白血病淋巴瘤免疫分型PPT课件

多参数流式细胞仪在白血病 淋巴瘤免疫分型的应用 1 流式细胞术 流式细胞术 FlowCytometry FCM 利用流式细胞仪对处在快速直线流动状态中的单细胞或者生物微粒进行多参数 快速定量分析 同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术 流式细胞仪 FlowCytometer 集激光技术 电子物理技术 光电测量技术 电子计算机技术 细胞荧光化学技术 单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器 2 3 FACS的工作原理 4 荧光补偿 5 Before After 6 设门 gating 是流式细胞仪分析中的一种重要技术 只有通过最佳的设门方式 才能准确地获取和分析 设门 是指在细胞分布图中 根据该图的细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群 通过 设门 得到不同的区域 Region 从而对其中的细胞进行单参数或多参数分析 为什么进行设门 7 8 正常BM各系细胞比率 淋巴 20 30 T 70 B 20 NK 10 单核 2 6 粒细胞 40 60 有核红 50 FCM的主要测定指标 FSC SSC FL1 FL2 FL3 FL4 FSC 反应细胞的大小 SSC 反应细胞内颗粒的多少 FCM设门法 FSC SSC 缺点 不能将淋巴 单核及幼稚细胞区分开CD45 SSC CD45是WBC抗原 RBC Plt为阴性 CD45在成熟细胞表达强 幼稚细胞表达弱 在淋巴 单核及粒细胞表达强度不同 优点 能将淋巴 单核及幼稚细胞区分开 特异分析白血病细胞免疫表型 9 讨论内容 FACS在血液病诊断中的应用FACS在白血病MRD检测中的应用 10 骨髓细胞发育不同阶段相应抗原的表达 11 骨髓细胞发育不同阶段相应抗原的表达 12 骨髓细胞发育不同阶段相应抗原的表达 13 14 AML免疫表型分析 理想的AL免疫分型方案应满足以下几点要求 识别白血病细胞 能将其与正常细胞或反应性细胞相区别 鉴别白血病细胞的系列来源 根据细胞的分化程度对疾病进行亚型分型 鉴别用于检测MRD的白血病相关免疫表型 LAIP 帮助判断某些特异分子改变 即基因型检测 提供预后相关及治疗靶点的免疫标志检测结果 15 AML免疫表型分析 16 AML免疫表型分析 17 18 初治急白分型 AcuteLeukemia BlastsPresent 20 红系和巨核系的鉴定需要另外增加二线抗体 如 CD71 GPA CD41 CD61 19 急性未分化白血病 AUL 急性未分化型白血病的主要特点 原始细胞没有髓系分化的形态学特征 基本不表达任何已知系列的膜标志物 缺乏T或髓系的特异标志 如cCD3和MPO等 也不表达B系特异标志 如cCD22 CD79a或是CD19等 同时也不表达巨核细胞 浆细胞和DC的特异标志 只表达HLA DR CD34或CD38 TDT也是可阳性的 20 急性髓系白血病微分化型 从左图CD45和SSC二维散点图中 可以看出有两群细胞 R1和R2 R2的CD45表达比淋巴弱 SSC也小 与单核细胞接近 通过分析可以得出 1 不表达CD5 CD7 CD10 CD19 CD14 CD36 GLyA 2 表达HLA DR CD13 CD33 CD34 CD33 3 弱表达CD38 由于CD33阳性强度大于CD13 CD34 HLA DR CD38阳性强度低 而髓过氧化物酶阳性 结合以上情况 提示这部分细胞属于分化较差的髓系细胞 21 急性髓系白血病未分化型 22 急性髓系白血病成熟型 从左图CD45和SSC二维散点图中 可以看出有四群细胞 R1 R5 原始细胞R2的CD45表达比淋巴R1弱 SSC比淋巴细胞大 幼稚或成熟粒增加 通过分析原始细胞R2可以得出 1 不表达CD5 CD8 CD61 CD36 GLyA 2 表达HLA DR CD13 CD33 CD34 CD38 CD7 3 弱表达CD4 结合以上情况 符合急性髓系白血病成熟型 23 急性髓系白血病成熟型 24 急性早幼粒白血病 从左图CD45和SSC二维散点图中 可以看出有两群细胞 R1和R2 通过分析原始细胞R2可以得出 1 不表达HLA DR CD34 CD14 CD36 GLyA 2 表达CD13 CD33 MPO 3 增加二线抗体 可见CD11a CD11b CD18 CD64表达 而粒系标志CD15和CD65弱表达或不表达 结合以上情况 符合急性早幼粒白血病 25 急性早幼粒白血病 26 急性粒单白血病 从左图CD45和SSC二维散点图中 可以看出有三群细胞 R1 R3 通过分析原始细胞R2 92 1 可以得出 1 不表达CD61 CD36 GLyA 2 表达HLA DR CD34和CD14 部分表达 CD38 CD13 CD33 3 弱表达CD4 CD33表达比CD13高 结合临床情况 符合急性粒单白血病 27 急性白血病 从左图CD45和SSC二维散点图中 可以看出有三群细胞 R1 R3 通过分析原始细胞R2 92 1 可以得出 1 不表达CD61 CD36 GLyA 2 表达HLA DR CD34和CD14 部分表达 CD38 CD13 CD33 3 弱表达CD4 CD33表达比CD13高 结合临床情况 符合急性粒单白血病 28 急性单核细胞白血病 从左图CD45和SSC二维散点图中 可以看出R1为成熟淋巴细胞 R3为粒系 R4为红系 CD36 GLyA R5为原始细胞区域比例较低 而R2所占比例较大 通过分析得出 1 CD45表达较强 SSC较大 为单核系的特点 2 R2表达HLA DR CD4和CD14 部分表达 CD36 CD38 CD13 CD33 3 不表达CD8 GLyA 结合临床情况 符合急性单核细胞白血病 29 急性单核细胞白血病 30 急性巨核细胞白血病 从左图CD45和SSC二维散点图中 R4群的异常细胞有较大的SSC 并且CD45低 通过分析此类细胞得出 1 不表达CD3 CD5 CD7 CD10 CD14 CD19 CD38 CD79a HLA DR MPO CD15和CD64 2 R2表达CD42a和CD61 CD34 CD13 CD33 结合临床情况 符合原始巨核细胞的免疫表型 31 急性巨核细胞白血病 32 初治急淋分型 CommonThymocyte MatureThymocyte CD2 CD5 DualCD4 CD8 sCD3 CD2 CD5 CD4 orCD8 sCD3 CD2 CD5 sCD3 CD4 CD8 TdT CD10 clg sig Pre B CD10 cig TdT sig B sig CD10 clg TdT Common TdT CD10 clg sig EarlyThymocyte EarlyB Precursor 33 B 髓系MPAL和T 髓系MPAL 异常细胞的SSC较小 CD45弱表达 似有原淋的特点 此类细胞的免疫标志 1 表达cCD22 mCD22 CD19 CD13 CD33 部分表达 或者表达cCD3 CD5 CD7 CD20 等 2 弱表达CD15 MPO 3 不表达CD10 CD11c CD14 CD42a CD64等 34 B原淋巴细胞白血病 淋巴瘤 35 B原淋巴细胞白血病 淋巴瘤 36 T原始淋巴细胞白血病 淋巴瘤 37 T原始淋巴细胞白血病 淋巴瘤 38 CLL SLL和LPL 39 浆细胞淋巴瘤 40 41 42 慢淋和B淋巴瘤分类 CLLandNon HodgkinsLymphoma CD5 CD10 CD10 FollicularCellOrBurkitt sLymphoma SLVLorMarginalZoneLymphomaorHairyCellLeukemia CD5 B CLLorMantleCellLymphoma MCL t 11 14 NCCN要求对所有CLL患者检测t 11 14 或CCND1表达 43 Burkitt淋巴瘤和滤泡淋巴瘤 44 评估慢性淋巴增殖性疾病 CLD 的抗体 First CD5 CD19 kappa lamdaCD3 CD20 CD23 CD10 CD45B cell CD22 FMC7 CD11c CD103 CD138CD38 CD25 CD79b 约12 15Ab T cell CD4 CD7 CD8 CD2 CD56 CD16 TCR TCR 特殊用途 CD30 bcl 2 TdT CD1a CD34 CD71Total 约12 16个 b 45 CLLandNon HodgkinsLymphoma NKLGL CD2 CD3 T CellLineage CD38 CD2 CD19 PlasmaCellLeukemia Myeloma B CellLineage CD19 ClonalIg CD16 and orCD56 CD2 CD3 CD4 T CellCLLT CellLymphomaT PLL ATLL AdultT CellLeukemia T CellLGLL CD8 CD7 SezarySyndrome 慢淋和T淋巴瘤分类 46 FACS检测浆细胞疾病 八色FACS标记 CD38 CD138 CD45 CD19 CD56 cyIgkappa cyIgLamda 47 多发性骨髓瘤 MM 多发性骨髓瘤是浆细胞异常增生性疾病 正常浆细胞为CD38 CD45dim 使用CD38 CD45双标记检测外周血和骨髓标本 可以准确划定浆细胞群 通常使用CD38和CD45 结合轻链检查 对多发性骨髓瘤细胞进行分析 另外 正常浆细胞的表面标记为CD19 CD56 而多发性骨髓瘤细胞通常为CD19 CD56 CD138目前认为是浆细胞最特异的指标 这样 使用流式细胞仪对外周血或骨髓标本进行多参数分析 并计算异常浆细胞含量 对于多发性骨髓瘤的诊断和治疗评估具有重要意义 48 49 50 51 急性白血病模板 52 皮肤淋巴瘤模板 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 白血病免疫分型的价值 确定ALL的细胞类型 B细胞或T细胞 和ALL的分化阶段 鉴定AML的特征 对形态学上未分化的急性白血病有助于鉴定细胞类型 诊断一些少见类型的白血病 如 M6 M7 M0等 64 诊断双表型 混合细胞型急性白血病 鉴别诊断ALL伴有髓系抗原表达 My 或AML伴有淋系抗原表达 Ly 鉴别急性白血病与其他造血系统和非造血系统恶性肿瘤 根据一些特殊的免疫表型特征诊断与某核型异常相关的亚型 如 M3 t 15 17 M2 t 8 21 M4Eo inv 16 等 65 白血病细胞微小残留检测 66 67 68 69 70 71 72 73 流式免疫表型诊断血液肿瘤的劣势 1 纤维化 硬化的骨髓可能没有足够的细胞分析 2 细胞太多聚集或成团也可能没有足够的分析细胞 3