乳腺癌中HER-2检测ppt课件

1 乳腺癌病理诊断规范中的几个问题 2 一 乳腺肿瘤WHO分类及预后肿瘤名称后的编码为 肿瘤学国际疾病分类编码 ICD O 生物学行为编码为 0为良性肿瘤 1为交界性或生物学行为未定肿瘤 2为原位癌或上皮内肿瘤 级 3为恶性肿瘤 3 1 上皮性肿瘤1 1浸润性导管癌 非特殊性 310年生存率35 50 1 1 1混合性癌1 1 2多型性癌1 1 3伴有破骨巨细胞的癌1 1 4伴有绒癌特征的癌1 1 5伴有黑色素特征的癌1 2浸润性小叶癌 3 预后与浸润性导管癌相似 1 3小管癌 3 预后极佳 与同龄无乳腺癌妇女相似 1 4浸润性筛状癌 3 预后极佳 10年生存率90 100 1 5髓样癌 合体细胞生长结构 75 没有腺管结构 中度 明显弥漫淋巴细胞浸润 中度 明显核多形性 完整的肿瘤组织学边界 3 预后比浸润性导管癌好 10年生存率50 90 1 6黏液癌及其他富于黏液的肿瘤 3 10年生存率80 100 1 6 1黏液癌1 6 2囊腺癌和柱状细胞黏液癌1 6 3印戒细胞癌 4 1 7神经内分泌肿瘤 3 组织学级别是最重要的预后指标之一 1 7 1实性神经内分泌癌1 7 2非典型类癌1 7 3小细胞 燕麦细胞癌1 7 4大细胞神经内分泌癌1 8浸润性乳头状癌 3 预后较好 1 9浸润性微乳头状癌 3 预后与血管浸润 腋窝淋巴结转移有关 1 10大汗腺癌 3 预后与非大汗腺癌无差别 1 11化生性癌 31 11 1纯上皮化生性癌 3 大部分病例预后非常好 1 11 1 1鳞状细胞癌1 11 1 2伴有梭形细胞化生的腺癌1 11 1 3腺鳞癌1 11 1 4黏液表皮样癌1 11 2上皮 间叶混合性癌 3 高度侵袭性 5 1 12富于脂质的癌 3 不详 1 13分泌性癌 3 在儿童和青少年有极好的预后 在年长患者有浸润性行为 1 14嗜酸细胞癌 3 不详 1 15腺样囊性癌 3 低度恶性 单纯切除可治愈 1 16腺泡细胞癌 3 不详 1 17富于糖原的透明细胞癌 3 比浸润性导管癌更具有侵袭性 1 18皮脂腺癌 3 不详 1 19炎症性癌 3 5年存活率25 50 1 20小叶肿瘤1 20 1小叶原位癌 21 21导管内增生性病变1 21 1通常型导管增生1 21 2平坦型上皮非典型增生 DIN1A 1 21 3非典型导管增生 DIN1B 1 21 4导管原位癌 2 包括DIN1C DIN2 DIN3或DCIS1级 DCIS2级 DCIS3级 6 1 22微小浸润导管癌 无编码 极少淋巴结转移 临床按DCIS处理 1 23导管内乳头状肿瘤1 23 1中心型乳头状瘤 01 23 2外周型乳头状瘤 01 23 3非典型乳头状瘤1 23 4导管内乳头状癌 21 23 5囊内乳头状癌 21 24良性上皮增生1 24 1包括各种类型腺病1 24 1 1硬化腺病1 24 1 2大汗腺腺病1 24 1 3盲管腺病1 24 1 4微腺管腺病1 24 1 5腺肌上皮腺病1 24 2放射性瘢痕 复合性硬化性病变1 24 3腺瘤1 24 3 1管状腺瘤 01 24 3 2泌乳腺瘤 01 24 3 3大汗腺腺瘤 01 24 3 4多型性腺瘤 01 24 3 5导管腺瘤 0 7 2 腺肌上皮病变2 1肌上皮增生2 2腺肌上皮腺病2 3腺肌上皮瘤 02 4恶性肌上皮瘤 3 极少发生局部复发或远处转移 3 间叶肿瘤3 1血管瘤 03 2血管瘤病3 3血管周细胞瘤 13 4假血管瘤样间质增生3 5肌纤维母细胞瘤 03 6纤维瘤病 侵袭性 13 7炎症性肌纤维母细胞瘤 13 8脂肪瘤 03 8 1血管脂肪瘤 03 9颗粒细胞瘤 03 10神经纤维瘤 03 11神经鞘瘤 03 12血管肉瘤 33 13脂肪肉瘤 33 14横纹肌肉瘤 33 15骨肉瘤 33 16平滑肌瘤 03 17平滑肌肉瘤 3 8 4 纤维上皮性肿瘤4 1纤维腺瘤 04 2叶状肿瘤 1 良性 恶性均可复发 4 2 1良性 04 2 2交界性 14 2 3恶性 34 3导管周围间质肉瘤 低级别 34 4乳腺错构瘤5 乳头肿瘤5 1乳头腺瘤 05 2汗腺瘤样腺瘤 05 3乳头派杰病 3 预后取决于在其下方是否存在导管内癌和乳腺深部组织的浸润癌 6 恶性淋巴瘤6 1弥漫大B细胞淋巴瘤 36 2Burkitt淋巴瘤 36 3结外MALT型边缘区B细胞淋巴瘤 36 4滤泡型淋巴瘤 37 转移性肿瘤8 男性乳腺肿瘤8 1男性乳腺发育8 2癌8 2 1浸润癌 3 预后与女性乳腺癌相似 8 2 2原位癌 2 9 二 规范的病理报告内容 10 1 标本名称 肿块切除 单纯乳房切除 乳腺癌改良根治 乳腺癌根治 2 手术部位3 组织学类型4 分级 级 5 肿块大小 cm 6 血管 淋巴管侵犯情况7 乳头是否受累8 腋下淋巴结转移情况9 ER PR c erbB 2等免疫组化检测情况 11 分级方法对3项肿瘤主要特征进行评判 表现腺体分化的腺管形成 核多形性以及核分裂计数 应用1 3计分系统对每个因素进行独立的评估 将3组数值加在一起 可得到3 9的积分结果 其相应的组织学级别如下 级 grade1 高分化 3 5分 级 grade2 中分化 6 7分 级 grade3 低分化 8 9分 12 13 免疫组化标记分为两类 A 诊断用标记 如CD23 CD5 bcl 10 CD10 CK pan CK18 CK20desmin a SMA HHF 35 此类标记结果只分 不须划分等级 供病理科医生诊断或鉴别诊断用 B 治疗用或预后用标记 如ER PR cerbB 2 P gp GST Topo TS P63 P53 P27 P21 此类标记结果不能只分 必须划分等级 应分为 临床医生据此指导化疗用药和判断预后 14 各家医院检测结果不一致的原因1 病理医生经验不足 尤其是对每一种抗体的准确的阳性定位 细胞膜 细胞浆 细胞核 缺乏足够的认识 从而发生错误判断 例如 ER应定位在细胞核 PR定位在细胞核 C erbB 2应定位在细胞膜 2 免疫组化的实验操作不规范 3 组织标本固定不当 此与临床医生有关 4 组织脱水处理不当 机器质量差 试剂未及时更换 程序未调到最佳状态 15 C erbB 2细胞浆表达 16 ER浆表达 ER浆表达 ER 17 PR 18 三 乳腺癌中HER 2的检测及其临床意义 19 一 HER 2概况 Her 2 又名C erbB 2 Her 2 neu定位于17q12 1 21 Her 2属于EGFR家族成员 为原癌基因 编码185KD的跨膜型酪氨酸激酶生长因子受体 现有研究表明 在30 以上的人类肿瘤中存在Her 2基因的扩增 过度表达 如乳腺癌 卵巢癌 子宫内膜癌 输卵管癌 胃癌和前列腺癌等 其中25 30 的乳腺癌为Her 2基因的扩增 过度表达 20 国外文献报道的乳腺肿瘤HER2阳性情况 HER2StudynStagepositive Ross 2003 5003 22Owens 2004 6556 24Ross 2003 279 26Penault Llorca 2005 699 30 21 二 HER 2 neu癌基因的致瘤机制 抑制凋亡 促进增殖 HER 2过表达通过PI3K AKT和Ras Raf MEK MAPK通路抑制野生型P53蛋白 促进P21waf1 cip1蛋白表达 增加肿瘤细胞的侵袭力 HER 2下调和阻断粘附分子整合蛋白 CD44等蛋白表达及粘附功能 促进肿瘤血管新生和淋巴管新生HER 2过表达上调血管 淋巴管新生调控因子VEGF A C D表达 22 三 乳腺癌中HER 2扩增 过度表达的临床意义 23 1987年Slamon等首次报道乳腺癌原癌基因HER 2的扩增 导致肿瘤易复发 与患者总生存期短密切相关 SlamonDJ etal Science 1987 235 4785 177 82 24 HER2阳性患者的生存期比正常者缩短一半以上 转移性乳腺癌患者的中位生存期 HER2阳性8 10个月HER2阴性17 22个月 SlamonDJetal Science1987 235 177 82 25 一 无病生存期和总生存期短相关 肿瘤预后差 在多变量分析结果中 HER2是肿瘤复发和总生存期长短的独立预后因素复发率 P 0 001 总生存 P 0 02 至今为止已有国内外数百篇文献研究HER 2与乳腺癌的关系 国外八十多篇文献报道报道HER 2扩增 过表达与患者预后差相关 Her 2是目前公认的一个乳腺癌重要的预后 预测因子 26 1 000 750 500 250 累计生存率 024487296120144 无扩增 扩增 基因扩增 10拷贝数无基因扩增 3拷贝数临界值 不包括 死亡时间 月数 Logrankp 0 001 RossJS FletcherJA StemCells1998 16 413 428 HER2阳性状态的患者无病生存期缩短 淋巴结阴性 SeshadriRetal JClinOncol1993 11 1936 42 100806040200 0122436486072 无病生存概率 死亡时间 月数 HER2基因 3拷贝数 HER2基因 3拷贝数 对数秩检验p 0 001 淋巴结阳性 27 2005年St Gallen指南乳腺癌危险度分级 低度危险 LN 且 标本中病灶大小 pT 2CM 分级1级 瘤周脉管未见肿瘤侵犯 HER2基因没有过度表达或扩增 年龄 35岁 28 2005年St Gallen指南乳腺癌危险度分级 中度危险 LN 阴性且有下列至少一条标本中病灶大小 pT 2CM分级2 3级有瘤周脉管肿瘤侵犯HER2过度表达或扩增年龄 35岁 LN1 3个 且未见HER2过度表达或扩增高度危险 LN1 3个 且HER2过度表达或扩增 LN4个及以上 29 二 HER2阳性状态可以预示肿瘤对常规治疗的反应情况 内分泌治疗HER2阳性患者相对耐药 CMF方案HER2阳性患者相对耐药 蒽环类对大剂量蒽环类相对敏感 紫杉类药物相对敏感 30 三 靶向Her 2的人源化单抗 赫赛汀 31 赫赛汀 靶向HER2的人源化单抗 用于治疗HER2阳性乳腺癌生存率提高达45 疗效改善并持续维持生活质量 95 人源化 5 鼠抗 具有高度亲和性 Kd 0 1nM 和特异性 显著降低免疫原性 HAMA 32 四 Her 2阳性状态的检测方法 33 一 组织标本的制备注意环节 1 标本的类型 新鲜标本 针吸活检标本 粗针穿刺标本 外科手术标本细针穿刺液基细胞111例IHC CISH与FISH检测一致的乳腺癌中 53例FNAs 切除外科标本 与组织病理标本结果高度一致 VocaturoA NovelliF etal Oncologist 2006Sep 11 8 878 86 34 HER2表达在原发肿瘤和转移灶呈高度一致 StudyPercentageIHCoverexpressionPrimarytumorsMetastasesMasood Bui 2000 32 32 Shimizuetal 2000 38 38 Simonetal 2001 25 22 Tanneretal 2001 28 28 Gancbergetal 2002 29 27 Vincent Salomonetal 2002 25 20 Tsutsuietal 2002 25 25 Carlssonetal 2004 55 55 35 2 标本的固定 1 取材到固定时间 1小时 2 固定时间6 48时间 一般不超过24小时 3 固定液10 中性福尔马林固定液 36 3 标本的取材 5mm4 组织蜡块和组织切片 1 切片后不宜置于恒温时间过长 4 6周 2 厚度IHC3 5umCISH FISH4 5um 37 二 常用检测方法 1 免疫组化 IHC 检测Her 2蛋白表达 1 抗原修复 95 99 EDTA 1mMpH80 或枸橼酸钠 0 05MpH6 0 38 2 常用IHC检测的抗体 试剂盒 HercepTest 美国FDA批准用于临床诊断 39 40 CB11或4D5 HerceptTest HerceptTest CB11或4D5 FISH HerceptTest 19 20 FISH HerceptTest 5 FISH IHC 3例 GouveaAP MilaneziF etal ApplImmunohistochemMolMorphol 2006Mar 14 1 103 8 41 3 结果判读 注意点 计数胞膜完全着色的细胞比例及着色强度 胞浆着色忽略不计 评定浸润部位的着色情况 正常上皮细胞不应着色 42 染色形态评分染色图例完全没有染色或是肿瘤细胞中0少于10 肿瘤细胞有细胞膜染色大于10 的肿瘤细胞有呈现清淡地 1 稍微地并且是不完整的细胞膜染色这些细胞只染在部分的细胞膜大于10 的肿瘤细胞有呈现2 轻度至中度的完整的细胞膜染色大于10 的肿瘤细胞有呈现3 强度的完整的细胞膜染色 HercepTestTM判读标准 43 0 1 3 2 免疫组织化学法0 3 评分系统Immunohistochemistry IHC 44 3 CerbB2 45 3 CerbB2 46 2 CerbB2 47 2 CerbB2 48 1 CerbB2 49 50 51 52 53 2 显色原位杂交 CISH 一种用碱性磷酸酶标记的探针 在甲醛固定 石蜡包埋组织切片上进行杂交 再用鼠抗地高辛抗体和辣根过氧化物酶抗鼠抗体进行免疫结合 DAB显色 普通光学显微镜观察有无基因扩增的异常信号的方法 CISH技术比FISH简单 试剂较便宜 不需昂贵的仪器设备 且可长期保存切片 54 1 所需主要设备 电炉 带温度计的高压锅或微波炉 原位PCR仪或原位杂交炉 37 温箱 亮视野显微镜 55 2 检测三大关键步骤 标本的加热预处理用电炉 15分钟98 100 所有载玻片必需全部浸入缓冲液 酶消化室温10分钟或37 3分钟 严格冲洗0 5xSSC 75 80 5分钟 56 过度酶消化 57 酶消化不够 58 恰当的酶消化 59 3 结果判读 无扩增 大于50 的肿瘤细胞中有1 5个信号点 低拷贝扩增 大于50 的肿瘤细胞核内有6 10个信号点 高拷贝扩增 大于50 的肿瘤细胞核内有大于10个信号点或者凝结成团块状 簇状粗颗粒信号 60 Adiploid triploidHER2copynumberisusuallyclear CISH检测无HER2基因扩增样本 61 CISH检测低扩增样本 62 Genecopyclusters 100 evidenceofgeneamplification CISH检测高扩增样本 63 HER2 CISH NoHER2amplification HER2amplification 64 3 荧光原位杂交 FISH 是一种通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交 在荧光显微镜下能原位显示细胞核内杂交信号的分子细胞遗传学技术 FISH技术用于检测基因扩增的准确性比其他检测技术高 可以避免由于染色体的多体而呈现的假阳性 故被誉