枇杷叶对吸烟小鼠影响实验.doc

一、主要研究内容（研究目的、意义、技术经济价值）：（一）研究目的： 通过初步探讨枇杷叶水煎液对被动吸烟所致小鼠慢性支气管炎模型的干扰，来判定枇杷叶水煎液对被动吸烟所致慢性支气管炎的预防作用。（二）研究意义： 我国是烟草生产和消费大国，现有烟民3.5亿人，但遭受被动吸烟的人数高达5.4亿，每年有10万人死于吸烟。被动吸烟，即二手烟，也称为环境烟草烟（ETS）。二手烟既包括吸烟者吐出的主流烟雾，也包括从纸烟、雪茄或烟斗中直接冒出的侧流烟。二手烟中的有害成分包括一氧化碳、尼古丁等生物碱、胺类、腈类、醇类、酚类、烷烃、烯烃、羰基化合物、氮氧化物、多环芳烃、杂环族化合物、重金属元素、有机农药等。他们具有多种生物学作用，包括： 1对呼吸道粘膜产生炎症刺激：如醛类、氮氧化物、烯烃类。 2对细胞产生毒性作用：如腈类、胺类、重金属元素。 3使人产生成瘾作用：如尼古丁等生物碱。4对人体具有致癌作用：如多环芳烃的苯并芘以及镉、二甲基亚硝 胺、-萘胺等。5对人体具有促癌作用：如酚类化合物。6使红血球失去荷氧能力：如一氧化碳。 被动吸烟对婴幼儿、青少年及妇女的危害尤为严重。对儿童来说， 被动吸烟可以引起呼吸道症状和疾病，并且影响正常的生长发育；对 于孕妇来说，被动吸烟会导致死胎、流产和低出生体重儿；被动吸烟亦 会增加成人呼吸道疾病、肺癌和心血管疾病发病的危险。 枇杷叶系蔷薇科枇杷属植物枇杷的干燥叶，是一味常用中药，收载 于历版中国药典供医药临床使用。枇杷叶归肺、胃经，具有清肺止 咳、降逆止呕作用，用于治疗肺热咳嗽、气逆喘气、胃热呕逆、烦热口 渴之症状。枇杷叶价格低廉，随处可见，又对清肺有很好的效果，具有 极大的利用价值 。 鉴于中医学理论提示，枇杷叶可能对慢性支气管炎有防治作用。本 课题就此初步探讨枇杷叶对慢性支气管炎小鼠模型的干扰效果，判定枇 杷叶对慢性支气管炎是否具有预防作用，为慢性支气管炎的预防提供一 定的实验数据，同时为进一步拓展中药的利用提供一条思路。（三）技术经济价值： 中医认为“不治已病，而治未病”，未病先防,就是在疾病未发生之 前，做好各种预防工作, 以防止疾病的发生。如今，因被动吸烟而患慢 性支气管炎的人越来越多，治疗费用非常昂贵，最重要的是该病极难彻 底治愈，因此我们更应当重视疾病的预防。而枇杷叶广布全国各省，全 年可采，且鲜枇杷叶偏于清肺止咳，解毒，更有利于肺部疾病的治疗， 又无须经过特殊处理便可使用，能更方便于预防慢性支气管炎的发生。 这样不仅能使因被动吸烟致慢性支气管炎的发生率大大降低，还可以节 省医疗资源。二、国内外现状、水平及发展趋势： 枇杷叶系蔷薇科枇杷属植物枇杷的干燥叶，是一味常用中药，收载 于历版中国药典供医药临床使用。枇杷叶归肺、胃经，具有清肺止 咳、降逆止呕作用，用于治疗肺热咳嗽、气逆喘气、烦热口渴之症状。 近年来，国内外对枇杷叶的化学成分和药理作用研究较多，结果显 示已经分离得到的化学成分有三萜酸、黄酮类、多酚、倍半萜及其苷类， 其药效主要集中在三萜酸的抗炎、止咳、降血糖和抗病毒等方面。目前， 日本科学家发现其新三萜皂苷具有抗癌活性。 1.枇杷叶的抗炎、镇咳作用：从枇杷叶中分离到的乌苏酸、2-羟基齐 墩果酸和总三萜酸对二甲苯引起的小鼠耳肿胀有明显抑制作用，显示了 抗炎活性。乌苏酸、总三萜酸对豚鼠显示止咳作用。枇杷叶中含苦杏仁 苷，在体内缓慢分解出氢氰酸有止咳作用。 2降血糖作用：三萜酸类成分2-羟基乌苏酸对糖尿病小鼠有降血糖 作用，总三萜酸类成分能明显降低正常及四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖。3抗病毒及其它：三萜酸类成分对EBV-EA病毒显示活性，醋酸乙脂 提取物对白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、福式痢疾杆菌 有抑制作用。枇杷叶中多酚类对人类口腔肿瘤具有细胞毒性作用。 从上述可知，枇杷叶作为传统中药，其止咳作用已被人们所熟悉利 用。本课题旨在针对枇杷叶对慢性支气管炎小鼠模型的预防的初步探 讨，通过采集和分析枇杷叶对慢性支气管炎小鼠模型干扰影响的数据， 来探讨枇杷叶对慢性支气管炎的预防效果，为进一步合理利用枇杷叶提 供一定的实验依据。三、研究的阶段性目标、最终目标及采用的实验方法：（一）研究目标： 通过采集和分析枇杷叶对被动吸烟小鼠慢性支气管炎模型的干扰 因素，判定枇杷叶汤剂对被动吸烟小鼠慢性支气管炎模型的是否具有预 防效果。（二）最终目标： 课题结束后，经整理、分析、撰写论文一篇，拟在相关刊物上发表， 并继续申请高一级的课题。（三）实验方法： 1.实验材料:1.1、实验动物：清洁级昆明小鼠60只，体重16-20g，雌雄各半。1.2、实验药物：枇杷叶水煎液，每次每只用量为1ml。1.3、实验材料和场所：均由学校提供。 2.实验步骤： 2.1、实验分组：将60只雌雄小鼠随机分为实验组I（吸烟，不灌服 枇杷叶水煎液）、实验组II（吸烟，灌服枇杷叶水煎液）、空白 组（不吸烟，不灌服枇杷叶水煎液），每组20只，雌雄各10只， 三组其它饲养条件相同。 2.2、实验造模：将实验组、II 组小鼠分别放入10000ml下口瓶中， 瓶盖留有直径1.5cm的通气孔，下口连接一个三通管，另两端 分别连接50ml注射器及点燃的香烟（中国龙岩卷烟厂生产的“福 建”香烟），用注射器通过三通管连续吸注香烟烟雾，每次400ml （瓶中烟雾浓度约为4%），烟熏30min，前10天，每天烟熏两次， 间隔约6h，后10天每天下午烟熏1次，连续30次，全程20d. 2.3、实验给药：给烟同期，给实验II组小鼠灌服枇杷叶汤剂1mL， 给实验组和空白组小鼠灌服0.9生理盐水1mL，每天两次， 间隔约6h，全程20d. 2.4、病理形态学观察及采集数据： 2.4.1、 将三组小鼠同时活杀，取同部位肺组织用10%福尔马林固定， 石蜡包埋、切片，HE常规染色，光镜观察。观察内容有正常气 管及各级支气管上皮纤毛、杯状细胞数量、是否有炎细胞浸润。 2.4.2、每组各选取2只小鼠同部位肺组织用2.5%戊二醛