金线莲组织培养几种培养基的筛选.pdf

熬 带 农 业 科 技 2 0 04 2 7 3 金线莲组织培养几种培养基的筛选 一 1 2一 高 燕 白燕冰 赵 云 翔 云南省德宏热 带农业科学研 究所 云南 瑞 丽 6 7 8 6 O 0 摘要 用金线莲无菌幼苗带腋芽的茎段进行继代增殖培养 经试验筛选出适宜的培养基分别是继代增殖 培养基 h r 6 一 B A 2 0 m g L 一 I B A 0 2 m g L 一 N A A 0 4 m g L 一 K T 0 5 m g L 一 糖 3 A C 0 2 壮苗培 养基A r 1 O 马铃薯 1 O 香蕉 糖3 A C O 2 生根培养基A r I B A O 5 m g L t N A A O 5 m g L t 糖2 A C 0 2 生根炼苗时 移栽到腐殖 土 河沙 珍珠岩 比例为 7 2 1 的基质上 成活率达 9 8 以上 关键词 全线莲 茎尖培养 培养基 快速繁殖 中图分类号 s 5 6 7 2 3 9 文献标识码 B 文章编号 1 6 7 2 4 5 0 x 2 0 0 4 0 3 0 0 1 2 0 3 金 线莲 An o e e t o e h u s r o x b u r g h i h Wa l 1 L i n d l 又名金线兰 金线草 为兰科多年生草本植物 金 线莲属植物有4 0 多种 株高 8 2 0 c m 分 于海拔 3 0 0 l 2 0 0 m的I J I 地林下 阴湿处 l I 金线莲全草均 可人药 其昧平 甘 有清热凉血 祛风利湿 解 毒 止痛 镇 咳等功效 主治咯血 支气管炎 肾 炎 膀胱炎 糖尿病 血尿 风湿性关节炎 肿瘤 等疑难病症 素有 药王 金草 神药 乌 人参 等美称 据有关研究测定 金线莲 中的氨 基酸组成 成分含量及抗衰老活性微量元素 的含量 均高于 产和野生西洋参 金线 莲叶呈黑紫色 有光泽 墨绿色中有金黄色网纹 背面淡紫色 奇 特美丽 还是一种极具观赏价值的室内观叶植物珍 品 由于金线莲生态环境条件独特 自然繁殖率低 生长缓慢 特别是近年来市场需求量猛增 人为大 量采挖及其 自然环境的严重破坏 使得金线莲野生 资源 日渐枯竭 目前金线莲价格居高不下 鲜 草达 6 0 8 0元 k g 干草达 1 0 0 0 l 5 0 0元 k g 利用 组培技术快速 繁殖种苗 对金线莲的开发利用和野 生资源保护具有现实意义 笔者特将对金线莲组织 培养几种培养基筛选结果报道如下 1 材料与方法 1 1 材料 取金线莲幼嫩茎段为外植体 1 2 培养无 菌苗 取生长健 日 兀病虫害的金线莲幼嫩茎段 去 叶 放人低浓度的洗衣粉水中漂洗 3 5 mi n 然后 用 自来 水冲洗干 净 用 7 5 酒精灭菌 3 5 s 用 0 1 的Hg C I 灭菌 l 5 mi n 再用无菌水冲洗5 6 次 将 消毒好 的材料 切成有 l 2 节 带腋芽的茎段 接 种在 A r 6 一 B A l O mg L N A A 0 5 mg 培养基上 A r 为 M S 改 良培养基 大量元素减半 微量元素加 倍 p H5 8 蔗糖 2 琼脂粉 0 7 培养室温度 2 5 1 光照时问 8 1 O h d 光照强度 l 5 0 0 2 0 0 0I x 1 3 不同激素浓度继代增殖培养基 筛选 将分化 出的丛生芽分割转接到继代增殖培养基 上 培养基 A r 6 一 B A l 4 mg L N AA 0 1 0 8 m g L I B A 0 2 m g L K T 0 5 mg L 培养 基附加糖 3 琼脂粉 0 7 p H5 8 培养条件同 上 通过改变 B A和 N A A的浓度 共为7 个处理 每 个处理接种三瓶 每瓶5 个接种块 经继代增殖培 养 筛选培养基的最佳培养配方 1 4 不同添加物壮苗培养基筛选 将幼苗转接到 苗培养基上 培养基A r 加入或 不加入 l 0 马铃薯 l 0 香蕉等添加物 糖3 A C 0 2 培养基均加入琼脂粉 0 7 p i t 5 8 培养条 件同上 试验设培养基中添加 1 0 马铃薯 添加 l 0 香蕉 添加 l 0 马铃薯 1 0 香蕉 不添加马 铃薯和香蕉 对照 等4种处理 以筛选最佳添加 物 I 苗培养基配方 1 5 不同激素浓度对生根 的影响 不定芽伸长至 3 4 c m时 自基部切下 接种 到生根培养基上 培养基为 Ar N A A 0 1 2 O m g L I B A 0 2 0 5 m g L 糖 3 A C 0 2 培养 维普资讯 一 1 3一 基均加入琼脂粉0 7 p H5 8 共设 8 个处理 每 处理接种 5 瓶 每瓶接种 5 株 培养条件同上 以 筛选最佳的生根培养基 2 结果与分析 2 1 不同激素浓度对 不定 芽继代增殖 的影响 试验结果 表 1 培养 l 5 d 时 7 种处理有的 开始分化 出不定芽 6 0 d 后 7 个处理中以处理 B A 2 O N A A 0 4 I B A 0 2 K T 0 5 为最佳 分化 出的不 定芽为丛生状 日 多达9 0 个小 芽 生长粗牝 分化 率达 l 0 0 增殖倍数6 其次是处理 B A 2 O N A A 0 2 I B A 0 2 K T 0 5 不定 芽总数 8 1 个 生长粗壮 分化率 l 0 0 增殖倍数 5 4 而另外 5 个组合的不 定芽分化率和增殖倍数分别是 8 7 3 5 9 3 4 8 7 3 7 8 0 3 6 和 9 3 3 8 试验表 明 芽 的分化和增殖与 B A N A A浓度有密切关系 一定 量的B A N A A 对不定芽有促进分化和增殖的作用 2 2 不 同添 加 物对 幼 苗生 长 的影 响 培养6 0 d 后的观察结果 表2 表明 添加 l 0 马铃薯 香蕉等添加物能显著地促进幼苗的分化 熬 带 农 业 科 技 2 00 4 27 3 一 生长 各项分化 生长指标都明显高于对照 其中 以添加 l 0 马铃薯和 I O 香蕉的分化 生 长最好 其次为添加 l 0 香蕉和 l 0 马铃薯 的 然而污染 率也随加入添加物而增加 幼苗分化 生长愈好的 污染愈重 2 3 生根培养 当幼苗伸长到 3 4 c m高时从基部切下 转接 到生根培养基上 培养 6 0 d 后的观察结果 表 3 表 明 在处理 I B A 0 5 N AA 0 5和处理 I B A O 5 N A A 1 0的两种培养基上 l 2 d 后开始生根 6 0 d 后不定根的生根率达到 l 0 0 平均每株苗的根数 3 8 条或4 0 条 不定根平均伸长 2 8 c m或 3 1 c m 苗 生势粗 4 I 生长最好 而处理 的生根率分别 为8 7 和9 3 不定根少 幼苗生势弱 生长最差 可 以看出 一定量的I B A 和N A A 对不定根的诱导有 促进作用 2 4 移栽 幼苗在生根培养基上培养 5 0 6 0 d 长至 5 6 c m时 将瓶苗搬到温室大棚或阴凉通风处经 7 l 0 d的适应性炼苗 便可洗苗移栽 栽培基质以森 表1 不同激素浓度对不定芽分化的影响 培养 m g L 接种数 块 分化数 不定芽总数 个 分化毕 增 倍数 生长状况 1 6 B A 1 0 N A A 0 2 I B A 0 2 K T 0 5 2 6 B A 2 0 N A A 0 2 I B A 0 2 K T 0 5 6 一 B A 3 0 N A A 0 2 I B A 0 2 K T 0 5 4 6 一 B A 4 0 N A A 0 2 I B A 0 2 K T 0 5 6 一 队2 0 N A A 0 1 I B A 0 2 K T 0 5 16 6 B A 2 O 十 N A A 0 4 I B A 0 2 K T 0 5 c 7 6 B A 2 0 N A A 0 8 I B A 0 2 K T 0 5 1 5 1 5 1 5 1 5 1 5 1 5 l 5 1 3 1 5 1 4 1 3 1 2 1 5 1 4 45 81 5 7 4 8 43 90 5 3 8 7 1 O O 9 3 8 7 8 0 1 0 0 9 3 3 5 5 4 4 3 7 3 6 6 3 8 羊 l l 壮 较 弱 羊 l l l 较 表2 不同添加物对幼苗生长的影晌 维普资讯 热 带 农 业 科 技 2 0 04 2 7 3 林腐殖土 河沙 珍珠岩按7 2 l 的比例配制 用 l 2 的多菌灵或高锰酸钾液喷淋消毒 将生根 苗的培养基洗净 用 I 的多菌灵水浸泡 I O mi n 晾 干 移栽于消毒好 的基质上 用无纺布保湿 l 0 l 5 d 移栽成活率可达 9 8 以上 3 讨论 1 金线莲在继代增殖培养过程 中加入一定量 的K T 可促进芽 的分化和增殖 金线莲对6 一 B A 不敏 感 当培养基中的6 一 B A浓度达到 4 m g L 仍未 出 现畸形苗 但在培养过程中6 一 B A有积累效应 应 根据苗的生势确定 6 一 B A的用量 对金线莲的组培 快繁 的基本培养基 外源激素的浓度和添加物等 因 素的试验 表 明 A r 6 一 B A 2 0 NAA 0 4 I B A 0 2 K T 0 5是适 合 的继 代增殖 培养基 A r 糖 3 A C 2 的培养基添加 l O 香蕉和 l O 马铃薯 能显著促进幼 苗的分化 和生长 A r I B A 0 5 N A A 一 1 4 0 5 糖2 A C 0 2 是适于生根的培养基 2 金线莲炼苗时 对基质要求不严 腐殖土 河沙 珍珠岩等基质 成苗率可达 9 8 以上 但 虫 害为害严重 主要有毛毛虫 小螺丝 蜗牛啃食叶 片或幼嫩茎尖 植株慢慢枯死 因而 炼苗时要注 意防虫 或者避开高温高湿季节 虫害高发期 炼 苗 每年 l 0月至翌年 4月是最佳的炼苗季节 4致 谢 肖兵 季丽坤 李桂琳 胡永亮参加了部分研 究 I 作 谨此致谢 参 考 文 献 钟岑牛 金线莲的药用价值与开发 J l广西农业科学 1 9 9 7 2 1 0 2 f 2 1 珍稀中草药金线莲栽培技术 E B O L l中草药网 f 3 1 郑纯 等 金线莲的生物鉴定 J l中药材 1 9 9 7 2 0 1 1 l 5 2 2 5 2 4 表3 不同激素对生根的影响 S e l e c t i o n o n C u l t u r e M e d i u m o f T i s s u e Cu l t u r e f o r An o e c t o c h u s r o x b u r g h i h GAO y a n B AI Y a n b i n ZHAO Yu n x i a n g D e h o n g T r o p i c a l A g r ic u l t u r e R e s e a r c h I n s t it u t e o f Y u n n a n R u i l i 6 7 8 6 0 0 C h i n a Ab s t r a c t Th e c u l t u r e me d i u m s e l e c t i o n i S c a r r i e d o u t b y a s e p s i s s t e m s e g me n t wi t h a x i l l a b u d o f An o e c t o c h t l S r o x b u r g hi h Th e c u l t u r e me d i u m s a r e ma d e o f Ar 6 一 BA 2 0 mg L I BA O 2mg L NAA O 4 mg L KT 0 5 mg L 一 3 s u g a r 0 2 AC f o r mu l t i p l i c a t i o n Ar I O p O t a t O l O b a n a n a 3 s u g a r 0 2 AC t o g e t s t r o n g s e e d l i n g Ar I BA O 5 mg L NAA O 5 mg L 一 2 s u g a r 0 2 AC f o r r o o t a g e Th e s u r v i v i n g p e r