种稍经加工就可以直接使用。液体菌种专用母种的配方就是用PDA加富配方去掉琼脂。用三角瓶盛装，在高压锅里121保持30分钟就行了。待三角瓶的温度降到30以下时，在超净工作台或接种箱内进行接种。马上就可以进行搅拌或摇瓶了。固体种生产时间要长些，保存的时间也长，而且方便运输。固体专用母种一般污染要严重一些，有的人污染率要达到20-30左右。固体专用母种我们现在一般不用，污染率太高，而且不好发现，最糟糕的是容易堵枪。配方是把木屑过20-40目的筛，用去掉琼脂的PDA配方拌料，在121高压下灭菌2小时，待温度下降到30度以下时，在超净工作台或接种箱内进行常规接种。一般20多天可以长好。具有运输和贮存方便等特点。搅拌器是应用磁性材料N、S极的异性吸引，同性相斥的原理制成的。工作时，机械的磁转子转动时，瓶内的磁转子在瓶内跟着转，带动液体旋转，为液体供氧。液体菌种培养基本条件是有一定的氧气、菌丝、水份和营养，几个因素溶合才能使菌丝快速繁殖。由于转子的高速旋转，产生的菌丝被剪切成菌丝片段。摇瓶机就是通过摇动液体，使空气与水溶合，增加液体中的氧气含量。通过摇动，液体在瓶内翻滚，使菌丝滚动成菌球。我们用液体专用母种。 （三）发酵罐生产 生产时要先进行培养料的配制。配料时先将土豆去皮切片，与麸皮混合后用不锈钢锅煮熟并取汁，再将辅料KH2PO4、MgSO4等溶入，混匀后装入罐中，也可将免煮培养基或公司提供的专用培养基直接加入到罐内加热灭菌，125维持40分钟到一小时进行灭菌，灭菌结束后用冷水冷却至30以下。将并瓶后的三角瓶专用种在火焰的保护下接到罐内进行培养，培养时根据不同的菌种，设定适宜的温度。 培养期间应注意观察菌球出现的时间、颜色和排出气体的气味等，压力控制在*Mpa。如遇到停电，关闭排气阀来保持罐中处于正压状态。来电后重新启动，并打开排气阀继续培养。培养过程中，可随时采样分析，几天后待菌球密度符合要求时（从视镜或排料观察），即可接种。（四）接种液体菌种生产结束后，在检测合格的情况下，就要进行接种。接种前要先将接种枪、连接管道用棉花塞上，放到高压锅里进行灭菌。1212